Пэннинг - разновидность аффинной хроматографии применительно к лимфоцитам

На сходном с пэннингом принципе основан способ разделения с помощью магнитных гранул,

покрытых специфическими

антителами (например, анти CD4).

При смешивании с клетками гранулы

связывают те из них, которые

распознаются фиксированными

антителами. Эти клетки затем смывают с гранул или выделяют путем наложения магнитного поля.

Методы определения эффекторных клеток

Разработаны различные методы

для определения эффекторных

функций лимфоцитов, в частности

продукции АТ, цитотоксичности и

опосредованной Т-клетками помощи и супрессии

Оценка гуморального звена

Определение факторов гуморального иммунитета включает подсчет В-лимфоцитов в периферической крови, определение концентрации иммуноглобулинов основных классов, а в особых случаях субклассов IgG.

Цитофлуориметрическое определение с использованием поликлональных антител к общим детерминантам иммуноглобулинов или моноклональных антител к одному из пан-В-клеточных

маркеров, чаще всего CD19, 20 или 72

Концентрацию IgM, IgG, IgA, а также типы легких цепей иммуноглобулинов обычно определяют методом радиальной иммунодиффузии по Манчини, с использованием поликлональных антител. Иногда используют иммуноферментные (обычно иммуносорбентные) тест-системы и моноклональные антитела.

Изотипы IgG определяют исключительно с помощью иммуноферментных тест- систем и моноклональных антител

Определение IgE проводят радиоиммунным и иммуноферментным методами в рамках аллергологического обследования.

В-клетки, продуцирующие IgM или IgG можно определить при помощи метода

локального гемолиза или реакции бляшкообразования

Иммуноферментный тест ELISPOT – способ выявления антителообразующих клеток

Оценка клеточного звена

Для определения антигенспецефичных Т-клеток часто используют тест стимуляции лимфоцитов – пролиферативный ответ Т-клеток на антиген, выявляемый по включению ими 3Н-тимидина

Цитотоксическую активность клеточных популяций определяют по их способности лизировать клетки- мишени. Количественно лизис клеток-мишеней определяют при помощи теста с высвобождением меченого хрома

Для определения Th1- и Th2-лимфоцитов требуются предварительное культивирование в присутствии ИЛ-2 (12-15 сут) и клонирование пролиферических клеток. Далее клетки определяют цитофлуометрически с помощью моноклональных антител к ключевым цитокинам (γИФН и ИЛ-4), выявляя эти цитокины в цитоплазме клеток.

Митогенная стимуляция (ФГА, конканавалин, митоген лаконоса)

Метод оценки цитотоксичности NK-клеток

Определение цитокинов в биологических жидкостях

Все шире распространяются методы определения

цитокинов в сыворотке крови и других биологических жидкостях (например, ИЛ-1 и ИЛ-6,

ФНОα в синовиальной жидкости при ревматоидном артрите), а также в культурах стимулированных клеток (моноцитов, макрофагов

или лимфоцитов). Этот подход позволяет не только оценить уровень соответствующих цитокинов, он дает возможность сопоставить активность двух типов Т-хелперов – Th1 и Th2, что должно в значительной степени обуславливать тактику иммуномодулирующих воздействий.