- •Лабораторный практикум №1
- •1.Метод количественного определения содержания белка в сыворотке крови по цветной реакции с биуретовым реактивом.
- •Лабораторный практикум №2.
- •Практическое занятие №3.
- •Лабораторный практикум №4
- •Практическое занятие № 5
- •Практическое занятие № 6
- •Практическое занятие № 7
- •Практическое занятие №8. Коллоквиум «Белки. Ферменты. Биологическое окисление» Контрольные вопросы
- •Контрольные вопросы «Биохимия пищи. Биологическое окисление»
- •Лабораторный практикум №9
- •Основные вопросы темы
- •Определение глюкозы в крови
- •Методические рекомендации к практическому занятию по биохимии для студентов
- •Практическое занятие № 10
- •Глюкоза с6
- •Методические рекомендации к практическому занятию по биохимии для преподавателей
- •Практическое занятие № 11
- •Основные вопросы темы
- •Глюкоза с6
- •Практическое занятие № 11
- •Вопросы для подготовки к занятию
- •Глюкоза с6
- •Практическое занятие №12 Липиды: переваривание и всасывание. Дислипопротеинемии. Гиперлипопротеинемии.
- •Вопросы для подготовки к занятию.
- •Приложение для педиатрического факультета Особенности обмена липидов в детском возрасте
- •Практическое занятие № 13
- •Практическое занятие № 14
- •Контрольные вопросы Углеводы.
- •Практическое занятие № 16
- •1. Обезвреживание продуктов гниения белков протекает:
- •Деградация белков и пептидов в цитоплазме.
- •Протеасомы.
- •Роль шаперонов в протеолизе.
- •Практическое занятие №17
- •3.В процессе трансаминирования происходит:
Определение глюкозы в крови
Лабораторная работа
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ГЛЮКОЗЫ В КРОВИ ЭНЗИМАТИЧЕСКИМ КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ.
Принцип метода
При окислении Д-глюкозы кислородом воздуха под действием фермента глюкозооксидазы образуется эквимолярное количество перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски полученного раствора пропорциональна концентрации глюкозы в пробе.
ХОД РАБОТЫ
|
Опытная проба |
Калибровочная проба |
Холостая проба |
Рабочий раствор, мл Сыворотка крови Калибратор,мл Вода дистил. |
2,0 0,04 - - |
2,0 - 0,04 -
|
2,0 - - 0,04 |
Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют 15 минут при 370С или в течение 25 минут при 18-250С. Через5-10 минут после начала инкубации пробирки интенсивно встряхнуть. После окончания инкубации измеряют оптическую плотность опытной и калибровочной проб против холостой пробы в кювете с толщиной поглощаемого слоя 5 мм при длине волны 490-540 нм.
Расчет концентрации глюкозы проводят по формуле:
Ео
С = -------------- х 10, где Ео – оптическая плотность опытной пробы;
Ек Ек – оптическая плотность калибровочной пробы;
10-концентрация глюкозы в калибраторе.
Результат:
Вывод:
Количественное определение глюкозы в моче с помощью диагностической тест-полоски «Глюкофан»,«Глюкотест»
Принцип теста: определение основано на специфической энзимотической реакции с использованием ферментов глюкозооксидазы и пероксидазы. Окисление глюкозы кислородом катализируется ферментом глюкозооксидазой. При этом образуется глюкозолактон и пероксид водорода, который в последующей реакции, катализируемой ферментом пероксидазой, окисляет хромогенную систему с образованием интенсивно окрашенных продуктов.
