4. Нефелометрия, турбидиметрия
Нефелометрия — это вид оптического анализа, в основе которого лежит измерение интенсивности светового потока, рассеиваемого в направлении, почти перпендикулярном направлению падающего пучка. Светорассеяние имеет место в том случае, если размеры рассеивающих частиц превышают длину волны электромагнитного излучения. Чем мутнее дисперсная система, тем сильнее она рассеивает свет. В определенных условиях наблюдается пропорциональная зависимость между содержанием частиц во взвеси (либо капелек в эмульсии) и ее мутностью. Иначе говоря, принцип нефелометрии заключается в измерении количества света, рассеиваемого частицами в жидкой среде. Оптимальные условия его применения состоят в использовании растворов низкой концентрации.
Турбидиметрия представляет собой широко используемую в клинике-лабораторий и практике разновидность нефелометрии. При турбидиметрии оценивается непрозрачность фотометрируемой системы по измерению степени абсорбции проходящего через нее светового потока. Поглощение монохроматического светового потока происходит в случае, если длина волны электромагнитного излучения оказывается значительно меньше, чем размеры частиц. Турбидиметрия — менее чувствительный метод по сравнению с собственно нефелометрией, поскольку для турбид и метрического анализа используются среды с относительно большим содержанием частиц в единице объема.
Если при использовании собственно нефелометрии падающий на кювету монохроматический световой поток и приемник излучения (фотоэлемент) находятся под прямым (или близким к нему) углом, то при применении турбидиметрии источник света и приемник излучения располагаются на одной линии. Это и позволяет использовать многие фотометры в качестве и колориметров, и
нефелометров (ФЭК 56, ФЭК Н57 и др.). В приборах такого типа имеется специальный светофильтр для нефе-лометрических определений, с максимумом пропускания
около 590 нм.
В настоящее время собственно нефелометрия в клинической лабораторной диагностике используется редко: она выполняется с применением дорогостоящих приборов, например лазерных нефелометров.
В последние годы турбидиметрический анализ находит все более широкое применение в лабораторной практике. Если раньше он использовался в основном для оценки проб коллоидной устойчивости (тимоловая, цинк-сульфатная, проба Вера, Бурштейна и Самая), то в настоящее время — для исследования системы свертывания крови (коагулометры, агрегометр отечественного предприятия «СОЛАР» и других фирм). По анализу агрегато-грамм можно судить об изменениях структур но-функциональных свойств тромбоцитов, характерных для определенных заболеваний.
В последние годы в практику клинико-лабораторного обследования пациентов широко внедряются технологии иммунотурбидиметрических исследований, направленных на оценку иммунного статуса организма и установление содержания в плазме (сыворотке) крови так называемых специфических белков (в том числе белков «острой фазы»), что имеет большое значение для диагностики, оценки эффективности лечения и прогноза различных заболеваний внутренних органов.
Методы лазерной нефелометрии и иммунотурбиди-метрии основываются на регистрации протекающей в жидкой среде реакции «антиген — антитело», сопровождающейся образованием соответствующего преципитата. О ходе реакции можно судить как по установлению степени мутности системы «в конечной точке» (т. е. через вполне определенный промежуток времени — статическая нефелометрия), так и кинетически — по динамике нарастания этих эффектов.
Все определяемые методом нефелометрии (иммуно-турбидиметрии) вещества представляют собой белки, содержащиеся в основной внеклеточной жидкости — плаз-
ме (сыворотке) крови в относительно большом количестве. Среди них: 1) факторы гуморального иммунитета: иммуноглобулины А, С,М,СЗиС4 компоненты комплемента, х- и /^-цепи, пропердиновый фактор В; 2) специфические белки (белки «острой фазы»): а-1-кислый гликопротеин, а-1-антитрипсин, а-2-макроглобулин, р-2-микроглобулин, церулоплазмин, гаптоглобин, С-реактив-ный белок, трансферрин, ревматоидный фактор, орозо-мукоид, преальбумин; 3) апопротеины (белковый компонент атеро- и антиатерогенных липопротеинов): апопро-теин А 1, апопротеин В; 4) другие белки плазмы (альбумин); 5) белки мочи (микроальбумин).
Таким образом, нефелометрический анализ в настоящее время включает в себя многие виды инструментальных лабораторных исследований, а именно: иммунотурбидиметрию, лазерную нефелометрию, агрегатометрию, коагулометрию.
В 1969—1973 гг. КйсЫе ег а1. разработали систему автоматизированной нефелометрии, с помощью которой исследуется содержание белков не только в плазме (сыворотке) крови, но и в моче, спинно-мозговой, суставной и амниотической жидкостях.