Новые исследования в биотехнике размножения жи­вотных

Трансплантация эмбрионов создает благоприятные условия для иссле­дований в области биотехники размножения животных: получение яйцекле­ток после гибели животных, оплодотворение яйцеклеток вне организма, це­ленаправленное получение двоен, регулирование пола, получение трансген­ных животных, создание химер, клонирование животных.

Культивирование овариальных ооцитов вне организма

Известно, что после разрыва фолликула в яйцепровод поступает не зрелое яйцо, а ооцит II порядка. Заключительная фаза овогенеза имеет место уже в процессе дви­жения ооцита по яйцеводу и в процессе оплодотворения. В значительной ме­ре этот процесс инициирует проникающий в цитоплазму клетки спермий. За­ключительная фаза овогенеза состоит в том, что ооцит II порядка претерпе­вает второе мейотическое деление, с образованием временного яйца и поляр­ного тела.

Незрелые ооциты выделяют из яичников коров, преждевременно вы­бывших из эксплуатации, но очень ценных в племенном отношении. Яични­ки доставляют в лабораторию в термосе с физраствором (температура 30-35°С) не позже 1,5 ч после убоя коровы или телки. Ооциты извлекают из по­лостных фолликулов, имеющих диаметр 2-5 мм, путем вымывания средой Дюльбекко с добавлением гепарина и антибиотиков). Вылавливают пасте­ровской пипеткой под микроскопом МСБ - 9 и проводят морфологическую оценку визуальным путем.

Извлеченные из фолликулов ооциты инкубируют в висячей капле, под слоем вазелинового масла при температуре 38,5°С, срок инкубации - 24 ч. Используют культуральную среду ТС-199 с добавлением 10% -ной феталь-ной сыворотки теленка и гентамицина. Для ускоренного созревания ооцита в среду добавляют гормоны: фоллитропин + лютропин и эстрадиол.

Культивирование овариальных ооцитов вне организма в перспективе может стать важным дополнительным источников эмбрионов.

Оплодотворение вне организма

Удивительное явление природы - со­единение мужской и женской половых клеток и образование новой клетки -зиготы ( в переводе с греческого -«упряжка из двух быков»), способной расти и развиваться происходит в организме матери. Английским ученым Патрику Стептоу и Роберту Эвардсу после тринадцати лет работы удалось из яйца и спермы произвести плод в колбе и пересадить его в готовом виде в матку. В 1978 г. родилась Луиза Браун - первый на земле ребенок, зачатый вне орга­низма («ребенок из пробирки»).

С 1987 г. коммерческая компания «Биотехнология животных» (Велико­британия) практикует пересадку эмбрионов от мясных телок коровам – рецепиентам в молочных стадах. Источником эмбрионов служат яйцеклетки, из­влеченные на бойне и оплодотворенные в лаборатории.

Для оплодотворения вне организма яйцеклетки необходимо провести капацитацию (созревание) спермиев. Капацитацию спермиев проводят мето­дом «swin up». С использованием среды p-TALP.

Оплодотворение ооцита капацитированными спермиями происходит в среде Fert-TALP при экспозиции 16-18 ч.

Зиготу отмывают от прилипших спермиев и переносят для дальнейшего культивирования в среду СДМ с культурой эпителиальных клеток яйцепро-вода. Срок культивирования - 144-168 ч.

Эмбрионы оценивают по морфологическим признакам, заправляют в пайеты и пересаживают коровам или телкам-реципиентам. Приживляемость составляет 20-26%. (Полянцев Н.И., Подберезный В.В., 2001).