- •Экзаменационные билеты лечебного факультета по микробиологии с ответами (2014) экзаменационный билет № 1
- •2.Основные исторические этапы развития микробиологии, вклад отечественных и зарубежных ученых. Разделы микробиологии.
- •3.В лабораторию поступила мокрота больного с патологическим процессом в легких. Наметить план лабораторных исследований.
- •Экзаменационный билет № 2
- •1. Стрептококки и заболевания, вызываемые ими.
- •2.Основные исторические этапы развития вирусологии, вклад отечественных и зарубежных ученых в ее развитие. Разделы вирусологии.
- •Экзаменационный билет № 3
- •1.Пневмококки и заболевания, вызываемые ими.
- •2. Космическая микробиология и гнотобиология (цели, задачи, достижения и их применение в медицине).
- •3.Наметить план бактериологического обследования работников кондитерской фабрики для выявления возможного бактерионосительства, опасного для производства.
- •Экзаменационный билет № 4
- •1. Менингококки и менингококковая инфекция.
- •2.Значение микробиологии, вирусологии в деятельности врача.
- •3.В стационаре у ребенка с диагнозом “Острая бронхопневмония” обнаружена дисфункция кишечника. Как установить этиологию патологии? Каковы причины кишечной патологии?
- •Экзаменационный билет № 5
- •2.Основные принципы классификации микробов и их номенклатура. Понятие о штамме, клоне, культуре, колонии микроорганизмов.
- •3. С какого дня болезни следует проводить серологические исследования при брюшном тифе у детей и взрослых? Какие титры агглютининов считают в этих случаях диагностическими?
- •Экзаменационный билет № 6
- •1.Псевдомонада – синегнойная палочка, ее роль в патологии человека.
- •2.Основные принципы классификации вирусов (генетическая, структурная, органотропная систематика). Понятие о ретровирусах, дефектных вирусах.
- •Экзаменационный билет № 7
- •1.Эшерихии и эшерихиозы.
- •3.У больного, поступившего в стационар с диагнозом “Пищевая токсикоинфекция”, резко нарастают явления обезвоживания. Как, с помощью каких методов, можно установить причину?
- •Экзаменационный билет № 8
- •1.Сальмонеллы и сальмонеллезы – брюшной тиф, паратифы.
- •2.Временные структурные элементы бактериальной клетки (споры, капсулы), их функциональное значение и обнаружение.
- •Экзаменационный билет № 9
- •1. Пищевые токсикоинфекции и их возбудители.
- •2.Подвижность микроорганизмов, органеллы движения и методы определения (прямые, косвенные). Примеры непостоянства движения при наличии органелл.
- •Экзаменационный билет № 10
- •1.Шигеллы и шигеллезы.
- •2.Спирохеты, классификация, особенности выявления.
- •3.Реакция Хеддельсона с сывороткой крови больного в объеме 0,2 мл
- •Экзаменационный билет № 11
- •1.Клебсиеллы и заболевания, вызываемые ими (очаговая пневмония, риносклерома).
- •2.Вирусы, структура вириона, выявление.
- •Экзаменационный билет № 12
- •1. Иерсинии, возбудитель чумы.
- •2.Понятие о прионах.
- •3.На прибывшем в порт судне обнаружены трупы грызунов. Наметить план лабораторной индикации возбудителя, противоэпидемических мероприятий.
- •Экзаменационный билет № 13
- •1.Иерсинии, возбудитель псевдотуберкулеза.
- •2.Грибы, классификация, патогенные и условно-патогенные виды, методы выявления.
- •Экзаменационный билет № 14
- •1.Yersinia enterocolitica, роль в патологии.
- •2.Патогенные простейшие, классификация, биологические свойства, методы выявления.
- •Экзаменационный билет № 15
- •1.Холера и холерные вибрионы (классический холерный, Эль-Тор, о139).
- •2.Тинкториальные свойства микроорганизмов, сущность, дифференциально-диагностическое значение, определение методами Грама и Циль-Нильсена.
- •3.Каковы профилактические и лечебные мероприятия при поступлении в стационар больного с бактериологически подтвержденным диагнозом “ботулизм”.
- •Экзаменационный билет № 16
- •1. Пищевые интоксикации (стафилококковые, ботулизм и пр.).
- •2.Размеры микробной клетки, особенности у разных таксономических групп. Способы определения.
