- •Физическая и коллоидная химия лабораторный Практикум
- •Рецензент:
- •Содержание
- •Введение
- •Лабораторная работа №1 Определение молярной массы неэлектролита криоскопическим методом
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа №2 Измерение электропроводности электролитов
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа №3 Определение вязкости растворов
- •Типа впж-2
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа №4 Определение константы скорости гидролиза сахарозы
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа № 5 Изучение микрогетерогенных систем
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа № 6 Седиментационный анализ суспензий и порошков
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа № 7 Измерение поверхностного натяжения водных растворов пав
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа №8 Изучение процесса адсорбции на твердом сорбенте
- •Лабораторная работа № 9 Получение коллоидных растворов
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа №10 Изучение электролитной коагуляции
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа №11 Электрофорез. Измерение величины дзета-потенциала
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа №12 Образование и разрушение растворов высокомолекулярных веществ
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа № 13 Измерение стационарных потенциалов металлов. Измерение токов коррозии
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа № 14 Потенциометрическое титрование и определение рН
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа №15 Фотоколориметрическое определение концентраций растворов
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа № 16 Кондуктометрическое титрование
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа № 17 Фотонефелометрия
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа №18 Определение размеров частиц золя турбидиметрическим методом
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа № 19 Определения нитратов в растительной продукции и кислотности пищевых объектов потенциометрическим методом
- •7. Определение нитратов в растительной продукции
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторная работа № 20 Фотоколометрическое определение содержания лактозы в молоке и растворимых белков в мясе
- •Рекомендуемая литература для подготовки
- •Рекомендации по оформлению отчетов о лабораторных работах Оценка точности измерения физико-химических величин
- •1. Обработка результатов прямых измерений
- •2. Обработка результатов косвенных измерений
- •3. Вычисления без точного учета погрешностей
- •Правила составления таблиц и построения графиков
- •Словарь
- •Приложения
- •Основные свойства логарифмов
- •Отыскание логарифма по числу
- •Физическая и коллоидная химия лабораторный Практикум Чураков Владимир Григорьевич
- •426069, Г. Ижевск, ул. Студенческая, 11.
Вопросы для самоконтроля
1. Какие электроды используют в качестве электродов сравнения?
2. Каково устройство хлорсеребряного электрода?
3. Каково устройство стеклянного электрода?
4. Каковы особенности потенциометрического определения нитратов в сельскохозяйственной продукции?
5. Как определить содержание нитрат-ионов в растительной продукции?
Лабораторная работа № 20 Фотоколометрическое определение содержания лактозы в молоке и растворимых белков в мясе
Цель работы - определить фотоколориметрически концентрацию лактозы в молоке и растворимого белка в мясе.
Для успешного выполнения данной работы необходимо ознакомиться с теоретическим материалом, изложенным в лабораторной работе №10. Метод фотоколориметрического определения содержания лактозы в молоке основан на способности моно-, ди- и полисахаридов со свободными и потенциально свободными редуцирующими группами окрашиваться от светло-жёлтого до жёлто-коричневого цвета при действии фенола и концентрированной серной кислоты.
Практическая часть
1. Приготовление стандартных растворов лактозы
Для построения калибровочного графика 0,0125 г чистой лактозы (моногидрат) растворите в мерной колбе на 250 мл. Микропипеткой внесите в сухие и чистые пробирки от 0 до 2 мл (с интервалами в 0,2 мл) раствора лактозы и долейте воды до 2 мл, внесите в первую пробирку только 2 мл воды (смотри таблицу 20.1).
Таблица 20.1 Приготовление стандартных растворов лактозы
№ раствора |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
Vр-ра лактозы, мл |
0 |
0,2 |
0,4 |
0,6 |
0,8 |
1,0 |
1,2 |
1,4 |
1,6 |
1,8 |
2,0 |
V воды, мл |
2 |
1,8 |
1,6 |
1,4 |
1,2 |
1,0 |
0,8 |
0,6 |
0,4 |
0,2 |
0,0 |
Слактозы, мкг/ 2 мл |
0 |
10 |
20 |
30 |
40 |
50 |
60 |
70 |
80 |
90 |
100 |
В каждую колбу прибавьте 6 капель раствора фенола (80 г кристаллического фенола +20 мл воды нагревают при до полного растворения и хранят в тёмной бутылке). После этого в каждую пробирку прилейте по 5 мл концентрированной серной кислоты.
Измерение оптической плотности стандартных растворов. Построение калибровочного графика
Измерьте оптические плотности всех стандартных растворов на выбранном светофильтре, и постройте калибровочную прямую (см. работу 10).
Измерения оптической плотности необходимо начать с раствора наименьшей концентрации. Результаты измерений занесите в таблицу 20.2.
