Раздел 7. Обмен нуклеотидов

РАБОТА 14. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ МОЧЕВОЙ КИСЛОТЫ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ ФЕНАНТРОЛИНОВЫМ МЕТОДОМ

БЕЗ ДЕПРОТЕИНИЗАЦИИ

Цель работы:ознакомиться с унифицированным колориметрическим методом определения мочевой кислоты.

Задачи:

• определить содержание мочевой кислоты в крови (и моче);

• проанализировать полученные результаты и сделать вывод.

Мочевая кислота является конечным продуктом метаболизма пуринов в организме человека, у других млекопитающих она под действием уриказы расщепляется до аллантоина.

Уровень концентрации мочевой кислоты в сыворотке и моче человека является важным показателем в диагностировании и контроле эффективности лечения таких заболеваний, как подагра, почечная недостаточность, лейкоз, врождённые дефекты ферментов распада пуриновых нуклеотидов.

Принцип метода.Метод основан на восстановлении фенантролинового комплекса мочевой кислотой.

Ход работы.В три пробирки вносят реагенты согласно таблице:

Реагенты	Опытная проба	Калибровочная проба	Контрольная проба
Реагент № 1	1,8 мл	1,8 мл	1,8 мл
Реагент № 2	0,2 мл	0,2 мл	0,2 мл
Стандартный раствор мочевой кислоты	-	0,05 мл	-
Сыворотка крови (моча)	0,05 мл	-	-
Дистиллированная вода	-	-	0,05 мл

Примечание.Мочу перед проведением анализа развести в 10 раз физраствором.

Содержимое пробирок перемешивают и выдерживают при комнатной температуре точно5 минут. Пробы колориметрируют против контрольной пробы при длине волны 490 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 (5) мм.

Результаты.

Концентрацию мочевой кислоты в крови рассчитывают по формуле:

С = Е_оп/ Е_ст× 595 (мкмоль/л)илиС = Е_оп/ Е_ст× 10 (мг%),

где Е_опи Е_ст– экстинкции опытной и калибровочной проб, измеренные относительно контрольной пробы;

595 или 10 – концентрация мочевой кислоты в стандартном растворе в мкмоль/л или мг% соответственно.

Концентрацию мочевой кислоты в моче рассчитывают по формуле:

С = Е_оп/ Е_ст× 595 × 10× К (мкмоль/сут)

илиС = Е_оп/ Е_ст× 10× 10 × К (мг/сут),

где Е_опи Е_ст– экстинкции опытной и калибровочной проб, измеренные относительно контрольной пробы;

595 или 10 – концентрация мочевой кислоты в стандартном растворе в мкмоль/л или мг%, соответственно;

10 – разведение мочи перед анализом;

К – количество суточной мочи, л.

В сыворотке здорового человека концентрация мочевой кислоты, определённая данным методом, составляет 238-506 мкмоль/л (4,0-8,5 мг%) у мужчин и 167-446 мкмоль/л (2,8-7,5 мг%) у женщин. В моче концентрация мочевой кислоты составляет 1490-4460 мкмоль/сут (250-750 мг/сут).

Выводы:

Раздел 8. Биохимия крови

РАБОТА 15. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАЛЬЦИЯ

В СЫВОРОТКЕ ИЛИ ПЛАЗМЕ КРОВИ УНИФИЦИРОВАННЫМ КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

Цель работы: ознакомиться с унифицированным методом определе-ния кальция в сыворотке крови.

Задачи:

• определить содержание кальция в сыворотке крови;

• проанализировать полученные результаты и сделать выводы.

Кальций является жизненно важным элементом. Основное его количество в организме (до 99%) находится в скелете в виде нерастворимого комплекса фосфатных и карбонатных солей. Кальций участвует в процессах нейромышечной возбудимости, мышечного сокращения, влияет на проницаемость клеточных мембран, принимает участие в свёртывании крови и действии многих ферментов, повышает фагоцитарную активность лейкоцитов.

Изменение содержания кальция в сыворотке крови служит диагностическим тестом при эндокринных и неврологических заболеваниях и болезнях, вызванных недостатком некоторых витаминов (например, витамина D). В норме содержание кальция в сыворотке крови человека составляет 9-11 мг%.

Принцип метода.Кальций в щелочной среде образует окрашенный комплекс со-крезолфталеин комплексоном. Интенсив-ность окраски пропорциональна концентрации кальция в пробе.

Ход работы.В три пробирки вносят реагенты, согласно таблице:

	Опытная проба, мл	Калибровочная проба, мл	Контрольная проба, мл
Сыворотка или плазма	0,05	-	-
Дистиллированная вода	-	-	0,05
Реагент № 1	1,0	1,0	1,0
Реагент № 2	1,0	1,0	1,0
Стандартный раствор Ca^2+	-	0,05	-

Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют 5 минут при температуре 20-25˚С. Измеряют оптическe. плотность опытной и калибровочной проб против контрольной пробы в кюветах на 5 мм (10 мм) при длине волны 570 нм (ФЭК 540-590 нм). Окраска растворов стабильна не менее часа. Если концентрация кальция превышает 3,75 ммоль/л (15 мг%), разведите образец в 2 раза дистиллированной водой, повторите анализ и умножьте результат на 2.

Результаты:концентрацию кальция рассчитывают по формуле:

С = Е_оп/ Е_ст× 2,5 (ммоль/л), или

С = Е_оп/ Е_ст× 10 (мг%),

где Е_опи Е_ст– экстинкции опытной и калибровочной проб, измеренные относительно контрольной пробы;

2,5 и 10 – концентрация кальция в стандартном растворе в ммоль/л и мг%, соответственно.

В сыворотке здорового человека содержание кальция, определён-ное данным методом составляет 2,02-2,6 ммоль/л (8,1-10,4 мг%).

Выводы:

РАБОТА 16. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ НЕОРГАНИЧЕСКОГО ФОСФОРА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ МОЛИБДАТНЫМ UV-МЕТОДОМ

Цель работы:ознакомиться с унифицированным колориметричес-ким методом определения неорганического фосфора крови.

Задачи:

• определить содержание фосфора в крови;

• проанализировать полученные результаты и сделать вывод.

Принцип метода:неорганический фосфор образует в растворе серной кислоты при взаимодействии с молибдатом аммония фосфомолибдатный комплекс. Окраска раствора пропорциональна концентрации фосфора в пробе.

Ход работы.В три пробирки вносят реагенты согласно таблице:

	Опытная проба, мл	Калибровочная проба, мл	Контрольная проба, мл
Сыворотка крови	0,02	-	-
Дистиллированная вода	-	-	0,02
Рабочий реагент	2,0	2,0	2,0
Стандартный раствор фосфора	-	0,02	-

Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют 5 минут при температуре 20-25˚С. Измеряют оптическe. плотность опытной и калибровочной проб против контрольной пробы в кюветах на 5 мм (10 мм) при длине волны 340 нм. Окраска растворов стабильна в течение суток.

Результаты:концентрацию фосфора рассчитывают по формуле:

С = Е_оп/ Е_ст× 1,615 (ммоль/л) или

С = Е_оп/ Е_ст× 5 (мг%),

где Е_опи Е_ст– экстинкции опытной и калибровочной проб, измеренные относительно контрольной пробы;

1,615 или 5 – концентрация фосфора в стандартном растворе в ммоль/л или мг%, соответственно.

В сыворотке здорового человека содержание фосфора, определён-ное данным методом, составляет 0,87-1,45 ммоль/л (2,7-4,5 мг%).

Выводы: