4. Изменение резистентности эритроцитов

Резистентность (стойкость) эритроцитов - это способность их противостоять различным разрушительным воздействиям: осмотическим, механическим, химическим, физическим и пр.

Уменьшение осмотической резистентности эритроцитов (повышение показателей минимальной и максимальной резистентности) наблюдается при:

• аутоиммунной гемолитической анемии, обусловленной тепловыми антителами;

• гемолитической болезни новорожденных;

• наследственном микросфероцитозе и стоматоцитозе;

• В₁₂- дефицитной анемии;

• токсикозах;

• бронхопневмониях, нарушениях функции селезенки и печени;

• гемобластозах.

Увеличение осмотической резистентности эритроцитов наблюдается при:

• механической желтухе;

• полицитемии;

• железодефицитной анемии;

• при талассемии;

• гемоглобинозе S;

• после массивных кровопотерь.

Диагностика:

Наибольшее практическое значение имеет определение осмотической резистентности — устойчивости эритроцитов в гипотонических растворах. Осмотическая резистентность эритроцитов определяется по соотношению площади поверхности клетки к ее объему. Объемные эритроциты (сфероциты, стоматоциты) характеризуются пониженной, а плоские (гипохромные, мишеневидные) эритроциты — повышенной осмотической резистентностью.

1) Фотометрический метод определения осмотической резистентности эритроцитов. Принцип: Измерение степени гемолиза эритроцитов в забуференных гипотонических растворах хлористого натрия определенной концентрации.

В гипертонических солевых растворах эритроциты теряют воду и сморщиваются, а в гипотонических — поглощают воду и набухают. При значительном набухании происходит гемолиз. Изотоническим раствором для эритроцитов является 0,85% раствор хлорида натрия. В 0,48–0,44% растворах NaCl разрушаются наименее резистентные эритроциты (минимальная осмотическая резистентность, верхняя граница резистентности). При концентрации 0,32–0,28% полностью гемолизируются все эритроциты (максимальная осмотическая резистентность, нижняя граница резистентности).

2) Макроскопический метод Лимбека и Рибьера. Принцип: визуальное определение уровня минимальной осмотической резистентности, т.е. первых, едва уловимых следов гемолиза эритроцитов по легкому порозовению или по легчайшей желтизне раствора, и уровня максимальной осмотической резистентности как полного гемолиза эритроцитов по интенсивно красной окраске, прозрачности раствора и отсутствию осадка в нем. В норме минимальная резистентность эритроцитов по этому методу равна 0,48-0,46 г/100мл, максимальная 0,34-0,32 г/100мл хлорида натрия.

5. Изменения количественного и качественного состава гемоглобина

Гемоглобин — основной компонент эритроцитов (составляет около 95% сухого остатка). По химической природе гемоглобин относится к хромопротеидам и имеет в своем составе белок (глобин) и комплексное соединение железа и протопорфирина IX (гемм).

Различие аминокислотного состава полипептидных цепей глобина определяет гетерогенность молекулы гемоглобина. В эритроцитах человека на разных этапах развития в норме определяются 6 типов гемоглобина: эмбриональный (Gower I, Gower 2, Portland), фетальный (HbF), взрослый (HbA, НЬА2). Время появления гемоглобинов в организме и их количественное соотношение представлено в табл. 2.

Таблица 2. Типы гемоглобина в онтогенезе человека (по А.В. Папаян, Л.Ю. Жуковой, 2001)

Тип Hb	Цепи Hb	Время появления	Содержание, %
			у новорожденного	у взрослого
Gower 1	2ﻉε2	В эмбриональном периоде (первые несколько недель беременности)	Отсутствует	Отсутствует
Gower 2	2ε2		Отсутствует	Отсутствует
Portland	2ﻉ2		Отсутствует	Отсутствует
HbF	22	2-й месяц беременности; к возрасту 6 месяцев у новорожденных достигает уровня взрослого человека	70	До 2
HbA1	2β2	У плода содержится в минимальных количествах. Достигает уровня взрослых у детей 3–6 месяцев жизни	30 (5–45)	95–98
HbA2	2δ2		<0,5	2–3

У взрослого человека основную массу гемоглобина в эритроцитах составляет гемоглобин А (гемоглобин взрослых): А: и А₂. Около 1–2% приходится на гемоглобин F. Увеличение содержания HbF в крови отмечается при гетерозиготном и гомозиготном вариантах β-талассемии, у больных гемоглобинопатиями с дефектами β-цепей (HbSS, SC и др.), при апластических анемиях, лейкозах. При α-талассемии могут обнаруживаться тетрамеры γ- или β-цепей. Уровень НЬА₂ повышается (свыше 3,4%) также у носителей гена β-талассемии, при мегалобластных анемиях, связанных с недостаточностью витамина В₁₂ и фолиевой кислоты. Снижение уровня НЬА₂ характерно для α-талассемии, железодефицитной и сидеробластной анемий.

Мутации в генах, ответственных за синтез гемоглобина, сопровождаются образованием аномальных гемоглобинов, что характерно, в частности, для серповидно-клеточной анемии (HbS), гомозиготных гемоглобинопатии (HbCC, HbEE, HbDD и др.).

Диагностика:

1) Гемиглобинициальный метод с применением ацетоангидрида. Принцип: гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием (красная кровяная соль) окисляется в метгемоглобин, образующий с ацетонангидридом окрашенный цианметгемоглобин, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина.

2) Определение концентрации гемоглобина с помощью гемометра Сали (визуального гемоглобинометра). Принцип: количество гемоглобина определяется колориметрическим методом, т.е. путем сравнения цвета исследуемого раствора с цветом стандартов, концентрация которых известна. При смешивании крови с соляной кислотой гемоглобин превращается в хлорид гематина бурого цвета, интенсивность окраски сравнивают со стандартом.

6. Цвет крови.

Гемоглобин определяет цвет крови. В крови гемоглобин существует в двух основных формах: оксигемоглобин (НЬО₂), придающий артериальной крови ярко-красный цвет, и дезоксигемоглобин (восстановленный гемоглобин, НЬН), обусловливающий темно-красную с синеватым оттенком окраску крови. Некоторые патологические формы гемоглобина, неспособные к переносу кислорода к тканям, могут изменять цвет крови. К ним относятся метгемоглобин (гемиглобин, HbMet) и сульфгемоглобин (SHb), образующиеся в результате токсического действия различных химических веществ (нитраты и нитриты, анилин, бензол, пиридин и др.). Их физиологический уровень в крови не превышает 1%. Присутствие в крови HbMet, SHb свыше 15% придает крови коричневый цвет («шоколадная кровь»). В противоположность HbMet и SHb, карбоксигемоглобин (НЬСО), формирующийся при отравлении угарным газом (СО) и карбонилами металлов (Ni(CO)₄; Fe(CO)₅), имеет яркий вишнево-красный цвет, и его присутствие нельзя визуально определить по цвету крови.

Диагностика:

Для определения содержания СО в крови проводятся спектрофотометрический анализ крови, а также цветовые химические пробы с формалином, дистиллированной водой, меняющими ярко-красный цвет СО-содержащей крови на малиновый, или реакция с 50% раствором КОН, придающим крови в присутствии СО коричневато-красный оттенок.