26 . Лабораторные методы гельминтоскопии и гельминтоовоскопии.

Прижизненная диагностика. Прижизненный диагноз на гельминтозы всегда должен подтверждаться специфическими методами гельминтологического исследования, которые дают возможность обнаружить гельминтов или их зародышей (яйца, личинки). Исследованию могут подвергаться все выделяемые животными секреты и экскреты - кал, моча, мокрота, носовые истечения, кРовь, содержимое желудка, абсцессов, а также биопсированные кусочки тканей. В практике чаще всего прибегают к исследованию фекальных масс.

Их исследуют тремя методами:

1) методом гельминтоовоскопии,

2) методом гельминтоларвоскопии

3) методом гельминтоскопии.

Методы гельминтоовоскопии. Для обнаружения яиц применяют чаще всего 5 методов, из которых 4 (нативного мазка, Фюллеборна Дарлинга и Щербовича) эффективны для обнаружения яиц нематод и цестод один (метод последовательного промывания) для обнаружения яиц скребней и трематод.

Метод нативного мазка. На обезжиренное предметное стекло наносят каплю 50%-ного глицерина или воды, затем палочкой или спичкой берут небольшое количество фекашлий из различных участков пробы, вносят в эту каплю и тщательно перемешивают до получения равномерной эмульсии. Твердые частицы из капли удаляют, каплю раздавливают покров стеклом и исследуют под микроскопом при малом увеличением. Исследовать надо не менее 10 мазков из каждой пробы.

Метод Фюллеборна. Пробу фекалий в коляНчестве 10 г размешивают в ступке со 100-150 мл насыщенности раствора поваренной соли. Полученную эмульсию фильтрунЯИ через марлю в посуду емкостью не менее 100 мл и отстаивайЯ в течение 40-90 минут. За это время яйца гельминтов всплывают на поверхность насыщенного раствора, так как их удельнцЯ вес меньше его удельного веса. Их собирают проволочной петлеЯИ диаметром 0,8-0,9 мм. На петле, соприкасающейся с новерхностыо раствора, должна образоваться тонкая пленка с яйцамвЯ три такие пленки наносят на предметное стекло, покрываюЯ покровным стеклом и просматривают под микроскопом.

Метод Дарлинга. Пробу фекалий весом 3-5 Я размешивают в ступке с водой в количестве одной центрифужной пробирки. Полученную эмульсию фильтруют через марлю в такую же пробирку, доливают водой до верха и центрифугируются в течение 3 минут. Затем жидкость сливают до осадка, осадок размешивают с жидкостью Дарлинга (насыщенный раствор поваренной соли, смешанной в равных частях сглицерином) центрифугируют 5 минут. Затем с поверхности жидкости собирают яйца, наносят их на предметное стекло и исследуют под микроскопом, как и по методу Фюллеборна.

Метод Щербовича. По этому методу препараты готовят так же, как и по методу Дарлинга, но вместо жидкостям Дарлинга применяют насыщенный раствор сернокислой.

Метод последовательного промывания. Пробу материала весом 5 г размешивают с водой: полученную эмульсию фильтруют через марлю в чашку Петри и дают от строиться в течение 5 минут. Затем жидкость сливают, а к осадку опять приливают чистую воду до краев чашки. Так, промывание повторяют до тех пор, пока вода над осадком не будет прозрачной. После этого осадок просматривают под микроскопом в этой же чашке Петри или переносят на большое компрессорное стекло.

Методы гельминтоларвоскопии. Для обнаружения личинок ГЕЛЬМИНТОВ применяют следующие методы гельминтоларвоскопии. Метод Бермана. На нижний конец воронки (10 см в диаметре) надевают резиновую трубку (10-15 см длины), свободны конец которой опускают в центрифужную пробирку, о воронку наливают теплую воду (40° С) и опускают в нее 5-10 г материала, помещенного на ситечко или марлю. Через 2-12 часов, когда личинки, выйдя из фекалий, осядут на дно пробирки, резиновую трубку плотно зажимают у края пробирки пальцами и осторожно вынимают из пробирки. Содержимое пробирки быстрым движением руки сливают, а оставшееся небольшое количество жидкости на дне пробирки выливают на компрессорные стекла и исследуют под микроскопом.

Метод Вайда. Берут 3-4 шарика фекалий, помещают на часовое или предметное стекло и овлажняют небольшим количеством воды, подогретой до 40° С. Через 15-20 минут фекалии удаляют, а жидкость исследуют под микроскопом.

Метод гельминтоскопии. Этим методом пользуются для обнаружения члеников цестод и для учета эффективности дегельминтизации. Фекалии разбавляют водой в 5-10 раз в любом сосуде. Тщательно размешивают и оставляют стоять до прекращения движения крупных частиц. Затем помутневшую воду сливают, а к осадку приливают чистую и тщательно взбалтывают. И так повторяют до тех пор, пока вода над осадком станет прозрачной. Чистый осадок просматривают порциями на темных и белых кюветах вначале невооруженным глазом, а затем под лупой, помещая осадок в чашки Петри.

Посмертная диагностика. Наилучшим способом посмертной диагностики гельминтозов является метод полных и неполных гельминтологических вскрытий. Сущность его заключается в изолированном и тщательном исследовании каждого органа и каждой ткани. Сняв кожу, осматривают подкожную клетчатку, потом вскрывают грудную и брюшную полости, извлекают органы, размещают их в соответствующую посуду, а полости тщательно осматривают. Собирают для исследования всю кровь, вынимают мозг, вылущивают глаза и т. д. Внутренние органы осматривают с поверхности, и если они имеют просветы, вскрывают их. Макроскопически исследуют серозную и слизистые оболочки, со слизистой оболочки делают соскоб тупой стороной ножа и исследуют его и содержимое органа методом гельминтоскопии. Паренхиматозные органы вскрывают по ходам, делают соскоб со слизистых оболочек и исследуют его компрессорным способом, а органы заливают водой и разминают пальцами на мелкие кусочки. Измельченные органы оставляют в воде на 3-% часа, после чего исследуют по методу гельминтоскопии, просматривая осадок макроскопически на кюветах и под лупой. Все остальные органы исследуют или методом гельминтоскопии или компрессорно.

Неполные гельминтологические вскрытия сводятся к макроскопическому обследованию отдельных органов.

Консервирование паразитических червей.

Собранных Паразитических червей сохраняют в консервирующих жидкостях Трематод, цестод и акантоцефалов помещают этиловый спирт, нематод в жидкость Барбагалло (3%-ный раствор формалина на физиологическом растворе). Внутри посуды (лучше плоскодонные пробирки, банки), где хранятся гельминты, помещают этикетку, на сторонах которой помечают простым карандашом):

1) вид животного, название органа, где найдены, и их количество;

2) место и дату вскрытия, фамили собравшего материал.

Для определения видовой принадлежности гельминтов иН просветляют: цестод, трематод, акантоцефалов - в 50%-ном глицерине; нематод - в молочной кислоте. При этом толстых, плотных гельминтов предварительно выдерживают под прессом. При необходимости проводится специальное окрашивание цестод, трематод и акантоцефалов.