- •З біологічної хімії
- •Рецензент проф. В.Д. Бовт
- •Питання до іспиту……………………………………………………………… 79
- •Тематичне розподілення навчального матеріалу а. Тематичне розподілення лекційного матеріалу
- •В. Тематичний план лабораторних і семінарських занять
- •Техніка безпеки при роботі у біохімічній лабораторії
- •Забороняється з метою уникнення травм, опіків, нещасних випадків:
- •Перша домедична допомога
- •Вимоги до оформлення лабораторного журналу і робочого місця
- •Теоретична частина:
- •Практична частина:
- •Теоретична частина:
- •Практична частина:
- •Контрольні питання
- •Теоретична частина:
- •Практична частина:
- •Питання до семінарського заняття:
- •Теоретична частина:
- •Практична частина:
- •Контрольні питання
- •Теоретична частина:
- •Практична частина:
- •Контрольні питання
- •Теоретична частина:
- •Цитозін
- •Практична частина:
- •Контрольні питання
- •Теоретична частина:
- •Властивості ферментів:
- •Реакція
- •Практична частина:
- •Теоретична частина:
- •Практична частина:
- •Контрольні питання
- •Питання до семінарського заняття:
- •Теоретична частина:
- •Тканьовий подих
- •Практична частина:
- •Контрольні питання
- •Питання до семінарського заняття:
- •Теоретична частина:
- •Катаболізм амінокислот:
- •Біосинтез сечовини (орнітиновий цикл)
- •Практична частина:
- •Теоретична частина:
- •Практична частина:
- •Питання до семінарського заняття:
- •Теоретична частина:
- •Взаємний зв'язок різних форм обміну речовин в організмі
- •Практична частина
- •Контрольні питання
- •Питання до семінарського заняття:
- •Питання до іспиту
- •Список рекомендованої літератури
- •Практикум з біологічної хімії до лабораторних і семінарських занять для студентів біологічного факультету денної та заочної форм навчання
Практична частина:
Мета роботи: Засвоїти метод визначення концентрації сечовини в крові людини за кольоровою реакцією з диацетилмоноксимом.
Контрольні питання.
-
Роз'ясніть поняття: ДНК-полімераза, ДНК-праймаза, ДНК-топоізомераза, ДНК-геліказа, дестабілізуючі білки.
-
Будова реплікативної вилки.
-
Дати визначення промотору, старт-сигналу, стоп-сигналу, консенсусним послідовностям.
-
Зобразіть схему синтезу РНК.
-
Будова т-РНК: люцерновий листок та L-конформація.
-
Намалюйте та поясніть схему утворення аміноацил-тРНК. Яким чином кожна з амінокислот приєднується до відповідної їй молекули тРНК?
-
Будова рибосоми.
-
Етапи трансляції: ініціація, елонгація та термінація.
Практичне значення роботи: Визначення сечовини є важливим діагностичним тестом, що характеризує не тільки стан білкового обміну, але і функціональний стан нирок і печінки. Підвищення концентрації сечовини в крові відзначається при порушенні видільної функції нирок, при посиленому розпаді білків, надлишковому білковому харчуванні. Зниження рівня сечовини в крові і виділення її із сечею спостерігається при захворюванні печінки (цироз), що пов'язано з порушенням її сечовиноутворюючої функції.
Принцип методу. Диацетилмоноксим у кислих умовах гідролізується до диацетила, що реагує із сечовиною з утворенням пофарбованого в червоно-рожевий колір комплекс, що має максимум поглинання при довжині хвилі 520 нм.
Матеріали і реактиви. Еталон сечовини (розчин 16,65 ммоль/л), реакційна суміш (диацетилмоноксим-5,0 ммоль/л, тіосемікарбазид-0,9 ммоль/л, сіль заліза тривалентного-25,0 мкмоль /л), розчин сірчаної кислоти-1,8 моль/л, 5 %-ний розчин трихлороцтової кислоти, дистильована вода; мірні колби, пробірки, піпетки, мікропіпетки, центрифужні пробірки, водяна лазня, ФЕК, кювети з товщиною прошарку 1см , центрифуги.
Хід роботи. При визначенні сечовини в сироватках пробу необхідно депротеїнувати 5 %-ним розчином трихлороцтової кислоти. У пробірці змішують 0,10 мл проби з 1,0 мл розчину трихлороцтової кислоти і центрифугують. Точно так розбавляють і еталонний розчин сечовини. Для власне аналізу відмірюють надосадочну рідину. У тонкостінну пробірку відмірюють 0,01 мл сироватки крові або розведеної сечі, додають 2,0 мл робочого розчину і вміст перемішують. Отвір пробірки закривають алюмінієвою фольгою і пробірку поміщають рівно на 10 хвилин на киплячу водяну баню. Потім вміст пробірки швидко охолоджують під струменем холодної води і вимірюють оптичну щільність. Довжина хвилі 490 - 540 нм. Вимір варто провести за 15 хвилин після охолодження. Паралельно опрацьовують еталон і контрольний розчин. Сечу перед аналізом розводять дистильованою водою у співвідношенні від 1/50 до 1/100.
Відміряти |
Проба |
Еталон |
Контрольний розчин |
Сироватка, розведена сеча |
0,01 |
— |
— |
Стандартний розчин сечовини |
— |
0,01 |
— |
Дистильована вода |
— |
— |
0,01 |
Робочий розчин |
2,00 |
2,00 |
2,00 |
Перемішують і нагрівають точно 10 хвилин на киплячій водяній бані. Швидко охолоджують під струменем води і за 15 хвилин вимірюють оптичну щільність проби (А1) і еталона (А2) проти контрольного розчину. |
Розрахунок роблять за формулою: Сечовина (ммоль/л) = 16,65 •
Нормальна концентрація сечовини 2,5 - 8,3 ммоль/л.
Зробити розрахунок і висновки.
Заняття № 15.
Тема: ОБМІН білків. БІОСИНТЕЗ БІЛКІВ (СЕМІНАР)