Карабинцева Фармацевтическая технология методички / Краткий курс биотехнологии
.pdfОсновные отрасли применения биотехнологии
Отрасль |
Примеры |
Сельское хозяйПолучение новых штаммов, новые метоство ды селекции растений и животных
(включая клонирование).
Производство |
Получение органических кислот (напри- |
химических ве- |
мер, лимонной, итаконовой), использо- |
ществ |
вание ферментов в составе моющих |
|
средств, получение хим. продуктов, ис- |
|
пользующихся в быту (клеи, детергенты, |
|
красители, волокна, желатирующие ве- |
|
щества и загустители, душистые вещест- |
|
ва, пигменты, пластики, смазки, воски и |
|
пр.). |
|
|
Энергетика |
Увеличение потребления биогаза, круп- |
|
номасштабное производство этанола как |
|
жидкого топлива. |
|
|
Добыча мине- |
Выщелачивание руд, увеличение выхода |
рального сырья, |
нефти из нефтяных пластов. |
нефти |
|
Получение меди из вскрышных пород с использованием работы бактерий
Реннеберг Р., Реннеберг И. От пекарни до биофабрики. —
М.: Мир, 1991. — 112 с.
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
21
|
|
|
|
|
________________________________ |
||
|
|
Основные отрасли применения биотехнологии |
|
________________________________ |
|||
|
|
(продолжение) |
|
|
|
________________________________ |
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
Отрасль |
Примеры |
|
|||
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
||
|
Защита окружающей |
Биотехнологическая очистки сточных |
|
|
________________________________ |
||
|
среды |
вод, переработка неутилизуемых отхо- |
|
|
|||
|
|
|
дов сферы материального производст- |
|
|
________________________________ |
|
|
|
|
ва и коммунального хозяйства. |
|
|
||
|
Пищевая промыш- |
Создание новых методов переработки |
|
|
|
||
|
ленность |
и хранения пищевых продуктов, полу- |
|
|
________________________________ |
||
|
|
|
чение пищевых добавок (напр., поли- |
|
|
|
|
|
|
|
меров, продуцируемых микроорганиз- |
|
|
________________________________ |
|
|
|
|
мами АК), использование белка, син- |
|
|
||
|
|
|
тезируемого одноклеточными орга- |
|
|
|
|
|
|
|
низмами, и ферментов при переработ- |
|
|
________________________________ |
|
|
|
|
ке пищевого сырья. |
|
|
||
|
|
|
|
|
|
||
|
Здравоохранение |
Диагностика, получение новых лекар- |
|
|
________________________________ |
||
|
|
|
ственных средств, применение генной |
|
|
||
|
|
|
инженерии для коррекции клеток ор- |
|
|
________________________________ |
|
|
|
|
ганизма. |
|
|
||
|
|
|
|
|
|
________________________________ |
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
В зависимости от цели применения лекарствен- |
|
||||
|
|
________________________________ |
|||||
|
|
ные средства и препараты можно подразделить |
|||||
|
|
|
|
||||
|
|
на следующие группы: |
________________________________ |
||||
лечебные (антибиотики, ферменты, алкалоиды, сер- |
|||||||
|
|
||||||
|
|
дечные гликозиды, гормоны т.д.); |
________________________________ |
профилактические (вакцины, сыворотки, анатокси-
ны, адаптогены, интерфероны, витамины, нормоф- ________________________________
лоры и т.д.);
реабилитационные (витамины, адаптогены, нор- |
________________________________ |
||
|
мофлоры и т.д.); |
|
|
диагностические (диагностикумы на основе фер- |
________________________________ |
||
|
ментов и иммобилизованных клеток, иммунные |
|
|
|
тест-системы на основе моноклональных и поли- |
________________________________ |
|
|
клональных антител). |
|
|
|
|
|
________________________________ |
|
|
|
|
|
В настоящее время лекарственные субстанции |
________________________________ |
|
|
могут быть получены следующими методами: |
|
________________________________ |
|
1) химическим, органическим и неорганическим |
||
|
|
||
|
синтезом; |
________________________________ |
|
|
2) выделением из нативного сырья растительного, |
||
|
|
||
|
животного или минерального происхождения (тра- |
________________________________ |
|
|
диционные технологии); |
||
|
|
||
|
3) в результате биотехнологического производства. |
________________________________ |
|
|
|
|
________________________________ |
|
|
|
|
|
На современном этапе методами биотехнологии |
||
|
________________________________ |
||
|
производится более 350 наименований лекарствен- |
||
|
ных средств для лечения 200 заболеваний, в том |
________________________________ |
|
|
числе угрожающих жизни. |
||
|
По экспертным оценкам, доля лекарственных |
________________________________ |
|
|
средств, производимых биотехнологическими ме- |
||
|
тодами, в ближайшем будущем составит 50 % от |
________________________________ |
|
|
всех применяемых лекарственных средств. |
||
|
|
|
________________________________ |
22
ОБЪЕМ РОССИЙСКОГО РЫНКА БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ≈ 1 млрд $
Выпуск российской биотехнологической продукции ≈ 360 млн $
Импорт биотехнологической продукции
≈ 650 млн $
Основные потребители биотехнологической продукции
ФАРМАЦЕВТИКА ≈ 580 млн $
(из них только 25–30 % приходится на отечественную продукцию): антибиотики, генно-инженерные белки (интерфероны, инсулин, вакцины, ферменты, диагностические средства).