- •Экзаменационный билет № 17
- •1. Бруцеллы и бруцеллез.
- •2.Питание микробов, его виды, механизмы, пластический обмен.
- •Экзаменационный билет № 18
- •1.Туляремия и ее возбудитель.
- •2.Лабораторное обеспечение питания микробов. Питательные среды, сущность их конструирования, виды, назначение, контроль.
- •Экзаменационный билет № 19
- •1.Бордетеллы и бордетеллиозы (коклюш и паракоклюш).
- •2.Дыхание микробов, его варианты, сущность, механизмы аэробного и анаэробного дыхания, определение типа.
- •3.Как оценить положительную реакцию Вассермана со специфическим спирохетозным антигеном, положительные риф, рит у беременных на 8, 12, 24 неделях беременности?
- •Экзаменационный билет № 20
- •1. Особо опасный бациллез – сибирская язва.
- •2.Методы культивирования анаэробов в лабораторных условиях.
- •Экзаменационный билет № 21
- •1.Патогенные клостридии и возбудители раневого анаэробиоза – газовой гангрены, условия развития
- •2.Культуральные свойства микроорганизмов, их своеобразие у различных видов и обеспечение в лабораторных условиях.
- •Экзаменационный билет № 22
- •1.Патогенные клостридии и возбудитель раневого анаэробиоза – столбняка.
- •2.Размножение микробов, фазы роста.
- •3.В стационар поступил ребенок с диагнозом “Острое респираторное заболевание”. Как, используя микробиологические методы, уточнить этиологию заболевания? Что можно заподозрить?
- •Экзаменационный билет № 23
- •1.Патогенные клостридии и возбудители ботулизма.
- •2.Биохимическая активность микроорганизмов, ее определение и дифференциально-диагностическое значение.
- •Экзаменационный билет № 24
- •1.Листерии и листериозы.
- •2.Понятие о патогенности, вирулентности, единицы ее измерения. Пути повышения и снижения вирулентности патогенных микробов, практическое значение в медицине. Примеры.
- •Экзаменационный билет № 25
- •1.Коринобактерии и коринобактериозы
- •2.Факторы патогенности микробов, их выявление.
- •3.Из носоглоточного смыва больного выделена чистая культура золотистого стафилококка. Всегда ли можно утверждать, что она причина болезни. Как доказать, что данный штамм – возбудитель заболевания?
- •Экзаменационный билет № 26
- •1.Патогенные микобактерии – возбудители туберкулеза.
- •3.Из желчи переболевшего брюшным тифом выделен возбудитель названного заболевания. Как оценить данную ситуацию? Болен ли человек в настоящее время?
- •Экзаменационный билет № 27
- •1. Патогенные микобактерии, возбудитель лепры.
- •2.Особенности культивирования, выделения и идентификации чистой культуры анаэробов.
- •3.Из организма практически здорового человека выделен заведомо патогенный вид микроба. О чем это свидетельствует? Почему возбудитель болезни присутствует в организме, а заболевание не проявляется?
- •Экзаменационный билет № 28
- •1. Патогенные актиномицеты и актиномикозы.
- •2.Репродукция вирусов, особенности ее обеспечения в лабораторных условиях. Методы культивирования вирусов.
- •1.Патогенные спирохеты, сифилис.
- •2.Антигены, их виды и материальная основа, функции, определение. Назначение в практической медицине вакцин, диагностикумов.
- •3.У двух реконвалесцентов проведены бактериологические исследования. У одного возбудитель не обнаружен, у другого – выявлен. Как оценить исход заболевания? с чем это может быть связано?
- •Экзаменационный билет № 30
- •1.Патогенные спирохеты – возбудители бореллиозов (эндемического и эпидемического возвратного тифа).
- •2.Понятие об “о”, “н”, “к”-антигенах, аутоантигенах, изоантигенах организма. Примеры.
- •3.В детскую инфекционную больницу поступил ребенок с диагнозом “дифтерия”, “скарлатина”. Как уточнить этиологию заболевания? Возможно ли сочетание этих инфекций?
- •Экзаменационный билет № 31
- •1.Патогенные спирохеты – возбудители лептоспирозов.
- •2. Токсины и ферменты, как антигены.
- •3.У больного гриппом выявлена пневмония, вызванная стафилококком. Как называется такая форма инфекции? Объясните причины ее возникновения. Приведите другие примеры такого сочетания.
