- •Лабораторный практикум №1
- •1.Метод количественного определения содержания белка в сыворотке крови по цветной реакции с биуретовым реактивом.
- •Лабораторный практикум №2.
- •Практическое занятие №3.
- •Лабораторный практикум №4
- •Практическое занятие № 5
- •Практическое занятие № 6
- •Практическое занятие № 7
- •Практическое занятие №8. Коллоквиум «Белки. Ферменты. Биологическое окисление» Контрольные вопросы
- •Контрольные вопросы «Биохимия пищи. Биологическое окисление»
- •Лабораторный практикум №9
- •Основные вопросы темы
- •Определение глюкозы в крови
- •Методические рекомендации к практическому занятию по биохимии для студентов
- •Практическое занятие № 10
- •Глюкоза с6
- •Методические рекомендации к практическому занятию по биохимии для преподавателей
- •Практическое занятие № 11
- •Основные вопросы темы
- •Глюкоза с6
- •Практическое занятие № 11
- •Вопросы для подготовки к занятию
- •Глюкоза с6
- •Практическое занятие №12 Липиды: переваривание и всасывание. Дислипопротеинемии. Гиперлипопротеинемии.
- •Вопросы для подготовки к занятию.
- •Приложение для педиатрического факультета Особенности обмена липидов в детском возрасте
- •Практическое занятие № 13
- •Практическое занятие № 14
- •Контрольные вопросы Углеводы.
- •Практическое занятие № 16
- •1. Обезвреживание продуктов гниения белков протекает:
- •Деградация белков и пептидов в цитоплазме.
- •Протеасомы.
- •Роль шаперонов в протеолизе.
- •Практическое занятие №17
- •3.В процессе трансаминирования происходит:
1.Метод количественного определения содержания белка в сыворотке крови по цветной реакции с биуретовым реактивом.
Принцип метода: Ионы меди в щелочной среде при взаимодействии с пептидными связями в структуре белка дают комплексное соединение сине-фиолетового цвета. Интенсивность окраски прямопропорциональна концентрации белка в растворе. Оптическую плотность окрашенного раствора определяют на ФЭКе при зеленом светофильтре в кюветах шириной 10 мм.
Ход работы: В две пробирки налить по 5 мл биуретового реактива. В первую (опытная) пробирку внести 0,1 мл исследуемой сыворотки, во вторую (контрольная) – 0,1 мл дистиллированной воды. Через 30 минут инкубации при комнатной температуре колориметрировать на ФЭКе. Концентрацию белка определить при помощи калибровочного графика. Сравнить с нормой. Сделать вывод. Для анализа должно быть подготовлено 3 пробы сыворотки крови (или имитация) – норма, гипопротеинемия и гиперпротеинемия.
2. Хроматографическое разделение смеси аминокислот(гидролизат белка). Теоретический анализ хроматограмм аминокислот (одна на пару студентов) Работа 2 . Анализ хроматограмм гидролизатов различных белков.
ОБОРУДОВАНИЕ: хроматограммы различных белков, пробирки со спиртовым раствором для экстракции.
ПРИНЦИП МЕТОДА.
Аминокислотный состав гидролизатов белков исследуется с помощью распределительной хроматографии на бумаге. Распределительная хроматография основана на способности веществ по-разному адсорбироваться на адсорбентах и по-разному растворяться в полярных и неполярных растворителях. В качестве адсорбента в данном методе используется хроматографическая бумага. Разделение проводится смесью растворителей (бутанол + ледяная уксусная кислота + вода в соотношении 4:1:5). При этом вода удерживается бумагой, а органический растворитель движется по бумаге с определенной скоростью. Вещества (в данном случае аминокислоты), растворимые в органическом растворителе, будут двигаться по бумаге вместе с растворителем. Вещества, растворимые в воде, займут на хроматограмме промежуточное положение между линией старта и линией фронта растворителя. После окончания разделения и высушивания хроматограммы ее проявляют раствором нингидрина и вновь высушивают. После этого пятна разделенных аминокислот становятся видимыми и доступными для качественного и количественного анализа.
ХОД РАБОТЫ.
Студенты исследуют готовые хроматограммы различных белков.
1. Качественный анализ хроматограмм (идентификация пятен аминокислот). Производится путем расчета коэффициентов Rf для каждого пятна:
где Rf- коэффициент распределения,
lв-ва- путь, пройденный веществом от линии старта,
lф.р.- путь, пройденный фронтом растворителя от линии старта.
Пользуясь табличными значениями Rf для каждой аминокислоты, идентифицируют аминокислоты исследуемой хроматограммы. Для расчета коэффициента измеряют расстояния от линии старта до центра каждого пятна и расстояние от линии старта до линии фронта растворителя.
Рассчитанные значения коэффициентов Rf сравнивают с табличными данными и идентифицируют таким образом все пятна аминокислот на хроматограмме.
Аминокислоты |
Rf |
Аминокислоты |
Rf |
Аланин |
0.45 |
Треонин |
0.35 |
Аргинин |
0.20 |
Триптофан |
0.55 |
Аспарагиновая к-та |
0.24 |
Фенилаланин |
0.68 |
Глицин |
0.25 |
Метионин |
0.55 |
Серин |
0.27 |
Цистеин |
0.07 |
Глутаминовая к-та |
0.30 |
Цистин |
0.08 |
Пролин |
0.43 |
Лизин |
0.12 |
Валин |
0.60 |
Лейцин |
0.73 |
Задание на следующее занятие. Ферменты из РАБОЧЕЙ ТЕТРАДИ ПО БИОХИМИИ.
Вопросы по теме для самостоятельного изучения их студентами: структура и функциональная роль шаперонов.
Практические навыки, которыми должен овладеть студент по теме занятия:
- написание структур пептидов из протеиногенных аминокислот
- определение содержания белка в сыворотке крови, интерпретация полученного результата
- анализ готовых хроматограмм, интерпретация результата
Темы для реферативных сообщений – «Супервторичная и доменная структуры белка, их функциональное значение»