ПИЩЕВАЯ ПРОМЫШЛЕННОСТЬ ≈ 100 млн $
(на этом рынке доля отеч. продукции — 10–15 %): закваски для кисло-молочных продуктов, дрожжи и ферменты для производства спирта и мясопереработки.
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО ≈ 300 млн $
(доля отеч. продукции — 8–10 %): средства защиты растений, производство кормов и ферментов для кормопроизводства (аминокислота лизин, микрокапсулированные витамины, культуры полезных бактерий).
ПРОМЫШЛЕННОСТЬ И ЭКОЛОГИЯ
использование биосистем для разработки полезных ископаемых, биотехнологическая переработка промышленных и бытовых отходов, очистка сточных вод, обеззараживание воздуха.
(Abercade Consulting, 2002 г.)
Национальная программа «Развитие биотехнологии в Российской Федерации на 2006–2015 гг.» разработана в соответствии с решением II съезда биотехнологов России от 15 окт. 2004 г.
Доля РФ в мировом биотехнологическом рынке крайне низка.
Прогнозируется: в 2010 г. Россия будет производить 0,25 % мирового объема б/т продукции.
Отечественная б/т промышленность производит дженерики (98 % продукции), современные высокотехнологичные продукты составляют 10 %.
Цель программы:
Развертывание работ в области теоретической и практической б/т в РФ на базе современных инновационных подходов для производства импортозамешающей биотехнологической продукции.
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
23
Задачи программы:
Формирование и реализация национальных приоритетных проектов в биотехнологии.
Разработка теории и методологии фундаментальной биотехнологии.
Внедрение новейших достижений в сфере геномики, биоинформатики, нанотехнологий в соответствии с наиболее важными приоритетами (генетический паспорт, биочипы и др.).
Создание современных образовательных программ и системы подготовки кадров в области б/т.
Реализация целевых практических проектов по медицинской, с/х, пищевой, экологической, промышленной б/т и др. направлений с целью обеспечения населения отечественной б/т продукцией.
Создание действенной правовой, экономической и организационной базы для развития б/т.
Литература:
Биологическая наука и биотехнологии в России. — М., 2006, 192 с. (Национальный исследовательский совет национальных академий США в сотрудничестве с Российской Академией наук).
Национальная программа «Развитие биотехнологии в Российской Федерации на 2006–2015 гг.». — М., 2005. — 56 с.
Егорова Т.А., Клунова С.М., Живухина Е.А. Основы биотехнологии. — М.: Издат. центр «Академия»,
2003. — 208 с.
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
Для заметок
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
24
Тема 2 .
Биологические системы, используемые в биотехнологии. Совершенствования биообъектов методами мутагенеза и селекции
Цель:
Познакомить с основными биообъектами биотехнологии, их классификацией, принципом выбора биообъектов и способами их совершенствования.
Рассматриваемые вопросы:
Биообъекты.
Характеристика и классификация биообъектов.
Принцип выбора биообъекта для биотехнологического производства.
