Рибофлавин офлоксацин

Обратите внимание на особенности структуры флуоресцирующих ве­ществ - наличие в составе их молекул конденсированных ароматических систем.

В основе реакций получения флуоресцирующих продуктов мо­гут лежать различные процессы: окисления, конденсации, образова­ние комплексных соединений, ионных ассоциатов и др. Если обра­зующийся продукт мало растворим в воде, неустойчив в водном рас­творе, либо избыток реагента мешает определению или влияет на ус­тойчивость продукта, применяют экстракционную флуориметрию. Иногда вещество не флуоресцирует или слабо флуоресцирует в вод­ной среде, но интенсивно флуоресцирует в среде органического рас­творителя.

экстракт флуоресцирует ярко голубым светом (430-435 нм)

.CH₃

K3[Fe(CN)6]

"NH^S'

экстракция бутанолом

N

тиохром

CH3

© N

N'

Л ,

H₃C N

w N

X

H₃C N

CH₂CH₂OH

CH2CH2OH

тиамин

Флуориметрическое определение, основанное на тушении флуо­ресценции, применяют для определения сульфаниламидов (тушат флуоресценцию 9-хлоракридина), Р-лактамных антибиотиков (тушат флуоресценцию меркурохрома) и т.д.

К новым подходам в люминесцентной спектроскопии относятся:

производная спектрофлуориметрия; синхронная спектрофлуориметрия; спектроскопия, основанная на эффекте Шпольского; флуоресцентная спектроскопия узких линий, фосфориметрия при комнатной температуре и др.

Глава 22 общая характеристика и теоретические основы хроматографических методов анализа

22.1. Общая характеристика

Хроматография -метод разделения смесей веществ или час­тиц, основанный на различии в скоростях их перемещения в системе, состоящей из несмешивающихся и движущихся друг относительно друга фаз.

Хроматография -гибридный метод анализа, включающий раз­деление веществ и их последующее определение при помощи специ­альных устройств - детекторов.

В качестве неподвижной фазы в хроматографическом процессе выступает твёрдое вещество (сорбент) или плёнка жидкости, нане­сённая на твёрдый носитель, а в качестве подвижной фазы - жидкость или газ, протекающий через неподвижную фазу.

В отличие от статических методов разделения - сорбции и экс­тракции хроматография является динамическим процессом.При перемещении через неподвижную фазу подвижная фаза встречает на своём пути всё новые и новые слои сорбента, что сопровождается многократными повторениями актов сорбции и десорбции разделяе­мых веществ. Хроматографическое разделение обладает большей эф­фективностью по сравнению со статическими методами.

"Схвати, подержи и отпусти"

22.2. Классификация хроматографических методов

Существует более 50 различных хроматографических методов и вариантов. В основу их классификации могут быть положены:

• агрегатное состояние подвижной и неподвижной фазы,

• геометрическая форма неподвижной фазы,

• преобладающий механизм разделения,

• цель проведения,

• способ получения хроматограммы и т.д.

Агрегатное состояние подвижной фазы

подвижная фаза - газ

газовая

жидкостная

подвижная фаза -

1 / 1 1

1

f / / t /

i i i i

-^жидкость ^4S

газо- твёрдофазная

газо­жидкостная

жидкость- жидкостная

жидкость- твёрдофазная

жидкость- гелевая

ВИД НЕПОДВИЖНОЙ ФАЗЫ

В названии хроматографического метода первым указывается агрегатное состояние подвижной фазы, а вторым - неподвижной

Колоночный вариант используется как в жидкостной, так и в газовой хроматографии, а плоскостной - только в жидкостной.

Классификация хроматографических методов в зависимости от преобладающего механизма разделения,приведена в табл. 22.1.

Реальный процесс обычно включает в себя несколько механиз­мов, обуславливающих разделение веществ, поэтому данная класси­фикация условна.

Табл. 22.1.

Классификация хроматографических методов в зависимости от преобладающего процесса, лежащего в основе разделения веществ

Вид хроматографии	Преобладающий механизм разделения
адсорбционная	различная адсорбируемость разделяемых ве­ществ неподвижной фазой
адсорбционно- комплексообразовательная	образование (в подвижной фазе или на поверх­ности неподвижной фазы) различных по устой­чивости комплексных соединений
аффинная	различная способность разделяемых веществ к биоспецифическим взаимодействиям
ионообменная	различная способность разделяемых веществ к ионному обмену
осадочная	образование осадков, различающихся по рас­творимости
распределительная	различная растворимость разделяемых веществ в неподвижной фазе или в подвижной и непод­вижной фазах
эксклюзионная	различия в размерах и форме молекул разделяе­мых веществ

технологическая

Целью является само разделение. Применяется для выделения целевого компонента из смеси либо для его очистки.

ЦЕЛЬ ПРОВЕДЕНИЯ

информационная

Цель - получение информации о составе объекта (аналитическая хроматография) либо о его физико-химических свойствах (физ ико-х имическая хроматография)

щэ

По способу получения хроматограммы хроматография бывает элюентной, фронтальной и вытеснительной (табл 22.2).

Способы получения хроматограммы

Получение хроматограммы

Сорбент, находящийся в хроматографической колонке, вначале промывают подвижной фазой (элюентом), обладающей мень­шим сродством к неподвижной фазе, чем любое из разделяемых веществ. Затем в колонку вводят исследуемую смесь веществ и продолжают непрерывно пропускать элюент. сигнал

E

Вид хромато­графии

Элюентная

(прояви-

тельная)

детектора

A + E

B + E

Табл. 22.2.

t (V)

Вытесни- тельная

Самый эффективный и в настоящее время практически единственный способ получения хроматограммы в количе­ственном анализе

Вначале в колонку вводят некоторое количество разделяемых веществ, которые распределяются в ней в порядке их сродства к неподвижной фазе. Затем в поток подвижной фазы вводят веще­ство-вытеснитель, которое имеет большее сродство к неподвиж­ной фазе, чем любой из компонентов разделяемой смеси. Фронт вытеснителя движется по колонке, вытесняя ранее сорбирован­ные вещества, которые, в свою очередь, вытесняют друг друга.

сигнал детектора

D

(вытеснитель)

B

A

E

t (V)

Фронталь­ная

Используется, в основном, для разделения макроколичеств веществ в препаративных целях.

В колонку непрерывно вводят раствор разделяемых веществ. Из колонки вначале будет выходить чистый растворитель, затем растворитель вместе с компонентом смеси, наименее прочно удерживаемым неподвижной фазой, затем смесь растворителя, наименее прочно удерживаемого компонента и следующего по

удерживанию компонента и т. д. сигнал

/

детектора

A+ B + E

A

A + E

E

t (V)

Метод использовался на ранних стадиях развития хромато­графии.