- •Министерство сельского хозяйства и продовольствия республики беларусь
- •Введение
- •Раздел 1. Физиология и биохимия растительной клетки
- •Работа 1. Проницаемость живой и мертвой протоплазмы
- •Работа 2. Влияние ионов калия и кальция на состояние протоплазмы
- •Работа 3. Определение редуцирующих сахаров
- •Работа 4. Определение кислотного числа жиров
- •Работа 5. Определение изоэлектрической точки белка
- •Работа 6. Обнаружение дегидрогеназ в растительных тканях
- •Работа 7. Газометрическое определение активности каталазы растительных тканей
- •Работа 8. Влияние кислотности среды на активность каталазы
- •Работа 9. Влияние температуры на скорость гидролиза крахмала амилазами
- •Раздел 2. Водный обмен растений
- •Работа 10. Определение содержания воды и сухого вещества в растительном материале
- •Работа 11. Получение полупроницаемой перепонки и наблюдение явлений осмоса
- •Работа 12. Явления плазмолиза и деплазмолиза в растительной клетке
- •Работа 13. Определение водного потенциала растительных тканей с помощью рефрактометра (по н. А. Максимову и н. С. Петинову)
- •Работа 14. Определение осмотического потенциала клеточного сока методом плазмолиза
- •Работа 15. Влияние света и влажности воздуха на транспирацию
- •Работа 16. Определение интенсивности транспирации по методу л.А.Иванова (при помощи торсионных весов)
- •Работа 17. Определение относительной транспирации
- •Работа 18. Определение интенсивности транспирации объёмным методом (в модификации в. П. Моисеева)
- •Работа 19. Определение водного дефицита растений
- •Раздел 3. Фотосинтез
- •Работа 20. Изучение химических свойств пигментов зеленого листа
- •Работа 21. Оптические свойства пигментов
- •Работа 22. Определение содержания хлорофилла в листьях
- •Работа 23. Определение интенсивности истинного фотосинтеза по количеству накопленного сухого вещества
- •Работа 24. Определение чистой продуктивности фотосинтеза
- •Раздел 7. Дыхание растений
- •Работа 25. Расходование органических веществ на дыхание
- •Работа 26. Влияние температуры на интенсивность дыхания
- •Работа 27. Определение величины дыхательного коэффициента
- •Раздел 8. Минеральное питание растений
- •Работа 28. Влияние отдельных элементов минерального питания на рост и развитие растений
- •156,36 Г MgSо42н2о содержит 32,06 г s,
- •Работа 29. Определение общей и рабочей адсорбирующей поверхности корней методом д. А. Сабинина и и. И. Колосова
- •Работа 30. Влияние концентрации раствора аммиачной селитры (нитрата аммония) на прорастание семян
- •Работа 31. Антагонизм ионов
- •Раздел 9. Рост и развитие растений
- •Работа 32. Влияние света на рост растений
- •Работа 33. Влияние температуры на рост растений
- •Работа 34. Влияние гетероауксина на рост корней
- •Работа 35. Влияние гетероауксина на укоренение черенков
- •Работа 36. Обнаружение углеводов при прорастании семян масличных культур
- •Раздел 10. Приспособление и устойчивость растений
- •Работа 37. Влияние температуры на прорастание семян
- •Работа 38. Защитное действие сахара на протоплазму при замораживании
- •Работа 39. Определение солеустойчивости растений
- •Раздел 11. Физиология и биохимия формирования качества урожая сельскохозяйственных культур
- •Работа 40. Определение белка в семенах по биуретовой реакции
- •Работа 41. Определение содержания клейковины в зерне
- •Работа 42. Определение индекса деформации клейковины
- •Работа 43. Колориметрический метод определения сахаров
- •Работа 44. Определение содержания крахмала поляриметрическим методом
- •Работа 45. Определение содержания масла в семенах при помощи рефрактометра (по а.И. Ермакову)
- •Работа 46. Быстрый рефрактометрический метод определения йодного числа жиров
- •Работа 47. Определение общей кислотности растительных тканей
- •Работа 48. Обнаружение алкалоидов в растениях
- •Работа 49. Обнаружение дубильных веществ в растениях
- •Работа 50. Определение аскорбиновой кислоты (витамина с)
- •Работа 51. Количественное определение каротина
- •Список литературы
- •Раздел 1. Физиология и биохимия растительной клетки 4
- •Раздел 2. Водный обмен растений 22
- •Раздел 3. Фотосинтез 45
- •Виктор Потапович Моисеев, Николай Петрович Решецкий
- •213407 Г. Горки Могилевской обл., ул. Мичурина, 5
Работа 22. Определение содержания хлорофилла в листьях
Содержание хлорофилла специфично для листьев каждого вида и сорта растений и существенно изменяется в зависимости от освещения, минерального питания, возраста листьев и других условий. Среднее содержание хлорофилла в листьях составляет около 1 % сухой массы, а содержание хлорофилла в хлоропластах – около 5…6 %. Между содержанием хлорофилла и интенсивностью фотосинтеза выявлена зависимость.