Ход работы:
Тест – полоску погружают в исследуемую мочу и немедленно вынимают. Через 20-30 секунд сравнивают окраску индикаторной зоны с цветной шкалой
Результат:
Вывод:
Метод однократной сахарной нагрузки. Сахарные кривые на занятии разбираются по результатам анализа: у больного, при построении сахарных кривых, наблюдалась следующая динамика уровня сахара (ммоль/л):
N |
исходный уровень |
30 минут |
60 минут |
90 минут |
120 минут |
Коэффициенты Рафальского и Бодуэна |
При каком заболевании характерно |
1 |
4,6 |
5,5 |
6,0 |
5,7 |
4,6 |
|
Алиментарная гирегликемия |
2 |
4,5 |
9,0 |
7,7 |
6,3 |
4,5
|
|
Гепатит |
3 |
4,7 |
7,9 |
11,3 |
10,1 |
9,8
|
|
Латентный сахарный диабет |
4 |
6,0 |
9,0 |
12,4 |
12,7 |
12,4 |
|
Сахарный диабет |
5 |
5,2 |
8,0 |
11,0 |
8,0 |
5,2
|
|
Гипертиреоз |
6 |
3,2 |
3,8 |
4,2 |
3,8 |
3,2
|
|
Гликогеноз |
7 |
2,9 |
3,3 |
4,0 |
2,7 |
2,7 |
|
Инсулома |
Построить сахарные кривые и дать оценку в каждом случае.
Обучающие задачи
1.Мальчик спросил, почему при длительном пережевывании хлеба он ощутил во рту сладкий вкус. Объясните эту ситуацию.ответ: при гидролизе крахмала (под действием амилазы слюны ) образуется мальтоза, которая и придает сладковатый привкус
2.Пациент принял "peros" дозу инсулина, в 10 раз превышающую суточную, назначенную врачом для парэнтерального лечения. Изменится при этом содержание глюкозы в крови? Объясните. Ответ содержание глюкозы не изменится, так инсулин в желудочно-кишечном тракте гидролизуется на отдельные аминокислоты, поэтому инсулин всегда вводят парентерально
3.Блюда, приготовленные без соли, невкусные. Имеет ли добавление соли физиологический смысл или только вкусовой? Ответ Добавление соли к пище имеет несколько смыслов, в том числе- активация амилазы, так NaCl является изостерическим активатором, а другой смысл в том ,что при добавлении соли активируются в кишечнике транспортные белки для переноса глюкозы в кровь
4.При заборе крови медсестра не успокоила ребенка, он громко плакал и вырывался из рук. Биохимическое исследование выяснило существенное увеличение сахара в крови. Объясните механизм такого увеличения.
Возможно ли на основании проведенного исследования исключить у ребенка сахарный диабет? Ответ адреналин, через образованиецАМФ активирует гликогенфосфорилазу
( подключая каскадный механизм активации) разрушая при этом гликоген до свободной глюкозы, что и приводит к гипергликемии
5.В эксперименте животному произведена перевязка протока поджелудочной железы. Отразиться ли это на переваривании углеводов в желудочно-кишечном тракте? Почему? ОтветВ панкреатическом сокевырабатывается альфа-амилаза, гидролизующая декстрины крахмала и гликогена до мальтозы и изомальтозы,поэтому при перевязке протока поджелудочной железы нарушается переваривание углеводов
6.В детскую клинику поступила больная в возрасте 4 лет с жалобами на приступы с временной потерей сознания, частые носовые кровотечения, отставание в росте.
Из анализа: начиная с 8 месяцев отмечались ежемесячные приступы с временной потерей сознания и судорогами. Приступы начинались до еды или рано утром. С 1 года - частые носовые кровотечения. При внешнем осмотре: маленький рост, большой живот, непропорционально худые конечности, геморрагии на коже, "кукольное" лицо, гепатомегалия.
При лабораторном исследовании: сахар крови 2,9 ммоль/л, гиперлактатацидемия, гипертриглицеридемия, гиперурикемия. Отсутствует гипергликемическая реакция на введение глюкагона и адреналина. Объяснить с биохимической точки зрения наличие данной симптоматики.
Какое заболевание можно предположить? Как подтвердить предположение? Ответ у ребенка вероятно отсутствует фермент в печени глюкозо6 фосфатаза, болезнь Гирке, гликоген не распадается, а только синтезируется, при этом печень увеличивается, гликоген в мышцах окисляется до лактата, его содержание увеличивается , наибольшее его количество утилизируется в ГНГ, а он не может происходить, так как этот же фермент обслуживает и распад гликогена и ГНГ, подтверждается предположение введением адреналина, при котором увеличивается в крови не глюкоза, а лактат
7. К эндокринологу обратилась пациентка с жалобами на повышенный аппетит и избыточную массу тела.
При обследовании: рост 160 см, вес 120 кг, повышенное питание.
