Ход работы

В ступке, охлаждаемой льдом, растирают ткань животного с равным количеством кварцевого песка, затем постепенно добавляют 5 мл охлажденного 2 М раствора NaCl, содержащего 0,04% трехзамещенного цитрата натрия, растирают в течение 15 минут.

Затем, перемешивая содержимое в ступке, постепенно, малыми порциями добавляют 50 мл охлажденного 1М раствора NaCl.

Образовавшуюся гомогенную массу переносят в центрифужные пробирки, обязательно уравновесив их, и центрифугируют их 15 минут при 3000 об/мин.

Надосадочную жидкость после центрифугирования сливают в маленький стакан, измеряют цилиндром объем полученного центрифугата и медленно вливают его в шестикратный объем дистиллированной воды тонкой струей, размешивая жидкость палочкой.

Выделившийся хлопьевидный осадок отстоять, осторожно слить с него жидкость, а оставшуюся часть подвергнуть центрифугированию. Препарат этот сохраняют до следующей работы.

Лабораторная работа 7. «Определение состава биополимера по результатам качественных реакций на продукты его гидролиза».

Исследуемый материал: дезоксирибонуклеопротеиды печени и селезенки крысы, выделенные ранее.

Реактивы: 5% раствор серной кислоты, 10% и 30% раствор гидроксида натрия, 1% и 7% раствор CuSO₄, 1% раствор AgNO₃, молибденовый реактив.

Оборудование: коническая колба с обратным холодильником, песчаная баня, воронки, бумажные фильтры, штатив с пробирками, пипетки.

Ход работы

В коническую колбу для гидролиза помещают 4 г исследуемого вещества и добавляют 32 мл 5%-ного раствора H₂SO₄, к колбе присоединяют обратный холодильник с водяным охлаждением и ставят на песчаную баню для нагревания. Через 1 час после начала кипения жидкости гидролиз прекращают, гидролизат остужают и дважды фильтруют его через складчатый фильтр. В фильтре определяют продукты гидролиза по результатам качественных реакций.

1. БИУРЕТОВАЯ РЕАКЦИЯ: к 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 10%-ного раствора NaOH и 1 капля 1%-ного раствора CuSO₄.

2. СЕРЕБРЯНАЯ ПРОБА на пуриновые основания: 10 капель гидролизата нейтрализуют 1 каплей NH₄OH и добавляют 5 капель 1%-ного раствора AgNO₃. При наличии пуриновых оснований появляется рыхлый буроватый осадок серебряных соединений аденина и гуанина.

3. ПРОБА ТРОММЕРА: к 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 30%-ного раствора NaOH и 3 капли 7%-ного раствора CuSO₄. Жидкость перемешивают и нагревают до начала кипения.

4. МОЛИБДЕНОВА Я ПРОБА: к 20 каплям молибденового реактива добавляют 2-3 капли гидролизата и кипятят несколько минут.

Записывают результаты проведенных экспериментов (для молибденовой реакции записывают уравнению). На основании полученных данных делают вывод о составе биополимера.

Лабораторная работа № 8. Тема: «качественная реакция на витамины (в1, с)».

1) Диазореакция на тиамин (витамин В1 ).

Биологическая роль тиамина хорошо известна в виде тиаминпирофосфата. Он выполняет коферментные функции в реакциях декарбоксилирования кетокислот и в транскетолазной рeакции.

МАТЕРИАЛЫ ИСЛЕДОВАНИЯ: тиамина бромид в ампулах.

РЕАКТИВЫ: сульфаниловая кислота, 1%-ный раствор; нитрит натрия, 5%-ный р-р;

карбонат натрия, 10%-ный раствор.

ОБОРУДОВАНИЕ: штатив с пробирками.

ХОД РАБОТЫ.

К 5 каплям 1%-ного раствора сульфаниловой кислоты прибавляют 5 капель 5%-ного раствора нитрата натрия, получают диазореактив. К диазореактиву прибавляют несколько капель 6%-ного раствора тиамина бромида и 5-7 капель 10%-ного раствора карбоната натрия. Жидкость окрашивается в красный цвет.

2) Восстановительные свойства аскорбиновой кислоты.