- •Экзаменационный билет № 32
- •1.Патогенные риккетсии и эпидемический сыпной тиф.
- •2.Антитела, их виды, материальная основа, функции.
- •3.В хирургическом отделении возникла серия гнойных послеоперационных осложнений. Наметить план выявления источника инфекции, выделения возбудителя и связи его с ним.
- •Экзаменационный билет № 33
- •1.Патогенные риккетсии и эндемический сыпной тиф.
- •2.Иммуноглобулины основных классов, структурные и функциональные особенности, динамика биосинтеза, значение при инфекционных заболеваниях.
- •3.Крышка на банке с заготовленными впрок грибами вздулась. Наметить план обнаружения причины порчи продукта.
- •Экзаменационный билет № 34
- •1. Патогенные микоплазмы и заболевания вызываемые ими
- •2.Современные представления о механизмах и сущности антителообразования. Роль антигена в антителогенезе.
- •3.Микробное число в пробе колодезной воды 15 мт/мл, коли-индекс равен 2, обнаружен вибрион Эль-Тор. Дать заключение пригодности воды данного источника.
- •Экзаменационный билет № 35
- •1.Патогенные хламидии и хламидиозы (трахома, урогенитальный, респираторный хламидиоз).
- •2.Убитые вакцины и техника их приготовления; контроль.
- •3.Коли-титр воды открытого водоема 550 мл, из нее выделен брюшнотифозный бактериофаг в высоком титре. Пригодна ли вода данного водоема в качестве питьевой?
- •Экзаменационный билет № 36
- •1. Поксвирусы. Натуральная оспа и ее возбудитель.
- •2.Химические вакцины, виды, способы приготовления.
- •Экзаменационный билет № 37
- •1. Герпесвирусы. Вирусы простого герпеса (впг).
- •Экзаменационный билет № 38
- •1. Герпесвирусы. Вирус ветряной оспы и опоясывающего герпеса.
- •2.Анатоксин, его приготовление, назначение, определение силы и качества, контроль.
- •3.С какого дня болезни следует проводить серологические исследования при брюшном тифе у детей и взрослых? Какие титры агглютининов считают в этих случаях диагностическими?
- •Экзаменационный билет № 39
- •1. Герпесвирусы. Вирус Эпштейна-Барр, вирус цитомегалии.
- •2.Понятие о поливакцинах. Условия, определяющие эффективность иммунопрофилактики.
- •Экзаменационный билет № 40
- •1. Коронавирусы. Sars.
- •2.Вакцинопрофилактика и вакцинотерапия. Основные принципы их использования. Аутовакцины, приготовление, контроль качества, назначение.
- •3. У больного, поступившего в стационар с диагнозом “Пищевая токсикоинфекция”, резко нарастают явления обезвоживания. Как, с помощью, каких методов, можно установить причину?
- •Экзаменационный билет № 41
- •1.Тогавирусы. Вирус краснухи.
- •2.Живые вакцины, методы аттенуации вакцинных штаммов и особенности их применения.
- •Экзаменационный билет № 42
- •1. Паповавирусы. Папилломавирусы человека
- •2.Реакция агглютинации, сущность, техника, варианты, применение.
- •Экзаменационный билет № 43
- •2.Реакция гемагглютинации, пассивной гемагглютинации, реакция торможения гемагглютинации, их диагностическое значение при инфекциях.
- •3.Реакция Хеддельсона с сывороткой крови больного в объеме 0,2 мл
- •Экзаменационный билет № 44
- •1.Ортомиксовирусы. Вирус гриппа и грипп.
- •2.Реакция гемадсорбции и реакция торможения гемадсорбции, их диагностическое значение при вирусных инфекциях.
- •Экзаменационный билет № 45
- •1.Парамиксовирусы. Парагриппозные вирусы и их роль в возникновении острых респираторных заболеваний.
- •2.Реакция связывания комплемента, сущность, техника, варианты, применение. Примеры.
- •3.На прибывшем в порт судне обнаружены трупы грызунов. Наметить план лабораторной индикации возбудителя, противоэпидемических мероприятий.
- •Экзаменационный билет № 46
- •1. Парамиксовирусы. Эпидемический паротит и его возбудитель.
- •2.Неполные (блокирующие) антитела и их определение в реакции торможения связывания комплемента, сущность, техника, особенности учета.
- •Экзаменационный билет № 47
- •1. Парамиксовирусы. Корь и ее возбудитель.
