2. Реакции на мочевую кислоту

Мочевая кислота – конечный продукт обмена пуриновых азотистых оснований. В норме с мочой выделяется в течение суток 0,2-1,2 г (1,2-7,1 ммоль) мочевой кислоты.

Реакция с азотистокислым серебром

Принцип метода. При взаимодействии мочевой кислоты с азотистокислым серебром в присутствии гидроксида аммония образуется осадок мочекислого серебра бурого цвета:

Ход работы.К 1 мл мочи добавляют 1 каплю 15%-го раствора гидроксида аммония, 5 капель 1%-го раствора нитрата серебра и перемешивают. При стоянии через 3-5 минут выпадает незначитель-ный рыхлый осадок мочекислого серебра, окрашенный в бурый цвет.

3. Реакции на креатинин

Креатинин является одним из конечных продуктов азотистого обмена. Азот креатинина составляет 2,5-7,0% всего азота мочи. За сутки с мочой выделяется 1,0-2,0 г (8,8-17,7 ммоль) креатинина у мужчин и 0,8-1,8 г (7,1-15,9 ммоль) – у женщин. Гиперкреатинурией сопровождаются лихорадочные состояния, острые инфекции, сахарный диабет, мышечные атрофия и дистрофия, миастения. Гипокреатинурия наблюдается при болезнях почек, алиментарной дистрофии, в старческом возрасте.

Реакция Яффе с пикриновой кислотой

Креатинин реагирует с пикриновой кислотой в щелочной среде с образованием таутомера пикрата креатинина, имеющего оранжево-красный цвет:

Ход работы.К 1 мл мочи прибавляют 5-6 капель 10%-го раствора гидроксида натрия, 4-5 капель насыщенного раствора пикриновой кислоты и перемешивают. Появляется оранжево-красная окраска, усиливающаяся при стоянии.

Результатыоформите в виде таблицы.

Название реакции	Исследуемый компонент	Используемые реактивы	Наблюдаемый результат	Чем обусловлена реакция
Неорганические компоненты
Органические компоненты

Выводы:

РАБОТА 19. КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА КОМПОНЕНТЫ ПАТОЛОГИЧЕСКОЙ МОЧИ

Цель работы:ознакомиться с методами определения возможных компонентов патологической мочи.

Задачи:

• определить содержание белка, глюкозы, кетоновых тел, крови в представленных образцах патологической мочи;

• проанализировать полученные результаты и сделать выводы.

1. Качественные реакции на белок в моче

В нормальной моче содержатся лишь следовые количества белка, которые не обнаруживаются обычными качественными реакциями. При патологических состояниях белок в моче выявляется качественным и количественным анализом. Белок в моче появляется при нефритах, нефрозах, сердечной декомпенсации, острых инфекционных и других заболеваниях.

Принцип метода. Для качественного обнаружения белка в моче используют реакции, основанные на его денатурации. Перед анализом мочу фильтруют.

а) Реакция с сульфосалициловой кислотой

Ход работы. В 2 пробирки (опыт и контроль) наливают по 1-2 мл профильтрованной мочи. В опытную пробирку добавляют 2-3 капли 20%-го раствора сульфосалициловой кислоты, а в контрольную – 2-3 капли дистиллированной воды. Содержимое каждой пробирки перемешивают и сравнивают опыт и контроль в проходящем свете на чёрном фоне. Если моча содержит белок, то в опытной пробирке раствор мутнеет или выпадает белый осадок. Реакция с сульфосалициловой кислотой является самой чувствительной качественной пробой на белок и позволяет выявить 0,015 г/л белка.

б) Проба Геллера

Ход работы. В пробирку наливают 1 мл 50% азотной кислоты. Затем пробирку наклоняют под углом 45° и осторожно по стенке приливают из пипетки 1 мл профильтрованной мочи. Моча, имеющая меньшую плотность, наслаивается на кислоту. Пробирку переводят в прежнее вертикальное положение и рассматривают границу жидкостей в проходящем свете на чёрном фоне. При наличии белка в моче на границе двух жидкостей (кислота / моча) образуется белый аморфный осадок или муть в виде кольца.

При отсутствии белка иногда на границе жидкостей появляется красное прозрачное кольцо, обусловленное изменением пигментов мочи под действием азотной кислоты. Беловатое кольцо выше границы жидкостей может состоять из уратов, которые растворяются при нагревании.

в) Проба Ларионовой

Ход работы. Проба Ларионовой является модификацией пробы Геллера. В пробирку наливают 1-2 мл реактива Ларионовой (1%-й раствор азотной кислоты, приготовленный на насыщенном растворе хлорида натрия) и на него наслаивают профильтрованную мочу. Присутствие белка в моче обнаруживают по появлению кольца на границе жидкостей.

