- •ФЕРМЕНТЫ
- ••Ферменты (энзимы) - это высокоспецифичные глобулярные белки, выполняющие функции биологических катализаторов.
- •Стадии ферментативного процесса
- •Фермент
- •(Без участия воды)
- •НОМЕНКЛАТУРА ФЕРМЕНТОВ
- •Общие свойства ферментов (особенности ферментов как биологических катализаторов)
- •Кофакторы ферментов
- •Некоторые коферменты
- •Ацетилкофермент А
- •АКТИВНЫЙ ЦЕНТР ФЕРМЕНТА
- •Механизм каталитического действия ферментов
- •Теория индуцированного соответствия
- •Субстратная специфичность химотрипсина
- •Сериновые протеазы
- •Уравнение Михаэлиса-Ментен
- •Вывод уравнения Михаэлиса-Ментен
- •Единица активности фермента
- •Ингибирование ферментов
- •Конкурентное ингибирование
- •Конкурентное
- •Аллостерические ферменты
- •Неконкурентное ингибирование
- •Неконкурентное
- •Схема действия ингибирующих и активирующих модуляторов
- •Ферментативный анализ
- •Метод определения глюкозы в крови
- •инженерная энзимология
- •В производстве стиральных порошков используются следующие ферменты:
- •Получение ферментных препаратов
- •Выделение и очистка ферментов
- •Поверхностный способ производства ферментов
- •Глубинный способ производства ферментов
- •Рост мицелия, образование -амилазы и
- •Принципиальная схема получения очищенных ферментных препаратов из культур микроорганизмов
- •Иммобилизация ферментов
- •Иммобилизованные ферменты
- •Типы иммобилизации
- •Носители для иммобилизованных ферментов
- •Ковалентное и поперечное связывание
- •Иммобилизованные ферменты, используемые в промышленности (Poulsen, 1984)
- •Промышленные процессы с иммобилизованными ферментами
- •Иммобилизованные клетки
- ••КОНВЕРТОР ДЛЯ БИОДЕСТРУКЦИИ НЕФТЯНЫХ УГЛЕВОДОРОДОВ ИЗ ВОДНЫХ СРЕД
Неконкурентное
ингибирование
Треониндегидратаза – аллостерический или регуляторный фермент, обратимо связывающийся с молекулой модулятора.
Аллостерические ферменты – ферменты, имеющие «другие центры».
Схема действия ингибирующих и активирующих модуляторов
Ферментативный анализ
4-аминоантипирин
4-аминоантипирин
+ фенол (500 нм)
Обычный метод определения глюкозы в крови основан на двух последовательных реакциях:
1)образование глюконолактона и пероксида водорода H2O2 под действием фермента глюкозооксидазы;
2)окисление бесцветного вещества пероксидом водорода в окрашенное зеленое соединение в реакции, катализируемой пероксидазой.
Когда вся имеющаяся в пробе глюкоза израсходована, количество образованного окрашенного вещества можно определить по светопоглощению, которое прямо пропорционально первоначальному содержанию глюкозы.
Метод определения глюкозы в крови
Конструкция тест-полоски
Реагентный слой содержит ферменты глюкозооксидазу и пероксидазу, которые сорбированы на пористую гидрофильную мембрану. Результатом реакции является образование окрашенного комплекса. Интенсивность развившейся окраски регистрируется отражательным минифотометром.
инженерная энзимология
•Включает методы получения, очистки, стабилизации и применения ферментов.
В производстве стиральных порошков используются следующие ферменты:
*протеаза щелочная;
*липаза щелочная;
*амилаза;
*целлюлаза;
*пектиназа щелочная;
*кератиназы.
Получение ферментных препаратов
Название ферментных препаратов складывается из сокращенного названия основного фермента и видового названия микроорганизма-продуцента. Например, препарат, содержащий в своей основе амилолитические ферменты и полученный при помощи культуры Aspergillus oryzae, называется амилоризин. В названии препарата указывается также способ культивирования и степень концентрирования и очистки:
|
Амилосубтилин Г3х |
Aspergillus oryzae |
Амилосубтилин Г10х |
Bacillus sp. |
I – название основного фермента; II – название микроорганизма-продуцента; III – окончание; IV – способ культивирования:
"П" – поверхностный, "Г" – глубинный; V – степень очистки (концентрирования)
Выделение и очистка ферментов
ФП имеют разную степень концентрирования и очистки: х, 3х, 3х-Ф, 10х, 20х, 25х.
Гх: неочищенная культурная жидкость.
Г3х: имеют ферментативную активность в 3 раза выше, чем Гх. Получены путем распылительной сушки концентрированной культуральной жидкости. Концентрируют вакуум-выпариванием при 30˚С с добавлением стабилизаторов (NaCl). Это тоже "грязные" ФП (1010 спор/г).
Г3х-Ф: культуральную жидкость фильтруют, концентрируют, сушат. Это частично очищенные ФП, так как удалена биомасса, активность выше, чем у Г3х.
Г10х: обрабатывают коагулянтами культуральную жидкость, фильтруют, концентрируют, осаждают ферменты органическими растворителями, ферментный осадок отделяют от жидкой фазы и высушивают.
Г20х: для получения используют ультрафильтрацию, остальное - как в Г10х.
Пх: получают высушиванием культуры продуцентов, "грязные", аналогичны Г3х.
П10х, П25х: водная экстракция ферментов, отделение экстракта; осаждение органических соединений; отделение осадка в Н2О, добавление
стабилизатора и наполнителя, сушка.