2.3 Спектрофотометрическое определение количественного содержания аскорбиновой кислоты (витамина с) в напитках.

Цель занятия: ознакомление с методом спектрофотометрического определения количественного содержания аскорбиновой кислоты (витамина С) в напитках.

Материалы и оборудование

1. Спектрофотометр UV–miniShimadzu(Япония) позволяющий проводить измерения при длинах волн от 200 до 900 нм, допустимая абсолютная погрешность измерения коэффициента пропускания - не более 1%.

2. Кюветы кварцевые для спектрофотометрии с длиной оптического пути 10 мм.   

3. Весы лабораторные по ГОСТ 24104с пределами абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0,1 мг.

4. Установка ультразвуковая с частотой ультразвука 43-45 кГц.          

5. Раствор соляной кислоты 2 %

6. Раствор 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия (раствор красителя)

7. Аскорбиновая кислота (АК) стандартный образец (ГФ Х1)

8. Солянокислый буфер рН 5,2. 

9. раствор соляной кислоты   1,0 М

10. раствор ацетата натрия 1,0 М

Приготовление 2 % раствора соляной кислоты

9,5 мл 36 % соляной кислоты помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл и доводят до метки дистиллированной водой

Приготовление стандартного раствора аскорбиновой кислоты

Растворяют 0,1000 г (точная навеска) аскорбиновой кислоты, отвечающей тре­бованиям ГФ XI, в мерной колбе вместимостью 100 мл в 2% рас­творе соляной кислоты и доводят тем же раствором до метки.

10 мл полученного раствора АК помеща­ют в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки 2% рас­твором соляной кислоты

Раствор готовят непосредственно перед применением.

Приготовление раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята

0,1000 г (точная навеска) 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия помещают в мерную колбу 500 мл, добавляют 250 мл свежекипяченой дистиллиро­ванной воды с температурой (90 ± 5)  °С, содержащей около 50 мг бикарбоната натрия в и тщательно перемешивают.

После охлаждения раствора до (20 ± 5) °С, доводят дистиллированной водой до метки и фильтруют через складчатый фильтр в склянку из темного стекла.

Раствор хранят при (6 ± 2) °С не более 1 месяца.

Приготовление 1,0 М раствора соляной кислоты

17,2 мл 36% соляной кислоты разбавляют дистиллированной водой в мерной колбе емкостью на 200 см³ и доводят до метки дистиллированной водой.

Приготовление 1,0 М раствора ацетата натрия

8,2 г безводного ацетата натрия растворяют в мерной колбе емкостью 100 мл дистиллированной водой и доводят до метки.

Приготовление солянокислого буфера с рН 5,2

К 4 мл 1,0 М раствора соляной кислоты приливают 20 мл 1,0 М раствора ацетата натрия и доводят до метки дистиллированной водой в мерной колбе емкостью 100 мл.

Проведение анализа

После дегазации на ультразвуковой бане и, если необходимо, фильтрования исследуемых напитков го­товят три раствора, добавляя реагенты в следующей последовательности таблица 2.3.1

Таблица 2.3.1

Последовательность добавления реагентов при спектрофотометрическом определении витамина С

Реагенты	Раствор №, мл
	1	2	3
	Контроль на реактивы	Стандарт	Исследуемый раствор
Солянокислый буфер (рН 5,2)	5,0	4,5	4,5
Напиток	-	-	0,5
Стандартный раствор аскорбиновой кислоты	-	0,5	-
Раствор 2,6-дихлор фенолиндофенолят натрия	1,0	1,0	1,0

Измеряют поглощение фенолята (избытка) в пробах № 2—3 при λ= 540 нм. Содержание АК (X), выраженное в мг на 1 л напитка рассчитывают по формуле:

,

где, К   - количество АК в 0,5 мл стандартного раствора, взятого на определение, мг; К= 0,05 мг;

D_1-3- величина поглощения исследуемого раствора №3 против поглощения фенолята в контроле на реактивы;

V_общ- общий объем исследуемого напитка, обычно его принимают равным 1000 мл;

D_1-2 - величина поглощения стандартного раствора №2 против поглощения фенолята в контроле на реактивы;

V_np- объем исследуемого напитка, взятый для спектрофотометрирования, в данном случае - 0,5 мл.

За окончательный результат определения принимают среднее арифметическое двух определений. Расхождение между двумя параллельными определениями не долж­но превышать 3% от среднего арифметического.

Чувствительность - 3 мкг АК в пробе.