Методы определения гиперэкспрессии her2
Методы оценки экспрессии HER2/neu в ткани основаны на двух подходах: определение изменений на белковом (по гиперэкспрессии белка на мембране клетки) или на геномном уровне (по амплификации гена HER2/neu).
На сегодняшний день иммуногистохимия является господствующим методом определения гиперэкспрессии белка HER2/neu. Для исследования используются парафиновые блоки тканей, фиксированных в нейтральном формалине в течение 18-24 часов.
В ряде случаев учет уровня окраски нормального эпителия помогает "нормализовать" уровень окрашивания HER2/neu и, таким образом, компенсировать межлабораторные различия в фиксации и обработке ткани [17]. Использование стандартных подходов к определению статуса HER2/neu обеспечивает высокую специфичность и чувствительность метода (совпадение иммуногистохи-мии на парафиновых блоках с данными флюоресцентной in situ гибридизации (FISH) составляет 90%) [15].
Для исследования используются антитела СВ11 (Novocastra, Ventana), А0485 (Dako), 4D5. Необходимо проведение тепловой обработки срезов в 0,01 mM цитратном буфере (рН 6,0) на водяной бане при 95-99°С.
Единственной стандартизованной иммуногистохимической тест-системой для оценки экспрессии белка HER2/neu, поддержанной FDA, является ГерцепТест (HercepTest, Dako Corp, Carpinteria, СА) [16]. ГерцепТест рекомендован FDA для отбора пациентов для лечения Герцептином.
Дискуссия о классификации результатов определения гиперэкспрессии HER2/neu имеет большое практическое значение. Степень гиперэкспрессии HER2/neu определяет лечебный эффект Герцептина и его комбинаций с химиотерапией (табл. 5) [18]. Сегодня следует рекомендовать назначение Герцептина самостоятельно или в комбинации с химиотерапией только при строго положительном тесте (3+) как при использовании HercepTest, так и других иммуногистохимических исследований.
Таблица 5. Гиперэкспрессия HER2/neu и эффективность Герцептина и химиотерапии при раке молочной железы |
|||||
HER2/neu |
Г |
Г+Т |
Т |
Г+Ф+Ц |
Д+Ц |
2+ |
4% |
21 % :! |
16% |
40% |
43% |
3+ |
17% |
44% |
14% |
53% |
36% |
Примечание: Д - Доксорубицин, Г - Герцептин, Т - Таксол, Ц - Циклофосфан |
|||||
Недавно разработанный метод флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) является быстрым, чувствительным и очень надежным способом определения амплификации гена HER2/neu. Он может быть легко выполнен на архивных блоках, сохраняемых в течение долгого периода, на материале, полученном при трепанобиопсиях. Две тест-системы определения амплификации гена HER2/neu FISH-методом рекомендованы FDA наряду с ГерцепТестом. Это PathVysion HER2 [Vysis, Inc, Downers Grove, Ill] и Oncor/Ventana INFORM HER2/neu Gene Detection System [Ventana Medical Systems]. Обе эти системы пригодны для использования на парафиновых блоках и были поддержаны FDA как стандартный метод прогнозирования течения рака молочной железы.
Для определения «истинной» амплификации гена имеет значение определение соотношения: количество генов Н ЕР2/neu / количество 17 хромосом на ядро клеток. В ряде случаев, особенно при новообразованиях, других чем рак молочной железы, нередко имеет место полисемия 17 хромосомы (увеличение числа копий 17 хромосомы) с сохранением нормального соотношения ген/хромосома. Значение полисомии для назначения Герцептина практически не изучено [19].
Эффективность Герцептина среди FISH+ опухолей совпадает с таковой у HER2/neu3+ больных.
В заключение этого раздела следует подчеркнуть, что решение о назначении Герцептина всегда принимается после иммуногистохимичес-кого анализа гиперэкспрессии HER2 в ткани опухоли. Гиперэкспрессия считается доказанной только при высокой интенсивности окрашивания (3+). В случае 2+ следует определить наличие амплификации гена (с помощью FISH-метода). При раке молочной железы определение HER2 признано необходимым исследованием для каждой больной. Для других злокачественных опухолей используются такие же критерии.
Таким образом, Герцептин является высокоэффективным препаратом направленного действия для лечения больных раком молочной железы с гиперэкспрессиией рецептора HER2/neu. В большом количестве клинических исследований проводится изучение эффективности Герцептина при других злокачественных опухолях, имеющих гиперэкс-прессию HER2/neu по данным ИГХ или FISH.
Успешное клиническое применение блокатора рецептора эпидермального фактора роста II типа — HER2/neu и его низкая токсичность создают новые возможности для создания препаратов, блокирующих другие рецепторы факторов роста, которые могут реально увеличить эффективность лечения и выживаемость больных без ухудшения качества жизни.
РЕФЕРАТ
Герцептин: новые перспективы в лечении рака
Герцептин (трастузумаб) представляет собой моноклональные антитела против HER2/neu рецепторов, гиперэкспрессия которых часто обнаруживается в ткани рака молочной железы. Установлено, что Герцептин вызывает иммунно-опосредованную цитотоксичность, блокирует пролиферацию и апоптоз клеток-мишеней, обладает антиангиогенной активностью. Подробно рассматриваются принципы использования Герцептина при лечении рака молочной железы как в качестве монотерапии, так и в комбинации с цитостатическими препаратами. Обсуждаются возможности применения Герцептина при других злокачественных опухолях. Подчеркивается, что перспективы дальнейшего клинического использования Герцептина связаны с более детальным анализом гиперэкспрессии HER2/neu, выяснением корреляции HER2/neu с клиническим течением болезни и эффективностью лечения при различных типах опухолей. Рассматриваются методы определения гиперэкслрессии HER2/neu.