Вопросы по микробиологии:

1. Культивирование и индикация вирусов

в клетке вирус воспроизводится в виде вирионов, или находится в интегрированном состоянии с хромосомой, или находится в цитоплазме в виде нуклеиновых кислот.

Вирусы вызывают выраженные продуктивные инфекции - клетка гибнет.

Латентные инфекции. Злокачественные трансформации клетки.

вирусы культивируют на биологических моделях: в организме животного, в курином эмбрионе, в культурах тканей.

В качестве лаб. животных используют: взрослые и новорожденные белые мыши, хомяки, кролики, обезьяны.

индикацию проводят на основании развития типичных признаков заболевания, патоморфологических изменений органов или продолжительной РГА.

РГА основана на способности вирусов вызывать агглютинацию эритроцитов. За счет гемагглютинина.

куриные эмбрионы. Зараженный материал вводят в полости и ткани зародыша. Возраст зародыша 5-12 дней.

Идентификацию устанавливают на основании поражения специфических тканей и оболочек и тела эмбриона.

На основании продолжительной РГА.

клетки, полученные из организма биологических объектов способны развиваться на питательных средах.

Клетки из эмбриональных и опухолевых тканей обладают более активной способностью к росту.

по технике приготовления культуры клеток:

однослойные культуры – клетки способны прикрепляться в виде монослоя

суспензионные – клетки размножаются во всем объеме среды при постоянном перемешивании

органные – цельные кусочки сохраняют исходную структуру вне организма

по числу жизнеспособных генераций:

первичные – способны размножаться только в первых генерациях; первичную культуру получают непосредственно из ткани путем трипсинизации; после нескольких пассажей первичная культура становится клеточной линией.

- перевариваемые – стабильные. Способны размножаться в лаб. условиях десятки лет посредством пассирования.

- полуперевариваемые – имеют ограниченную продолжительность жизни (40-50 пассажей)

выращенные культуры клеток заражают материалом, содержащим вирус

Индикация: на основе цитопатогенного действия, вирусов, цитопатического эффекта, образования внутриклеточных бляшек, гемадсорбации, «цветной реакции»

2. Правила работы в микробиологической лаборатории

3. Питательные среды. Проведение посевов на твердые и жидкие питательные среды

на жидкую

если клетки в жидкости, то для переноса используют петлю. Петлю погрузить в среду. Мягко взболтать. Не забыть прокалить горлышко флакона, когда снимаем крышку или удаляем ватную пробку.

если культура внутри или на поверхности твердого субстрата, то петлю достаточно потереть о внутреннюю поверхность сосуда с питательной средой.

в обоих случаях для перемешивания культуры, пробирку с засеянной жидкой средой можно слегка потрясти.

на твердую

посев – это метод культивирования микроорганизмов на пит. средах, применяемый для культуральной диагностики в медицинской микробиологии.

На плотные среды посев проводят для получения изолированных колоний и выявления чистоты культуры.

На жидкие – если содержание микроорганизмов в материале незначительное.

Простые методы: мясо-пептонный бульон и мясо-пептонный агар.

МПБ – жидкая среда.

МПА – плотная.

Специальные методы характеризуются добавлением специфического компонента или заменой основы: казеиново-угольный агар, сывороточный агар, кровяной бульон, яичная среда Левенштейна-Йенсена

Элективные методы характеризуются получением роста только интересующего микроорганизма: желточно-солевой агар для стафилококка, пептонная вода для холерного вибриона, среда Мюллера для сальмонелл, селенитовая среда для сальмонелл, среда Леффлера для коринебактерий дифтерии.

Дифф.-диагностичсекие методы позволяют идентифицировать отдельный типы, виды и группы: среда Гисса – «пестрый ряд», среда Сабуро – с добавлением антибиотика.

Для посевов применяют микробиологические петли, реже – иглы и шпатели. Для культивирования - пробирка и чашка Петри. Универсальный инструмент для засева – бактериологическая петля. Для посева уколом – бактериологическая игла. Для посева на чашках Петри – металлические и стеклянные шпатели. Для посевов жидких материалов – градуированная и пастеровская пипетки.

Посевы проводят в боксе над пламенем спиртовки.

Не забывайте выполнять правила личной безопасности.

во время посева не разговаривать.

посев в жидкую среду.

- петлю с материалом на ней погружают в пит.среду.

- если материал вязкий, растирают на стенке сосуда, затем смывают жидкой средой

- жидкий материал набирают в градуированную или пастеризованную пипетку