Методы совершенствования биообъектов.
Совершенствования биообъектов методами мутагенеза и селекции.
Основу биологического производства составляют биологические объекты и технологические процессы, осуществляемые на биотехнологическом оборудовании.
Биологический объект является средством производства лекарственных субстанций и диагностических компонентов тест-систем.
Биообъектом в процессах биосинтеза лекарственных субстанций является продуцент целевого продукта, а в процессах биокатализа или биотрансформации биообъект — это промышленный фер- мент-биокатализатор, находящийся в свободном состоянии или иммобилизованный на носителе.
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
25
Биологическими объектами в б/т являются самые разнообразные биологические системы.
Реннеберг Р., Реннеберг И. От пекарни до биофабрики. —
М.: Мир, 1991. — 112 с.
Биообъекты как средство производства лекарственных, профилактических и диагностических средств можно разделить на 4 группы:
макробиообъекты животного происхождения (млекопитающие, птицы, рептилии, рыбы, насекомые, паукообразные, морские позвоночные). Культуры тканей человека и др. млекопитающих;
биообъекты растительного происхождения (дикорастущие и плантационные растения, водоросли). Культуры растительных тканей;
биообъекты — микроорганизмы (эукариоты — простейшие, грибы, дрожжи. Прокариоты — актиномицеты, эубактерии. Вирусы);
биообъекты — макромолекулы с ферментативной активностью (промышленные катализаторы на основе индивидуальных ферментов и мультиферментных комплексов).
Выбор биообъекта
Выбор биологической системы зависит от целей биотехнологического процесса.
При выборе объекта основная задача биотехнолога
— отбор более продуктивных объектов с качествами, повышающими возможность их использования в промышленном производстве.
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
26
Выбор биообъекта (продолжение)
Главный критерий при отборе продуцентов — способность синтезировать целевой продукт.
К наиболее важным качествам с точки зрения технологии производства относятся:
—высокая скорость роста;
—устойчивость к инфекции;
—рост на менее дефицитных средах;
—большее соответствие требованиям промышленной гигиены.
Все это позволяет значительно снизить затраты на производство целевого продукта.
Чтобы с максимальной продуктивностью использовать биообъект в процессе, необходимо знать и учитывать его структурно-функциональные особенности применительно к конкретным условиям производства.
Классификация живых организмов
Живые организмы
Неклеточные |
Клеточные |
|
Вирусы |
Прокариоты |
Эукариоты |
(ДНК–содержащие |
|
животные |
РНК-содержащие ) |
простейшие растения |
|
|
бактерии |
|
|
актиномицеты, |
грибы нитчатые, |
|
цианобактерии, |
дрожжи, |
|
|
водоросли |
Прокариотические клетки
Не имеют заключенного в мембрану ядра. Генетический аппарат клеток представлен двойной замкнутой нитью ДНК, не отделенной мембраной от цитоплазмы. Гистоны и митотический аппарат отсутствуют, нет интронов; отсутствуют органеллы, свойственные эукариотам (хлоропласты, митохондрии).
Отличаются относительно небольшими размерами и простотой строения. Обычно они существуют изолированно, вне связи с другими клетками.
Линейные размеры (могут иметь сферическую, палочкообразную или спиральную форму), как правило, составляют от 0,5 до 3 мкм.
Клетка окружена жесткой стенкой толщиной около
200 А0 (1м=1010 А0).
Непосредственно под стенкой располагается клеточная мембрана, толщиной около 70 А0.
Внутри клетки имеются нуклеотиды, рибосомы (центры белкового синтеза), цитоплазма, резервные гранулы.
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
27
Бактерии вида Bacillus brevis (прокариоты), образующие антибиотик грамицидин С.
Промышленная микробиология и успехи генетической инженерии. : пер. с англ. — М.: Мир, 1984. — 176 с.
Эукариотические клетки — клетки, ядро которых заключено в мембрану. Ядерная ДНК заключена в хромосомы, обычно не кольцевидные, с гистонами.
Обладают отграниченными мембраной клеточными органеллами — митохондриями, хлоропластами и др.
Как правило, эукариотическая клетка по объему в 1000–10 000 раз больше прокариотической.
Отличаются большим разнообразием форм, что необходимо для обеспечения различных специализированных функций.