Для определения содержания хлорофилла в листьях сначала получают ацетоновую вытяжку, затем с помощью фотоэлектроколориметра (ФЭК) определяют оптическую плотность раствора и концентрацию в нем хлорофилла по графику.
Цель работы. Определить содержание хлорофилла в листьях различных сельскохозяйственных культур, светолюбивых и теневыносливых растений, комнатных растений, листьев разного возраста.
Ход работы. С растений срезают листья, измельчают ножницами, отбросив черешки и крупные жилки, и берут две навески. Одну навеску массой 4…5 г используют для определения процента сухого вещества в листьях. Ее помещают в бюкс и высушивают до постоянной массы в сушильном шкафу при температуре 105 С.
Вторую навеску массой 0,5 г используют для количественного определения хлорофилла. Ее помещают в ступку и растирают с небольшим количеством кварцевого песка и СаСО3 до однородной массы. Затем в ступку приливают 3…4 мл ацетона и продолжают растирание до получения темно-зеленой вытяжки.
Полученную ацетоновую вытяжку фильтруют через сухой бумажный фильтр в мерный цилиндр. Фильтр должен быть ниже края воронки на 2…3 мм. Вытяжку отбирают из ступки с помощью специальной пипетки, не захватывая растертую массу, и переносят на фильтр, не допуская потерь. К оставшейся в ступке массе прибавляют еще 1…3 мл ацетона, продолжают растирать, а после отстаивания вытяжку переносят на фильтр.
Извлечение хлорофилла производят небольшими порциями ацетона до полного обесцвечивания растительного материала. Затем ступку, пестик и фильтр обмывают небольшими порциями ацетона до полного исчезновения зеленой окраски. Объем вытяжки доводят чистым ацетоном до 25…30 мл. Объем полученной вытяжки записывают в табл. 24. Вытяжку до анализа на ФЭКе помещают в темное место.
Определение оптической плотности полученного раствора производят на фотоэлектроколориметре. Измерения начинают спустя 15 мин после включения прибора. При определении оптической плотности раствора используют светло-красный светофильтр.
Измерения проводят не менее трех раз и вычисляют среднее значение оптической плотности. Полученные данные записывают в табл. 24.
Т а б л и ц а 24. Определение содержания хлорофилла в листьях
Объект (вариант опыта) |
Навеска для определения процента сухого вещества |
Навеска для определения количества хлорофилла |
Оптическая плотность раствора |
Концентрация хлорофилла, мг/л |
Содержание хлорофилла в полученном объеме вытяжки |
Содержание хлорофилла в листьях, в % на сухую или сырую массу | |||
сырая, г |
сухая, г |
содержание сухого вещества, % |
сырая, мг |
сухая, мг | |||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Наиболее точные результаты получаются при работе на ФЭКе в пределах оптической плотности от 0,1 до 0,4. Если оптическая плотность больше 0,5 вытяжку следует разбавить в два раза. Если показания оптической плотности окажутся ниже 0,08 необходимо выполнить всю работу сначала, взяв большую навеску листьев.
Используя полученную на ФЭКе величину оптической плотности, определяют концентрацию хлорофилла в ацетоновом растворе по калибровочной кривой.
Зная концентрацию хлорофилла в растворе, рассчитывают его содержание в полученном объеме вытяжки (Р) по формуле:
Р = мг,
где С – концентрация хлорофилла в растворе, мг/1 л;
V – объем полученной вытяжки, мл.
Содержание хлорофилла в процентах (Х) на сухое или сырое вещество вычисляют по формуле:
Х = %,
где Р – содержание хлорофилла в полученном объеме вытяжки, мг;
Н – масса навески (сухой или сырой), мг.
После выполнения расчетов по всем вариантам опыта составляют сводную таблицу и делают выводы.
Вопросы:
Сколько содержится хлорофилла в листьях и хлоропластах?
Как влияет содержание хлорофилла на интенсивность фотосинтеза?
Почему при количественном определении хлорофилла на ФЭКе используют светло-красный светофильтр?
Материалы и оборудование: листья разных растений, ФЭК, весы, ацетон, сушильный шкаф, СаСО3, кварцевый песок, мерные цилиндры на 50 мл, ступки с пестиком, бумажные фильтры, воронки, ножницы, пипетки для переноса вытяжки.