Литература

• Скоупс Р. Методы очистки белков.– «Мир»: М., 1985

• Фрайфелдер Д. Физическая биохимия. – «Мир»: М., 1980

• Остерман Л.А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. Наука: М., 1985, с.109-112, 145-162

Занятие № 2 (лабораторная работа)

ТЕМА: Определение количества и состояния заряженных групп белков методом потенциометрического титрования

Цель: Получить практические навыки исследования кислотно-основных свойств биологических молекул

Вопросы для рассмотрения на занятии:

1. Кислотно-основные свойства аминокислот.

2. Кислотно-основные свойства белков.

3. Выполнение практической работы по определению количества и состояния заряженных групп белков с помощью титратора VIT90.

Практическая работа:

Реактивы и оборудование: Видеотитратор VIT90, растворы белков (альбумин, трипсин, гемоглобин) в концентрации 10 мг/мл, физраствор (NaCl 0,9%), 0,1М раствор HCl, 0,05М раствор NaOH, мерный цилиндр 50 мл, дозатор 0,1 мл.

1. Ознакомление с элементами управления титратора (с помощью преподавателя). Обратите внимание, что кроме клавиатуры, следует использовать и клавиши с переменной функцией (появляются соответствующие надписи на экране.

2. Включить VIT90 и блок бюреток.

3. Промыть электроды дистиллированной водой и просушить фильтровальной бумагой.

4. Войти в режим выбора программы измерения (клавиша INDEX).

5. Выбрать программу 0 (тип измерения CURVE – регистрация кривой).

6. Заполнить измерительную кювету 20 мл физраствора.

7. Добавить 0,3 мл раствора белка.

8. Добавить 0,1-0,2 мл HCl, рН должен быть около 3.

9. Нажимая последовательно BEGIN, RUN запустить программу измерения.

10. После окончания титрования зарисовать характер кривой и запротоколировать данные (нажать клавишу ALL POINTS).

11. Используя справочные данные, определите какие группы соответствуют отдельным особым точкам на кривой.

12. Используя данные протокола, оцените количество определяемых групп.

Таблица 13.1 Значения рК для некоторых аминокислот

	Аминокислота	рК
1	Аргинин
2	Аспарагиновая кислота
3	Глутаминовая кислота
4	Гистидин
5	Лизин
6	Тирозин

Задание по группам

Группа	Определяемый белок	Особые точки	Аминокислотные остатки	Количество групп
1	Гемоглобин
2	Альбумин бычий
3	Трипсин

Самостоятельная работа

1. Что такое потенциометрическое титрование.

2. Физический смысл pK.

3. рК аминокислот.

4. Какими факторами определяется количество титруемых групп белков.