- •Забарвлення окремих структур мікробної клітини
- •36 Частина і. Загальна мікробіологія
- •Volutans. Їх ще називають метахроматичними, оскільки вони дають явище мета-
- •Виготовлення барвників для фарбування за методом Нейссера
- •38 Частина і. Загальна мікробіологія
- •10 % Розчином таніну, промивають водою і розглядають в надавленій краплі 0,02 %
- •1:3. Промивають водою, висушують, мікроскопують під імерсійним об’єктивом. На
- •40 Частина і. Загальна мікробіологія
- •10 Г, дистильованої води 100 мл; розчин 2 – насичений спиртовий розчин генціана
- •42 Частина і. Загальна мікробіологія
Забарвлення окремих структур мікробної клітини
З науковими й діагностичними цілями в бактеріологічних лабораторіях дос-
ліджують не тільки форму, розміри, загальні тинкторіальні властивості мікроор-
ганізмів, а й окремі елементи важливих структур: нуклеоїд, цитоплазму, включен-
ня, клітинну стінку, цитоплазматичну мембрану, капсулу, спори, джгутики тощо.
Нуклеоїд. У прокаріотів ще немає морфологічно оформленого ядра, а є лише
його попередник – нуклеоїд. Він представлений однією або кількома хромосома-
ми, що складаються з ДНК і вільно розташовані в цитоплазмі, не відмежовані від
36 Частина і. Загальна мікробіологія
неї будь-якою мембраною. Морфологічно дослідити цю структуру під світловим
мікроскопом дуже важко.
Розроблені спеціальні мікрохімічні реакції на виявлення ДНК. Однією з них
є реакція Фельгена. Після легкого гідролізу мазка розчином соляної кислоти при
підігріванні від дезоксірибофосфату відщеплюються пурини й піримідини, які
переходять в альдегіди. Останні реагують з безбарвною фуксинсірчистою кисло-
тою реактиву Шиффа, при цьому нуклеоїд забарвлюється в червоно-фіолетовий,
а цитоплазма в світло-рожевий колір.
Ядерну субстанцію можна виявити за методом Пікарського. Фіксований ме-
тиловим спиртом або сумішшю Никифорова мазок обробляють 1 % розчином со-
ляної кислоти, підігріваючи його до 60 °С протягом 7 хв. Після промивання його
забарвлюють барвником Гімзи 10-20 хв, промивають дистильованою водою, ви-
сушують і мікроскопують. Ядерні елементи фарбуються в темно-червоний, а ци-
топлазма клітин – у рожевий колір.
Ще краще можна виявити нуклеоїд і дослідити його структуру за допомогою
електронної мікроскопії ультратонких зрізів бактерійних клітин.
Цитоплазма та її включення. Цитоплазма бактерій – складна колоїдна сис-
тема. У молодих клітин вона гомогенна, у старих набуває зернистої або волокни-
стої структури. При забарвленні аніліновими барвниками цитоплазма фарбується
рівномірно й монотонно.
У процесі життєдіяльності бактерій у цитоплазмі з’являються метахроматичні
(волютинові) зерна, краплини нейтральних ліпідів, воску, сірки, гранульози, гліко-
ген, пігмент та ін. Вони є для клітини запасним джерелом енергії.
У лабораторній практиці найбільше значення має виявлення волютинових
зерен. Волютиновими їх назвали тому, що вперше ці включення відкриті у Spirillum
Volutans. Їх ще називають метахроматичними, оскільки вони дають явище мета-
хромазії – здатність забарвлюватись у тон, що відрізняється від основного кольо-
ру поліхромного барвника. Наприклад, при фарбуванні метиленовим синім зерна
набувають пурпурово-синього кольору через надзвичайно сильну спорідненість
їх з азурами, які завжди присутні в метиленовому синьому барвнику. Поява пур-
пурового відтінку і обумовлена здатністю давати метахромазію. Ці включення
називають також зернами Бабеша-Ернста за іменами авторів, які вперше описали
їх. Розташовуються вони переважно на полюсах бактерій, рідше – по всій дов-
жині клітини. Волютинові зерна є характерною диференціальною ознакою для
збудника дифтерії – Corynebacterium diphtheriaе.
Для виявлення цих включень використовують методи Леффлера, Нейссера,
П’ю, Мейера, Раскіної та ін.
Метод Леффлера. Фіксований мазок забарвлюють лужним спиртово-вод-
ним розчином метиленового синього протягом 4-5 хв, висушують і мікроскопу-
ють. При цьому волютинові зерна забарвлюютьcя в темно-синій, а цитоплазма – в
блідо-голубий колір (див. вкл., рис. 3).
Метод Нейссера належить до складних методів забарвлення. Він проводиться
за таким алгоритмом:
Розділ 3. Морфологія мікроорганізмів 37
1. На фіксований препарат наносять оцтово-кислу синьку Нейссера і фарбу-
ють протягом 1 хв, зливають барвник і промивають водою.
2. Діють на мазок розчином Люголя протягом 20-30 с.
3. Не промиваючи препарат водою, наносять розчин везувіну (або хризоїди-
ну) і забарвлюють протягом 1-3 хв.
4. Забарвлений мазок промивають водою, висушують і досліджують під
мікроскопом.
Мікроскопічна картина: цитоплазма бактерійних клітин фарбується в світлий
жовто-коричневий відтінок, метахроматичні зерна – в темно-синій, майже чорний
колір (див. вкл., рис. 4).