2. Качественные реакции на сахара в моче (глюкозу)

Углеводы (в основном моносахариды) появляются в моче при различных патологических состояниях. Так, фруктоземия и фруктозурия сопровождаются выделением фруктозы. При мальтазном и лактазном дефицитах в моче можно обнаружить лактозу или мальтозу. Пентозы появляются в моче при пентозурии и прогрессирующей мышечной дистрофии. Выделение с мочой гликозаминогликанов свидетельствует о мукополисахаридозе. Наибольшее клиническое значение имеет выявление глюкозы в моче. Глюкозурия чаще всего обусловлена повышением сахара в крови при диабете или нарушением функции почек.

Принцип метода. Большинство качественных реакций на сахара основаны на их редуцирующих свойствах.

а) Проба Троммера

Ход работы. К 1 мл мочи приливают равный объём (1 мл) 2н раствора гидроксида натрия. Затем добавляют по каплям при постоянном перемешивании 0,25М раствор сульфата меди до появления голубого осадка, не исчезающего после встряхивания. Смесь нагревают до кипения. При наличии глюкозы голубая окраска переходит в жёлто-красную.

Если сульфат меди был добавлен в избытке, то при нагревании образуется чёрный осадок оксида меди (II), мешающий открытию глюкозы.

б) Проба Фелинга

В состав реактива Фелинга входят щелочь натрия, сульфат меди и сегнетовая соль, которая связывает избыток ионов меди, препятствуя выпадению чёрного осадка оксида меди (II).

Ход работы. В пробирку наливают по 0,5 мл растворов Фелинга I и Фелинга II и 1 мл исследуемой мочи. Содержимое перемешивают и нагревают на кипящей водяной бане в течение 2-3 минут. Появление жёлтого или красноватого осадка свидетельствует о наличии глюкозы в моче.

в) Проба Бенедикта

Проба Бенедикта является самой чувствительной из всех качественных реакций на сахар в моче. Преимуществом этой пробы является также то, что реактив Бенедикта (смесь цитрата натрия, карбоната натрия и сульфата меди) практически не взаимодействует с другими редуцирующими органическими соединениями мочи. Проба Бенедикта может служить ориентировочным полуколичественным методом определения сахара в моче.

Ход работы. В пробирку наливают 1,5 мл реактива Бенедикта, добавляют 3-4 капли мочи и перемешивают. Смесь нагревают на кипящей водяной бане 2-3 минуты и охлаждают. При наличии сахара через 5-7 минут на дне пробирки появляется осадок, окраска которого зависит от концентрации глюкозы в моче:

№п/п	Цвет	Количество глюкозы, %
1	зеленоватый (без осадка)	≤0,05
2	горохово-зелёный	0,1- 0,3
3	зелёный	0,5- 0,6
4	жёлтый	1,0
5	оранжевый	1,5
6	красный	≥2

3. Качественные реакции на кетоновые тела в моче

Кетоновые (ацетоновые) тела состоят из ацетоацетата (ацетоуксусная кислота), β-гидроксибутирата (β-оксимасляная кислота) и ацетона.

Кетоновые тела образуются при распаде жирных кислот и кетогенных аминокислот (лейцина, изолейцина, фенилаланина и тирозина). В моче здорового человека кетоновые тела содержатся в минимальных количествах, которые не выявляются обычными качественными реакциями.

Кетонурия бывает алиментарной и патологической. Алиментарная кетонурия возникает вследствие дефектов диеты и наблюдается после длительного приёма жирной пищи или пищи, лишённой углеводов.

Кетонурия при патологических состояниях связана с нарушениями углеводного и липидного обмена, а также функции ЦНС. Чаще всего кетоновые тела появляются в моче при сахарном диабете, при этом кетонурия сочетается с глюкозурией. Кетоновые тела выделяются с мочой при голодании, истощении, лихорадочных состояниях, травмах черепа, резком эмоциональном возбуждении, тиреотоксикозе, синдроме Иценко – Кушинга. Кетонурия нередко наблюдается при инфекционных заболеваниях (скарлатине, гриппе, туберкулёзе, дизентерии, менингите и др.).

Кетонурия у детей встречается чаще, чем у взрослых. Это объясняется лабильностью обмена углеводов и склонностью к кетозу детей, особенно раннего возраста. Кетонурия является специфическим диагностическим признаком при ацетонемической рвоте, которая нередко бывает у истощённых детей, при токсической диспепсии.

