История метода

Позже были открыты авидин и

биотин, образующие стойкий

комплекс друг с другом, разработаны

методы соединения антител с

биотином, авидина - с ферментами,

новые методы получения

очищенных антител.

Все это привело к повсеместному внедрению данной методики сначала в исследовательских центрах, а затем и в практической медицине.

Иммуногистохимические методики исследования на сегодняшний день

являются обязательной частью любых

исследований, т. к. только они

обеспечивают специфическую

визуализацию локализации в тканях

различных клеток, гормонов и их

рецепторов, ферментов,

иммуноглобулинов, компонентов

клеток (сократительных и промежуточных филаментов) и даже отдельных генов, позволяют изучать секреторные и синтетические

процессы.

Иммуногистохимия - метод идентификации

и определения локализации в клетке и тканях структур, имеющих антигенные

свойства, основанный на реакции

антиген-антитело.

Антитела можно конъюгировать с

флюорохромами или ферментами,

используя аминокислотные остатки.

Полученные антитела называются

мечеными или конъюгированными.

При проведении иммуногистохимических реакций используются моно- и поликлональные антитела.

Постановка ИГХ

Предусматривает следующие этапы: забор материала;

приготовление гистологических

(цитологических) препаратов;

фиксацию, подготовку антигенов (зависит

от природы антигена и антител);

собственно окрашивание (тИФА: прямой,

непрямой, непрямой с усилением сигнала);

учет: микроскопия, фотографирование, выдача заключения.

Визуализация

Метками могут быть:

флюорохромы;

ферменты;

металлы иметаллопротеиды;

радиоизотопы;

промежуточные связующие вещества, например, биотин, дигоксин.

Визуализация

Метки могут быть присоединены как к

первичным антителам (прямой

метод), так и к вторичным (непрямой

метод).

Прямой метод предполагает

использование меченых антител

против интересующего антигена.

Непрямой метод предполагает использование двух различных антител.

Метод прямой иммунофлуоресценции

Метод непрямой иммунофлуоресценции

Почечное тельце. Иммунофлюоресцентным методом при помощиантител, меченных флюоресцеином против нефрина выявлены

подоциты (яркое зелёное свечение).

Фибробласт. Иммунофлюоресцентным методом выявлены митохондрии (зелёное свечение) и микротрубочки (красное свечение). Митохондрии окрашены при помощи первых антитела к СЕ F1 АТФазы. Микротрубочки выявлены при помощи АТ против тубулина.

Ферментные метки

Островок Лангерханса поджелудочной железы. Иммунопероксидазное выявление различных клеточных типов при помощи АТ против гормонов. Слева: осадок реакции коричневого цвета соответствует локализации альфа-клеток. Справа: окрашены бета-клетки.

Использование полимерных

макромолекул

Enchanced

Polymer One Step

staining (EPOS) – одноэтапный метод, полимер

конъюгирован с

первым антителом и ферментом