Методы санитарно-микробиологического исследования Санитарно-гигиенические нормативы исследования воды Определение омч аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов

Метод основан на определении общего микробного числа микроорганизмов, образующих колонии на питательном агаре при температуре 37⁰С в течение 24 часов.

Из каждой исследуемой пробы делают высев не менее двух объемов по 1,0мл в стерильные чашки Петри. После внесения пробы в каждую чашку вливают по 8,0-10,0мл После застывания агара чашки с посевами помещают в термостат вверх дном и инкубируют при 37±1⁰С в течение 24 часов.

При учете посевов предыдущего дня подсчитывают все выросшие на чашке колонии, наблюдаемые в объектив с увеличением в два раза; количество колоний на обеих чашках суммируют и делят на два. Результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1,0мл исследуемой пробы.

Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий

методом мембранных фильтров.

Метод основан на фильтровании установленного объема воды через мембранные фильтры, выращивании посевов на дифференциально-диагностической питательной среде с лактозой и последующей идентификацией культур из выросших колоний по культуральным и биохимическим свойствам.

Пробу исследуемой воды разбивают на три объема по 100,0мл и фильтруют. Затем фильтры помещают на среду Эндо в чашки Петри, которые ставят в термостат дном вверх и инкубируют при 37⁰С и при 44,5⁰С в течение 24 часов.

Если на фильтрах через 24 часа (конец анализа) нет роста или выросли колонии пленчатые, губчатые, плесневые, то дают отрицательный ответ: отсутствие общих колиформных бактерий (ОКБ) и термотолерантных колиформных бактерий (ТКБ) в 100,0мл исследуемой воды.

Если на фильтрах обнаружен рост изолированных типичных лактозопозитивных колоний – темно-красных или красных с металлическим блеском или без него, или других подобного рода колоний, то подсчитывают число колоний каждого типа отдельно и приступают к подтверждению их принадлежности к ОКБ и ТКБ.

С этой целью каждую колонию исследуют на:

– морфологию бактерий и отношение бактериальных клеток к окраске по Граму;

– наличие оксидазной активности;

– способность к ферментации глюкозы, лактозы до кислоты и газа при 37⁰С и 44,5⁰С.

Как ОКБ учитываются грамотрицательные бактерии при отрицательном оксидазном тесте, ферментации глюкозы, лактозы при 37⁰С с образованием кислоты и газа.

Как ТКБ учитываются грамотрицательные палочки при отрицательном оксидазном тесте и ферментации глюкозы и лактозы при 44,5⁰С с образованием кислоты и газа.

При отсутствии общих колиформных бактерий и термотолерантных колиформных бактерий на всех фильтрах результат записывают как «не обнаружено КОЕ ОКБ в 100,0мл» и «не обнаружено КОЕ ТКБ в 100,0мл».

В случаях идентификации всех выросших подозрительных колоний число колониеобразующих единиц ОКБ и ТКБ подсчитывают на всех фильтрах и выражают результат анализа в 100,0мл воды, вычисляя его по формуле:

Х = (а ´100) / V , где

Х – число колоний в 100,0мл;

а – число подсчитанных колоний;

V – общий объем воды, профильтрованной через фильтр.

Например, при посеве 3-х фильтров с профильтрованных объемов по 100,0мл, на 1-ом выросло две колонии, а на остальных двух фильтрах – роста нет. В этом случае число общих или термотолерантных колиформных бактерий будет определяться таким образом:

(2 х 100) / 300 = 0,7 КОЕ ОКБ (ТКБ) в 100,0мл воды.