1) Куриный эмбрион (кэ)

Обозначьте на рис. структурные элементы КЭ:

а) хорионаллантоисная оболочка;

б) аллантоисная полость;

в) амнион;

г) желточный мешок.

Методы заражения куриных эмбрионов:
Феномены, позволяющие выявить вирус в курином эмбрионе:

РГА с аллантоисной жидкостью куриных эмбрионов, зараженных вирусом гриппа

Принцип метода _______________________________________________________________________________

Исследуемый материал _________________________________________________________________________

Дополнительные ингредиенты реакции ____________________________________________________________

Разведение вируса	1/2	1/4	1/8	1/16	1/32	1/64	Контроль эритроцитов
1 кап. взвеси КЭ
Результат

Вывод: _______________________________________________________________________________________

2) Культура клеток

Первичные культуры клеток

Перевиваемые культуры клеток

Это клетки различного типа (почек обезьян, почек эмбриона человека, амниона человека, куриных эмбрионов). Срок жизни таких культур ограничен ≤ 10 пересевами. Лишь отдельные группы клеток первичных культур могут сохранить способность к росту и размножению и при многократных пересевах они дают начало перевиваемым культурам клеток.

Перевиваемые клеточные линиии характеризуются потенциальным бессмертием и гетероплоидным набором хромосом. Наиболее часто применяются такие линии перевиваемых клеток как RH - из почки человека; ВНК-21 - из почек однодневных сирийских хомяков; ПМС - из почки морской свинки, Vero – из почек зеленой мартышки и др. Полуперевиваемые культуры клеток (диплоидные) - клетки одного типа, способные in vitro выдерживать максимум 50 пассажей, сохраняя при этом свою исходную морфологию и диплоидный набор хромосом.

Питательные среды и солевые растворы для культур

- Буферные солевые растворы применяются для промывки тканей и клеток в процессе приготовления клеточных культур и для приготовления питательных сред.

- Питательные среды по своему назначению делятся на ростовые и поддерживающие.

Широкое применение находят синтетические стандартные питательные среды, например, синтетическая среда 199 и среда Игла. Независимо от назначе­ния все питательные среды для культур клеток конструируются на основе сбалансированного солевого раствора. Чаще всего им является раствор Хенкса. В состав ростовых сред входит сыворотка крови животных.

Выделение вирусов и методы их индикации в культуре клеток

Для заражения используются чувствительные к данному вирусу культуры с хорошо развитым монослоем клеток, находящиеся в пробирках (флаконах).

Перед заражением клеток питательную среду удаляют и в каждую пробирку (лунку планшета или флакон) вносят по 0,1-0,2мл взвеси испытуемого материала, предварительно обработанного антибиотиками. После 30 - 60 мин. контакта вируса с клетками удаляют избыток материала, вносят по 1,0 - 1,5мл на пробирку поддерживающей среды и оставляют в термостате до выявления признаков репродукции вирусов.

ФЕНОМЕНЫ, ПОЗВОЛЯЮЩИЕ ВЫЯВИТЬ ВИРУС В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК

1. Цитопатический эффект (действие) – (ЦПЭ или ЦПД), который является следствием поражения клеток под действием размножающегося в них вируса.

ЦПД может быть трех основных типов:

а) кругло- или мелкоклеточная дегенерация;

б) образование гигантских многоядерных клеток - симпластообразование;

в) образование внутриядерных или цитоплазматических включений вирусспецифических или неспецифических.