- •2.Реакция преципитации, сущность, техника, варианты, применение.
- •Экзаменационный билет № 48
- •1. Рабдовирусы. Бешенство и его возбудители.
- •2.Особенности вирусных инфекций. Роль вирусной нуклеиновой кислоты, белков, токсических веществ в инфекционном процессе. Понятие о дефектных вирусах.
- •2. Каковы профилактические и лечебные мероприятия при поступлении в стационар больного с бактериологически подтвержденным диагнозом “ботулизм”.
- •Экзаменационный билет № 49
- •1.Пикорнавирусы. Полиомиелит и его возбудители.
- •2.Реакция нейтрализации токсина антитоксином: сущность, техника, варианты, применение in vitro и in vivo.
- •Экзаменационный билет № 50
- •1.Флавивирусы. Клещевой и комариный энцефалиты и их возбудители.
- •Экзаменационный билет № 51
- •1.Флавивирусы. Вирус лихорадки Западного Нила.
- •2.Персистенция микроорганизмов, их инвазионно-колонизационная активность и здоровое носительство возбудителей инфекционных заболеваний. Значение латентных инфекций.
- •Экзаменационный билет № 52
- •1.Возбудители вирусных острых кишечных инфекций: ротавирусы, вирусы гепатитов а и е.
- •2.Реакция иммобилизации спирохет, примеры применения. Реакция иммунного прилипания. Практическое значение.
- •Экзаменационный билет № 53
- •1. Возбудители парентеральных вирусных гепатитов в, d, c, g, их роль в патологии печени и вирусоносительстве.
- •2.Иммуноферментный и радиоиммунологический методы, сущность, применение.
- •Экзаменационный билет № 54
- •1.Ретровирусы. Вич-инфекция (спид) и ее возбудители.
- •2.Полимеразная цепная реакция (пцр).
- •Экзаменационный билет № 55
- •2. Основные исторические этапы учения о наследственности и изменчивости микробов. Вклад отечественных и зарубежных ученых.
- •Экзаменационный билет № 56
- •1.Роль вирусов в этиологии опухолей (днк- и рнк-вирусы).
- •Экзаменационный билет № 57
- •1.Патогенные грибы – возбудители профессиональных и бытовых микозов (мукоромикоз, аспергиллез, пенициллиоз и пр.).
- •2.Понятие о плазмидах, их виды, определение, значение.
- •Экзаменационный билет № 58
- •1. Условно-патогенные грибы – возбудители кандидомикоза, условия развития.
- •2.Пол бактерий и плазмиды фертильности, видовая и межвидовая конъюгация, значение для изменчивости микроорганизмов.
- •3.Из носоглоточного смыва больного выделена чистая культура золотистого стафилококка. Всегда ли можно утверждать, что она причина болезни. Как доказать, что данный штамм – возбудитель заболевания?
- •Экзаменационный билет № 59
- •1. Патогенные грибы и поверхностные дерматомикозы (трихофития, микроспория, парша, эпидермофития).
- •2.Направленная изменчивость микроорганизмов, ее практическое применение в генной инженерии.
- •3.Из желчи переболевшего брюшным тифом выделен возбудитель названного заболевания. Как оценить данную ситуацию? Болен ли человек в настоящее время?
- •Экзаменационный билет № 60
- •1. Патогенные грибы и глубокие микозы (гистоплазмоз, криптококкоз и пр.).
- •2.Фенотипическая изменчивость, сущность, формы, практическое значение. Роль экологии.
- •3.Из организма практически здорового человека выделен заведомо патогенный вид микроба. О чем это свидетельствует? Почему возбудитель болезни присутствует в организме, а заболевание не проявляется?
- •Экзаменационный билет № 61
- •1. Плазмодии малярии и малярия.
- •2.Генотипическая изменчивость. Трансформационная изменчивость, значение для диагностики и профилактики инфекционных заболеваний.
- •1. Возбудитель амебиаза и амебиаз.
- •2. Генотипическая изменчивость. Трансдукция и лизогенная конверсия, значение для науки и практики.
- •3. У двух реконвалесцентов проведены бактериологические исследования. У одного возбудитель не обнаружен, у другого – выявлен. Как оценить исход заболевания? с чем это может быть связано?
- •Экзаменационный билет № 63
- •1.Лейшмании, кожный и висцеральный лейшманиоз.