а) Проба Ланге

Ход работы. В пробирку наливают 4-6 мл мочи и осторожно под тягой добавляют мерной пробиркой 1 мл концентрированной уксусной кислоты и 0,5 мл свежеприготовленного 10%-го раствора нитропруссида натрия. Содержимое пробирки перемешивают стеклянной палочкой. Во вторую пробирку наливают под тягой 1,5-2 мл концентрированного раствора аммиака. Обе пробирки наклоняют под углом 45° и раствор аммиака медленно по стенке выливают (наслаивают) в первую пробирку.

Проба считается положительной, если в течение 3 минут на границе 2 жидкостей появляется розово-фиолетовое кольцо. Окраска кольца в присутствии ацетона слабая, а ацетоацетата – более интенсивная.

б) Проба Либена

Ход работы. К 2 мл мочи добавляют 10 капель 10%-го раствора гидроксида натрия и затем по каплям раствор Люголя (раствор йода в йодистом калии) до появления бледно-жёлтой окраски.

При наличии в моче кетоновых тел раствор мутнеет вследствие выпадения в осадок йодоформа (CHI₃), имеющего характерный запах, усиливающийся при нагревании.

4. Качественные реакции на кровь и кровяные пигменты в моче

Форменные элементы крови и кровяные пигменты (гемоглобин и его производные) – патологические составные части мочи. Появление в моче эритроцитов называется гематурией, а кровяных пигментов – гемоглобинурией. При гематурии моча непрозрачная, имеет красноватый оттенок; при микроскопическом исследовании осадка такой мочи обнаруживаются эритроциты и лейкоциты. Кровяные пигменты окрашивают мочу в красный или бурый цвет.

Гематурии бывают истинными и ложными (не связанными с патологиями почек и мочевыводящих путей). Истинные гематурии делятся на ренальные (почечные), постренальные (внепочечные) и смешанные.

Почечные истинные гематурии могут быть органического и функционального происхождения. Органические гематурии являются следствием поражения паренхимы почек (нефриты, нефрозы, инфаркт почек, тромбоз почечных вен). Функциональные почечные гематурии возникают из-за повышения почечного фильтра и чаще наблюдаются у детей грудного и раннего возраста при перегревании, инфекциях, рахите, бронхопневмонии, сепсисе.

Постренальные (внепочечные) гематурии бывают при воспалительных процессах, травмах мочевыводящих путей (пиелиты, пиелоциститы, мочевые камни, опухоли).

Гематурии смешанного типа встречаются при геморрагических диатезах, гипо- и авитаминозе С, анемиях, врождённых анатомических дефектах почек.

Гемоглобинурии делятся на две группы: первичные (идиопатические) и вторичные (симптоматические). Идиопатические гемоглобинурии выявляются после сильного охлаждения тела (холодовая гемоглобинурия), усиленной физической нагрузки (спортивная гемоглобинурия), эпилептического припадка. Симптоматические гемоглобинурии наблюдаются при переливании несовместимой по резус-фактору крови, при инфекционных болезнях (скарлатина, тиф, ангина, малярия), в результате отравления гемолитическими ядами (сероводородом, анилиновыми красителями, парами соляной и уксусной кислот и др.), после тяжёлой травмы, при гемолитических анемиях.

Принцип метода. Все качественные реакции на обнаружение крови в моче основаны на окислении некоторых органических соединений (гваяковой смолы, пирамидина, бензидина и др.) атомарным кислородом, который образуется при разложении пероксида водорода в присутствии гемоглобина, обладающего пероксидазным действием.

а) Бензидиновая проба

Ход работы. К 1 мл свежей мочи осторожно под тягой добавляют 1 мл бензидинового реактива и 8-10 капель 3%-го раствора перекиси водорода. Если в крови присутствует гемоглобин, то смесь окрашивается в синий или зелёный цвет.

При длительном стоянии мочи гемоглобин превращается в метгемоглобин, и тогда обнаружить кровь бензидиновой реакцией не удаётся. С такой мочой лучше сделать пробу Геллера.

б) Проба Геллера

Ход работы.К 2 мл мочи добавляют 5-6 капель 10-%-го раствора гидроксида натрия до сильно щелочной реакции по универсальной индикаторной бумажке. Затем смесь нагревают до кипения. Образуется хлопьевидный осадок фосфатов. В присутствии кровяных пигментов осадок фосфатов приобретает оранжево-коричневую окраску, при этом цвет осадка темнее цвета мочи. В нормальной моче осадок белый, его цвет светлее цвета мочи.

Результатыоформите в виде таблицы:

№п/п	Название реакции	Исследуемый компонент	Используемые реактивы	Наблюдаемый результат

Выводы: