Классификация методов хроматографии

Различные методы хроматографии можно классифицировать по агрегатному состоянию фаз, способу их относительного перемещения, аппаратурному оформлению процесса и т.д.

По агрегатному состоянию фаз хроматографические методы обычно классифицируют следующим образом:

Неподвижная фаза	Подвижная фаза
	Газообразная	Жидкая
Твердая	Газоадсорбционная хроматография	Жидкостно-адсорбционная колоночная Ионнообменная Осадочная хроматография
Жидкая	Распределительная газо-жидкостная хроматография	Распределительная жидкость-жидкостная хроматография

По механизму взаимодействия сорбента и сорбата можно выделить несколько видов хроматографии:

– адсорбционная хроматография основана на различии в адсорбируемости веществ твердым сорбентом;

– распределительная хроматография – на различии в растворимости разделяемых веществ в неподвижной фазе (газовая хроматография) или на различии в растворимости веществ в подвижной и неподвижной жидких фазах;

– ионообменная хроматография – на разной способности веществ к ионному обмену;

– эксклюзионная хроматография – на различии в размерах и формах молекул разделяемых веществ;

– аффинная хроматография – на специфических взаимодействиях, характерных для некоторых биологических и биохимических процессов.

По технике выполнения различают:

– колоночную хроматографию (разделение проводится в специальных колонках);

– плоскостную хроматографию, когда раз деление проводится на специальной бумаге (бумажная хроматография) или в тонком слое сорбента (тонкослойная хроматография).

По цели хроматографирования выделяют:

– аналитическую хроматографию (качественный и количественный анализ);

– препаративную хроматографию (для получения веществ в чистом виде, для концентрирования и выделения микропримесей);

– промышленную (производственную) хроматографию для автоматического управления процессом.

По способу относительного перемещения фаз различают:

– фронтальную;

– проявительную, или элюентную;

– вытеснительную хроматографию.

В хроматографии подвижную фазу, вводимую в слой неподвижной фазы, называют элюентом, а подвижную фазу, вышедшую из колонки и содержащую разделенные компоненты, – элюатом.

Этот метод широко используется как для качественного обнаружения отдельных аминокислот, так и разделения смеси аминокислот. Его достоинством является то, что он позволяет исследовать ничтожное количество вещества.

Разделение аминокислот основано на их различной растворимости в нескольких несмешивающихся жидкостях (фазах). Одной из жидкостей служит вода, которая прочно ассоциируется с молекулами целлюлозы и образует неподвижную фазу. Менее полярные, водонасыщенные органические растворители (изобутиловый, изопропиловый, бутиловый спирт, фенол и др.), составляют подвижную фазу. Подвижный органический растворитель поднимается по полоске бумаги, растворяет нанесенные на бумагу аминокислоты и увлекает их за собой. Скорость перемещения аминокислот на бумаге зависит от степени их растворимости в подвижных и неподвижных фазах. Чем больше растворимость аминокислот в водной фазе и чем меньше ее растворимость в неводной фазе, тем медленнее движется аминокислота по сравнению с фронтом органического растворителя. Иными словами, аминокислоты с объемными неполярными боковыми цепями (гли, лей, изо, фен, трп, вал, мет, тир), перемещаются быстрее, чем аминокислоты с более короткими боковыми цепями (про, ала, гли) или с полярными боковыми цепями (тре, глу, сер, арг, асп, гис, лиз, цис).

Положение отдельных аминокислот на хроматографической бумаге обнаруживают при помощи цветной реакции с нингидрином.

Идентификация отдельных аминокислот на хроматограмме проводят путем нанесения на ту же хроматограмму "свидетелей" — растворов отдельных аминокислот. Можно также идентифицировать аминокислоты по величине К_с равной отношению пути, пройденного аминокислотой (от места нанесения) (а) к расстоянию, пройденному растворителем (от места смеси аминокислот до фронта растворителя) (в).

Коэффициент К_с — величина, характерная для каждой аминокислоты и постоянная при данных условиях опыта (растворитель, температура, сорт бумаги).

Возможны разные варианты хроматографии на бумаге: нисходящая, восходящая, радиальная.