- •Экзаменационный билет № 64
- •1. Токсоплазмы и токсоплазмоз.
- •2.Влияние физических и химических факторов на микробы. Мутация и ее значение в практической медицине.
- •3. У больного гриппом выявлена пневмония, вызванная стафилококком. Как называется такая форма инфекции? Объясните причины ее возникновения. Приведите другие примеры такого сочетания.
- •Экзаменационный билет № 65
- •1. Трипаносомы и трипаносомоз.
- •Экзаменационный билет № 66
- •3. Крышка на банке с заготовленными впрок грибами вздулась. Наметить план установления причины порчи продукта.
- •Экзаменационный билет № 67
- •1. Балантидии и лямблии, их роль в патологии человека.
- •3. Микробное число в пробе колодезной воды 15 мт/мл, коли-индекс равен 2, но обнаружен вибрион Эль-Тор. Дать заключение о пригодности воды данного источника.
- •Экзаменационный билет № 68
- •2.Стерилизация, сущность, варианты, применение. Контроль качества стерилизации.
- •3. Коли-титр воды открытого водоема 550 мл, из нее выделен брюшнотифозный бактериофаг в высоком титре. Пригодна ли вода данного водоема в качестве питьевой?
- •Экзаменационный билет № 69
- •1. Кампилобактерии и кампилобактериоз.
- •2.Влияние химических факторов среды на микробы. Дезинфекция, дезинсекция, дератизация, назначение. Контроль эффективности.
- •Экзаменационный билет № 70
- •1. Госпитальные (внутрибольничные) инфекции и их возбудители.
- •Способствующие факторы
- •Группа риска
- •2.Микробиология народному хозяйству и медицине. Микробиологическая биотехнология.
- •Экзаменационный билет № 71
- •1.Инфекционные «болезни цивилизации» (легионеллез, псевдотуберкулез, вич-инфекция).
- •2.Нормальная микрофлора человека, ее значение в жизнедеятельности организма. Способы восстановления микрофлоры.
- •Экзаменационный билет № 72
- •1. Дисбактериоз, роль микроорганизмов в развитии и предрасполагающие условия.
- •3. С какого дня болезни следует проводить серологические исследования при брюшном тифе у детей и взрослых? Какие титры агглютининов считают в этих случаях диагностическими?
- •Экзаменационный билет № 73
- •1. Инфекционные заболевания в медицине катастроф.
- •2.Риккетсии, классификация, общие биологические свойства, методы выявления.
- •3. В стационаре у ребенка с диагнозом “Острая бронхопневмония” обнаружена дисфункция кишечника. Как установить этиологию патологии? Каковы причины кишечной патологии.
- •Экзаменационный билет № 74
- •1. Медленные инфекции – прионозы.
- •2.Хламидии, морфо-физиологические свойства, способы выявления.
- •3. С какого дня болезни следует проводить серологические исследования при брюшном тифе у детей и взрослых? Какие титры агглютининов считают в этих случаях диагностическими?
- •Экзаменационный билет № 75
- •2. Микоплазмы, морфология, структура, физиологические особенности, методы выявления.
- •Экзаменационный билет № 76
- •1. Патогенные спирохеты, сифилис.
- •3.У больного, поступившего в стационар с диагнозом “Пищевая токсикоинфекция”, резко нарастают явления обезвоживания. Как, с помощью, каких методов, можно установить причину?
- •Экзаменационный билет № 77
- •1. Стафилококки и стафилококковые инфекции (стафилококкозы).
- •2. Микрофлора воды и ее значение для здоровья человека. Принципы санитарно-бактериологического анализа и оценки. Способы очистки воды от микробов.
- •2. Микрофлора почвы. Её значение в развитии патологии человека.
- •Экзаменационный билет № 79
- •2.Микрофлора продуктов питания. Её роль в развитии заболеваний. Методы определения и дифференциальной оценки.
- •Экзаменационный билет № 80
- •1. Менингококки и менингококковая инфекция.
- •2. Биологический метод диагностики инфекционных заболеваний. Сущность, техника, варианты, применение.
- •Экзаменационный билет № 81
- •1. Гонококк и гонококковая инфекция.
- •3. На прибывшем в порт судне обнаружены трупы грызунов. Наметить план лабораторной индикации возбудителя, противоэпидемических мероприятий.
2. Биологический метод диагностики инфекционных заболеваний. Сущность, техника, варианты, применение.
