Занятие 5. Строение и функции нуклеиновых кислот.

1. Функции ДНК и РНК. Типы РНК.

2. Первичная структура ДНК и РНК.

3. Вторичная структура ДНК. Полиморфизм вторичной структуры ДНК.

4. Третичная структура ДНК: принципы организации и стабилизации.

5. Четвертичная структура ДНК.

6. Вторичная и третичная структура РНК.

7. Денатурация и ренатурация нуклеиновых кислот.

Лабораторная работа №5.

«Определение активности креатинкиназы в сыворотке крови».

Креатинкиназа катализирует превращение креатина в креатинфосфат. Ион фосфора, освобожденный при гидролизе креатинфосфата, определяют после депротеинирования как желтый комплекс фосфорнованадиевомолибденовой кислоты.

Реактивы:

1. Раствор сравнения (фосфор 1,20 ммоль/л).

2. Раствор реактива (аммоний ванадиевокислый 2 ммоль/л в 0,5 М хлорной кислоте и аммоний молибденовокислый 30 ммоль/л).

3. Раствор активатора (цистеина хлорид).

4. Раствор трихлоруксусной кислоты 0,15 моль/л.

5. Буферный раствор (глицин, углекислый натрий, сернокислый магний).

6. Субстрат - стандартный раствор (глицин, углекислый натрий, сернокислый магний, креатин).

7. Раствор двунатриевой соли АТФ.

Проведение анализа:

1. На фотоколориметре установить длину волны 390-410 нм, кювета 10мм Помечают цифрами 4 пробирки.

2. В пробирки 1 и 3 помещают по 0,5 мл раствора №6 (субстрата – 10 кап).

3. В пробирки 2 и 4 помещают по 0,5 мл раствора №5 (буфера-10 кап.)

4. В пробирку 3 помещают 0,05 мл раствора сравнения №1 (1 кап.).

5. В пробирку 1 помещают 0,2 мл раствора активатора №3 (4 кап.).

6. В пробирку 1 и 2 помещают по 0,05мл (1кап) сыворотки крови.

7. В пробирки 2 и 3 добавляют по 0,2 мл (4 кап) бидистиллироанной воды, в пробирку 4 – 0,25 мл (5 кап.).

8. Содержимое пробирок перемешивают и предварительно инкубируют 5 мин при 37⁰ С.

9. Во все пробирки отмеряют по 0,1мл (2 кап.) раствора АТФ(№7) , перемешивают и инкубируют точно 60 мин. при 37⁰С.

10. Во все пробирки отмеряют по 0,3 мл (6 кап.) раствора трихлоруксусной кислоты №4.

11. Содержимое пробирок перемешивают и центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин.

12. В чистые пробирки отмеряют по 0,9 мл (18 кап.) надосадочной жидкости, добавляют по 1,2 мл раствора реактива №2, перемешивают и через 5 мин. измеряют оптическую плотность всех растворов относительно воды (А₁, А₂, А₃, А₄).

Расчет результатов:

Каталитическую активность креатинкиназы (Х) в мккат/л рассчитывают по формуле:

(А₁-А₂)

Х=0,33х---------------

(А₃-А₄)

Лабораторная работа 6 «Выделение дезоксирибонуклеопротеидов из тканей животных»

Дезоксирибонуклеопротеиды выделяют из тканей, богатых клеточными ядрами: из зобной железы, селезенки и др. Дезоксирибонуклеопротеиды растворяются в растворах солей средней концентрации, например в хлориде натрия (1М), с образованием вязких растворов и снова осаждаются при разведении их (до 0,15М) в виде нитей нуклеопротеидов.

Исследуемый материал: ткани лабораторных животных.

Реактивы: 2 М и 1 М растворы NaCl, содержащие 0,04% трехзамещенный цитрат натрия;

Оборудование: центрифужные пробирки, центрифуга, ступка с пестиком, стакан химический на 100 мл, пипетка на 10 мл, цилиндр мерный на 50 мл.