Биохимические исследования выявили: сахар крови 2,7 ммоль/л.
Оцените содержание сахара в крови и выясните причину гипогликемии.
Ваши рекомендации. Ответ можно предположить гиперинсулинизм – налицо анаболические эффекты гормона и гипогликемия
8. Через 30 мин. после съедания 100 г сахара содержание глюкозы в крови у пациента возросло в 1,5 раза, а после употребления 100 г хлеба оно не изменилось. Почему? Ответ Сахар является легкопереваримым углеводом, его переваривание происходит только под действием сахаро-изомальтазного комплекса, поэтому быстро увеличивает глюкозу крови, в то время как крахмал хлеба долго переваривается под действием амилазы панкреатической, а затем мальтазы, и поэтому глюкоза в крови не увеличивается
Тесты исходного уровня знаний
Выберите один или несколько правильных ответов
ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ КОНЦЕНТРАЦИЯ ГЛЮКОЗЫ СОСТАВЛЯЕТ
6,66-8,88 ммоль/л.
3,33-5,55.ммоль/л
3- 4,44-7,77ммоль/л
ответ 2
ОСНОВНОЕ ПЕРЕВАРИВАНИЕ КРАХМАЛА ПРОИСХОДИТ В
ротовой полости
12-перстной кишке
кишечнике
ответ 2
АЛЬФА-АМИЛАЗА СЛЮНЫ ДЕЙСТВУЕТ НА СЛЕДУЮЩИЕ СУБСТРАТЫ
крахмал
гликоген
сахароза
лактоза
мальтоза
ответ 1,2
АЛЬФА-АМИЛАЗА ПАНКРЕАТИЧЕСКАЯ ДЕЙСТВУЕТ НА СЛЕДУЮЩИЕ СУБСТРАТЫ
крахмал
гликоген
сахароза
лактоза
мальтоза
ответ 1,2
ПОВЫШАЮТ УРОВЕНЬ ГЛЮКОЗЫ В КРОВИ
инсулин
глюкагон
адреналин
ответ 2,3
РЕЗЕРВНОЙ ФОРМОЙ УГЛЕВОДОВ В ОРГАНИЗМЕ ЯВЛЯЕТСЯ
1 -крахмал
–гликоген
–глюкоза
– фруктоза
-сахароза
ответ 2
ФОСФОРОЛИЗ ГЛИКОГЕНА АКТИВИРУЕТСЯ В ПЕЧЕНИ
адреналином
инсулином
глюкагоном
ответ 1,3
ИНСУЛИНЗАВИСИМЫЕ ПЕРЕНОСЧИКИ ГЛЮКОЗЫ ИМЕЮТСЯ В КЛЕТКАХ
жировой ткани
мозга
кишечника
скелетных мышц
поджелудочной железы
ответ все
ТРАНСПОРТ ГЛЮКОЗЫ ИЗ КРОВИ В КЛЕТКИ МЫШЕЧНОЙ И ЖИРОВОЙ ТКАНИ ПРОИСХОДИТ
против градиента концентрации
по градиенту концентрации
во время пищеварения
при участии инсулина
без участия инсулина
при участии К+ -Nа+- АТФ-азы
при участии ГЛЮТ -4
ответ 4,7
ТРАНСПОРТ ГЛЮКОЗЫ В КЛЕТКИ МОЗГА ПРЕИМУЩЕСТВЕННО ПРОИСХОДИТ
против градиента концентрации
по градиенту концентрации
при участии инсулина
без участия инсулина
по механизму симпорта
при участии К+ -Nа+- АТФ-азы
с затратой АТФ
ответ 2
ТРАНСПОРТ ГЛЮКОЗЫ В КЛЕТКИ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ КИШЕЧНИКА ПРОИСХОДИТ
путем активного транспорта, когда ее концентрация в просвете кишечника меньше, чем в клетках
при участии инсулина
без участия инсулина
при участии К+ -Nа+- АТФ-азы
с участием белков-переносчиков
ответ 1, 5
Тема реферативного сообщения «Обмен гликогена в антенатальном и перинатальном периодах»
Практические навыки, которыми должен студент овладеть по теме:
Дифференцировать различные сахарные кривые, поясняя при этом данные лабораторных исследований