В составе высших организмов эти клетки сосуществуют и взаимодействуют друг с другом различными путями и поэтому не нуждаются в биохимической гибкости и приспособляемости, столь необходимой для прокариот.
Плесневый гриб Cephalosporium acremonium (эука-
риоты), образующий антибиотик цефалоспорин.
Промышленная микробиология и успехи генетической инженерии. : пер. с англ. — М.: Мир, 1984. — 176 с.
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
28
Клетка дрожжей Saccharo-myces cerevisiae (эука-
риоты).
Промышленная микробиология и успехи генетической инженерии.: пер. с англ. — М.: Мир, 1984. — 176 с.
По своим требованиям к условиям окружающей среды микроорганизмы можно разделить на три следующие группы.
Облигатные аэробы, способные метаболизировать и расти только в присутствии атмосферного кислорода.
Например: прокариотические стрептомицеты (продуценты антибиотиков), большинство нитевидных эукариотических грибов (используемых в сыроделии и пр-ве продуктов питания).
Облигатные анаэробы — метаболизируют и растут без доступа свободного кислорода (кислород для них токсичен).
Например: бактериальный род Clostridium (C.botulinum образует токсин ботулизма).
Факультативные организмы, способные переключать свои метаболические механизмы с аэробного (дыхательного) пути на анаэробный (бродильный) в зависимости от окружающей среды.
Например: промышленные дрожжи.
Основные средства производства антибиотиков — различные виды грибов Penicillium, Streptomyces, Actinomyces.
Для производства ферментов в качестве биообъектов используют различные виды грибов Penicillium и Aspergillus, штаммы кишечной палочки Bacillus.
В синтезе витаминов участвуют пропионовокислые бактерии и уксуснокислые бактерии.
Аминокислоты продуцируют иммобилизованные клетки кишечной палочки и сахаромицетов, коринебактерии.
Пробиотики получают на основе биомассы клеток нормальной и транзиторной микрофлоры желудоч- но-кишечного тракта человека.
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
29
Лекарственные вещества
Penicillium chrysogenum |
Плесень |
Пенициллины |
|
|
|
Cephalosporium acremonium |
» |
Цсфалоспорины |
|
|
|
Streptomyces |
Бактерия |
Амфотерицин В, канамицины, неоми- |
|
|
цины, стрептомицин, тетрациклины |
|
|
и др. |
|
|
|
Bacillus brevis |
» |
Грамицидин С |
|
|
|
Bacillus subtilis |
» |
Бацитрацин |
|
|
|
Bacillus polymyxa |
» |
Полимиксин В |
|
|
|
Rhizopus nigricans |
Плесень |
Трансформация стероидов |
|
|
|
Arihrobacter simplex |
Бактерия |
» |
|
|
|
Mycobacterium |
» |
» |
|
|
|
Гибридомы |
— |
Иммуноглобулины и моноклональные |
|
|
антитела |
|
|
|
Клеточные линии млеко- |
— |
Интерферон |
питающих |
|
|
(с помощью технологии |
Бактерия |
Инсулин, человеческий гормон роста, |
рекомбинантных ДНК) |
|
соматостатин, интерферон |
|
|
|
Основной банк продуцентов в России — Всесоюзная коллекция промышленных микроорганизмов ГНИИ генетики.
Совершенствование биообъектов
Генетическая программа клетки может быть изменена следующими методами:
—селекцией на основе спонтанных мутаций;
—индуцированным мутагенезом с селекцией на каждом этапе мутаций;
—клеточной инженерией на основе гибридизации соматических клеток и культивирования изолированных культур тканей и клеток растений и животных;
—генной инженерией на основе технологии рекомбинантных ДНК.
Селекция (selectio — лат.) — направленный отбор спонтанных или индуцированных мутаций и создание на их основе клоновых культур с последующим поддержанием высокой продуктивности.
Селекция биообъектов направлена на увеличение образования целевого продукта часто без знаний о путях его биосинтеза.
Методы селекционной работы
Ступенчатый отбор спонтанных мутаций.
Ступенчатый отбор на основе индуцированного мутагенеза.
Отбор продуцентов по их устойчивости к структурным аналогам целевого продукта.
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
30