Биологический метод — заражение различным материалом (клиническим, лабораторным) лабораторных животных для индикации возбудителя, а также для определения некоторых свойств микроорганизмов, характеризующих их патоген-ность (токсигенность, токсичность, вирулентность).
В качестве лабораторных животных используют белых мышей и крыс, морских свинок, кроликов и др.
Воспроизведение заболевания у животного — абсолютное доказательство патогенное микроорганизма (в случае бешенства, столбняка и др.). Именно поэтому биологическая проба на животных — ценный и достоверный диагностический метод, особенно при тех инфекциях, возбудители которых в исследуемых биологических средах организма человека содержатся в малых концентрациях и плохо или медленно растут на искусственных средах.
Биологический метод применяют в целях накопления возбудителя в организме чувствительного животного и получения чистой культуры на искусственных средах, используя в качестве материала для посева кровь и внутренние органы животных.
Дополнительно:
Молекулярно-биологические методы, используемые в диагностике инфекционных болезней (ПЦР, рестрикционный анализ и др.).
Полимеразная цепная реакция позволяет обнаружить микроб в ис¬следуемом материале (воде, продуктах, материале от больного) по наличию в нем ДНК микроба без выделения последнего в чистую культуру.
Для проведения этой реакции из исследуемого материала выделяют ДНК, в которой определяют наличие специфичного для данного микроба гена. Обнаружение гена осуществляют его накоплением. Для этого необходимо иметь праймеры комплементарного З'-концам ДНК. исходного гена. Накопление (амплификация) гена выполняется следующим образом. Выделенную из исследуемого материала ДНК нагревают. При этом ДНК распадается на 2 нити. Добавляют праймеры. Смесь ДНК и праймеров охлаждают. При этом праймеры, при наличии в смеси ДНК искомого гена, связываются с его комплементарными участками. Затем к смеси ДНК и праймера добавляют ДНК-полимеразу и нуклеотиды. Устанавливают температуру, оптимальную для функционирования ДНК-полимеразы. В этих условиях, в случае комплементарное™ ДНК гена и праймера, происходит присоединение нуклеотидов к З'-концам праймеров, в результате чего синтезируются две копии гена. После этого цикл повторяется снова, при этом количество ДНК гена будет увеличиваться каждый раз вдвое. Проводят реакцию в специальных приборах — амплификаторах. ПЦР применяется для диагностики вирусных и бактериальных инфекций.
Рестрикционный анализ. Данный метод основан на применении ферментов, носящих название рестриктаз. Рестриктазы представляют собой эндонуклеазы, которые расщепляют молекулы ДНК, разрывая фосфатные связи не в произвольных местах, а в определенных последовательностях нуклеотидов. Особое значение для методов молекулярной генетики имеют рестриктазы, которые узнают последовательности, обладающие центральной симметрией и считывающиеся одинаково в обе стороны от оси симметрии. Точка разрыва ДНК может или совпадать с осью симметрии, или быть сдвинута относительно нее.
В настоящее время из различных бактерий выделено и очищено более 175 различных рестриктаз, для которых известны сайты (участки) узнавания (рестрикции). Выявлено более 80 различных типов сайтов, в которых может происходить разрыв двойной спирали ДНК.
В геноме конкретной таксономической единицы находится строго определенное (генетически задетерминированное) число участков узнавания для определенной рестриктазы.
Если выделенную из конкретного микроба ДНК обработать определенной рестриктазой, то это приведет к образованию строго определенного количества фрагментов ДНК фиксированного размера.
Размер каждого типа фрагментов можно узнать с помощью электрофореза в агарозном геле: мелкие фрагменты перемещаются в геле быстрее, чем более крупные фрагменты, и длина их пробега больше. Гель окрашивают бромистым этидием и фотографируют в УФ-излучении. Таким образом можно получить рестрикционную карту определенного вида микробов.
Сопоставляя карты рестрикции ДНК, выделенных из различных штаммов, можно оп¬ределить их генетическое родство, выявить принадлежность к определенному виду или роду, а также обнаружить участки, подвергнутые мутациям.
Этот метод используется также как начальный этап метода определения последовательности нуклеотидных пар (секвенирования) и метода молекулярной гибридизации.
Метод молекулярной гибридизации позволяет выявить степень сходства различных ДНК. Применяется при идентификации микробов для определения их точного таксономического положения.