По полученным данным (таблица 20.2) на миллиметровой бумаге постройте калибровочную прямую D = f (C) .
Таблица 20.2 Оптические плотности стандартных растворов
№ раствора |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
Концентрация, C |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Оптическая плотность, D |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
3. Определение содержания лактозы в молоке
1 г молока перенесите количественно в мерную колбу на 1 литр, доведите водой до метки и перемешайте. 2 мл этого раствора налейте в чистую и сухую пробирку, прибавьте 6 капель раствора фенола, добавьте 5 мл концентрированной серной кислоты и перемешайте. Сразу же появляется жёлто – коричневая окраска, быстро доходящая до максимума. Спустя 15 минут, не охлаждая, определите оптическую плотность раствора при . Содержание лактозы в молоке рассчитайте по формуле:
, (1)
где g – содержание лактозы в 2 мл разведённого молока, найденное по калибровочному графику (мкг).
4.Определение содержания водорастворимых белков мяса с биуретовым реактивом
Результаты многочисленных исследований свидетельствуют о незначительной изменчивости и относительном постоянстве химического состава мышечной ткани животных. Количество белка при этом колеблется в пределах 18,51,85 %, на долю воды приходится 75,3%, прочие вещества составляют 0,1–0,3 %, зола 1,10,1%.
Все белки можно подразделить на:
сакроплазматические: миоген, глобулин Х, миоглобулин, миоглобин –это водорастворимые белки, находящиеся в сакроплазме;
миофибриллярные: миозин, актин, тропомиозин – водорастворимые белки, находящиеся в миофибриллах и участвующие в сокращениях,
белки стромы: коллаген и эластин – нерастворимые в воде и солевых растворах.
Доля водорастворимых белков в общей сумме белков составляет 90%.
Метод определения содержания водорастворимых белков с биуретовым реактивом основан на образовании окрашенного комплекса пептидных связей белков с ионами Cu+2 в щелочной среде. Белок извлекается из мяса солевым раствором, затем к этому раствору добавляется биурет и по интенсивности окраски фотоколориметрически, используя калибровочный график, определяется содержание белка.
4.1.Извлечение белковой фракции из образца
Полнота извлечения белка зависит от измельчения мяса, природы экстрагирующего раствора и времени экстракции. Взвесьте 3 г мяса, измельчите и добавьте 20 мл 0,6 М раствора KCl. Суспензию интенсивно перемешивайте на магнитной мешалке 20 минут.
Приготовление биуретового реактива
Возьмите 0,15 г CuSO4, 0,6 г сегнетовой соли и всё это растворите в 50 мл дистиллированной воды. Далее при перемешивании прилейте 30 мл 10 % -го раствора NaOH и 0,1 г KI. Объём раствора доведите до 100 мл. Всё это лучше делать в мерной колбе на 100 мл.
Получение окрашенных комплексов белка мяса
Суспензию мяса в растворе KCl отфильтруйте. Возьмите 2 мл фильтрата, добавьте 5 мл раствора биурета и перемешивайте 20 минут. Полученный раствор отфотоколориметрировать.
4.4. Построение калибровочного графика
Для получения калибровочной зависимости оптической плотности от содержания белка в растворе используйте серию стандартных растворов альбумина. Для этого приготовьте по 10 мл следующих растворов: С1 = 2 мг/мл; С2 = 6 мг/мл; С3 = 10 мг/мл; С4 = 14 мг/мл; С5 = 18 мг/мл. Возьмите пять чистых пробирок, добавьте в каждую по 2 мл стандартного раствора альбумина и по 5 мл раствора биурета. Выдержите 20 минут и фотоколориметрируйте на КФК–2. Данные занесите в табл. 20.3.
Таблица 20.3 Данные фотоколориметрирования стандартных растворов альбумина
Концентрация альбумина, |
2 |
6 |
10 |
14 |
18 |
Оптическая плотность, D |
|
|
|
|
|
Рисунок
20.2 Зависимость
По данным таблицы 20.3 постройте графическую зависимость (рисунок 20.2) оптической плотности от концентрации белка (альбумина) в растворе. Далее эта зависимость и будет тем калибровочным графиком, по которому будем находить содержание белка в экстракте мяса.
4.5.Определение содержания белка в мясе
Окрашенный раствор, полученный на основе экстракции мяса отфотоколориметрируйте. Используя найденную для этого раствора оптическую плотность (D) по калибровочному графику (рисунок 20.2) найдите концентрацию белка в растворе в мг/мл (C). Для расчёта содержания белка в мясе в мг/г мяса () необходим перерасчёт:
Или в процентах по массе():