Метод основан на способности двухцепочечной ДНК при повышенной температуре (90 °С) в щелочной среде денатурировать, т. е. расплетаться на две нити, а при понижении температуры на 10 °С вновь восстанавливать исходную двухцепочечную структуру. Метод требует наличия молекулярного зонда.
Зондом называется одноцепочечная молекула нуклеиновой кислоты, меченная ра¬диоактивными нуклидами, с которой сравнивают исследуемую ДНК.
Для проведения молекулярной гибридизации исследуемую ДНК расплетают указанным выше способом, одну нить фиксируют на специальном фильтре, который затем помещают в раствор, содержащий радиоактивный зонд. Создаются условия, благоприятные для образования двойных спиралей. В случае наличия комплементарности между зондом и исследуемой ДНК, они образу¬ют между собой двойную спираль.
Риботипирование и опосредованная транскрипцией амплификация рибосомальной РНК. Последовательность нуклеотидных оснований в оперонах, кодирующих рРНК, отличается консервативностью, присущей каждомувиду бактерий. Эти опероны представлены на бактериальной хромосоме в нескольких копиях. Фрагменты ДНК, полученные после об¬работки ее рестриктазами, содержат последовательности генов рРНК, которые могут быть обнаружены методом молекулярной гибридизации с меченой рРНК соответствующего виды бактерий. Количество и локализация копий оперонов рРНК и рестрикционный состав сайтов как внутри рРНК-оперона, так и по его флангам варьируют у различных вида бактерий. На основе этого свойства построен метод риботипирования, который позволяет производить мониторинг выделенных штам¬мов и определение их вида. В настоящее время риботипирование проводится в автомати¬ческом режиме в специальных приборах.
Опосредованная транскрипцией амплификация рРНК используется для диагностики сме¬шанных инфекций. Этот метод основан на обнаружении с помощью молекулярной гиб¬ридизации амплифицированных рРНК, спе¬цифичных для определенного вида бактерий. Исследование проводится в три этапа:
1. Амплификация пула рРНК на матрице выделенной из исследуемого материала ДНК при помощи ДНК-зависимой РНК-полимеразы.
2. Гибридизация накопленного пула рРНК с комплементарными видоспецифическим рРНК олигонуклеотидами, меченными флюорохромом или ферментами.
3. Определение продуктов гибридизации методами денситометрии, иммуноферментного анализа (ИФА).
Реакция проводится в автоматическом режиме в установках, в которых одномоментное определение рРНК, принадлежащих различным видам бактерий, достигается разделением амплифицированного пула рРНК на несколько проб, в которые вносятся комплементарные видоспецифическим рРНК меченые олигонуклеотиды для гибридизации.
3. Расшифруйте результаты обследования работника мясокомбината: реакция Райта «+», проба Бюрне «+ + + +», ОФП – 6. Дать заключение.
Расшифруйте результаты
Реакция Райта (реакция развёрнутой агглютинации) + - сомнительная агглютинация (титр 1:50). При таких результатах рекомендуется повторная постановка р-ции Райта через некоторое время (7-10 дней)
Пробы Бюрне (кожно-аллергическая проба) ++++ - резко положительная. Она определяет способность организма специфически отвечать местной реакцией кожи на внутрикожное введение бруцеллина – фильтрата бульонной культуры бруцелл. Она становится резко положительной на 3-4 день от начала болезни, в дальнейшем сохраняется с большим постоянством на протяжении очень длительного времени, даже после клинического выздоровления.
ОФП (опсонофагоцитарная проба) 6 –слабоположительная. Её проводят с 15-20 дня заболевания. Она основана на способности сегментоядерных нейтрофилов фагоцитировать бруцеллы благодаря наличию в крови человека специфических опсонинов, нарастающих в процессе бруцеллезной болезни (можно определить по формуле: Фагоцитарное Число Больного разделить на Фагоцитарное Число Здорового (Фагоцитарное Число – это среднее число поглощенных микробных клеток в одном фагоците)).
Реакция Райта и проба Бюрне взаимно дополняют друг друга. Максимальный диагностический эффект достигается при комплексном их применение, что является надежным способом диагностики бруцеллеза. Вследствие сомнительной реакции Райта можно предположить: латентный период либо недавно перенесенное заболевание – бруцеллез. А положительная пробы Бюрне сохраняется в течение длительного времени, даже после полного клинического выздоровления.