Определение ретенции (адгезивности) тромбоцитов
Среди многочисленных методов определения адгезивности тромбоцитов наибольшее распространение получил метод определения ретенции на стеклянных шариках. Метод основан на подсчете числа тромбоцитов в венозной крови до и после ее пропускания с определенной скоростью через стандартную колонку со стеклянными шариками.
Для исследования берут свежевзятую цитратную кровь.
В полиэтиленовый или силиконированный стеклянный шприц набирают 2 мл крови, присоединяют к нему полихлорвиниловую трубку (колонку) со стеклянными шариками диаметром 0,2–0,4 мм и устанавливают шприц в инфузионный насос, позволяющий опорожнять шприц со скоростью 2 мл в минуту (рис. 1.90).
Рис. 1.90. Схема определения ретенции (адгезивности) тромбоцитов
Количество тромбоцитов определяют дважды: до и после пропускания крови через колонку со стеклянными шариками.
Индекс ретенции (адгезивности) тромбоцитов рассчитывают по следующей формуле:
ИР = (А-В/А) 100 (%),
где ИР — индекс ретенции (адгезивности);
А — количество тромбоцитов в крови до пропускания;
В — количество тромбоцитов в крови после пропускания через колонку.
У здоровых людей индекс ретенции составляет 20–55%.
Уменьшение этого показателя свидетельствует о нарушении адгезии тромбоцитов и встречается при многих врожденных тромбоцитопатиях (тромбастения Гланцмана, болезнь Бернара-Сулье, болезнь Виллебранда и др.).
Исследование агрегации тромбоцитов
Общее ориентировочное представление об агрегационной способности тромбоцитов можно составить с помощью качественных методов, основанных на визуальном определении тромбоцитарных агрегатов, образующихся в пробирке (макроскопический метод) или на предметном стекле (микроскопический метод по А.С.Шитиковой) при смешивании тромбоцитарной плазмы с различными, чаще естественными, стимуляторами агрегации. В качестве последних используют растворы АДФ, тромбина, адреналина, коллагена, ристомицина.
Регистрируют время образования крупных агрегатов тромбоцитов, которое в норме обычно не превышает 10–60 с.
Наиболее полная оценка агрегационной способности тромбоцитов осуществляется при количественной фотометрической или спектрофотометрической регистрации процесса агрегации с помощью агрегографов различной конструкции.
Методы заключаются в графической регистрации изменения оптической плотности тромбоцитарной плазмы при перемешивании ее со стимуляторами агрегации (рис. 1.91).
Рис. 1.91. Кривые агрегации тромбоцитов, индуцированной АДФ малой концентрации.
Образование тромбоцитарных агрегатов ведет к увеличению светопропускающей способности тромбоцитарной плазмы.
Полученные агрегатограммы анализируют по нескольким количественным параметрам: времени начала агрегации после добавления соответствующего стимулятора, амплитуде агрегатограммы на 2-й и 6-й минутах, общей площади агрегатограммы и др. В зависимости от используемого стимулятора и его дозы агрегатограмма может иметь различную форму. При использовании в качестве стимуляторов агрегации тромбоцитов коллагена, тромбина, ристомицина регистрируют одну большую волну агрегации, а при добавлении к тромбоцитарной плазме малых доз АДФ — двухволновую агрегатограмму (рис. 1.91, а).
На агрегатограммах, полученных при использовании в качестве стимулятора малых доз АДФ, первая волна регистрируемой кривой отражает начальную агрегацию тромбоцитов, обусловленную введением извне стимулятора этого процесса. Вторая волна связана с реакцией высвобождения из тромбоцитов собственных биологически активных веществ (адреналина, АДФ, тромбоксана А2 и др.), которые усиливают начавшуюся агрегацию кровяных пластинок.
Запомните Отсутствие на агрегатограммах, полученных при использовании в качестве стимулятора малых доз АДФ, второй волны агрегации свидетельствует об уменьшении в тромбоцитах гранул, содержащих биологически активные вещества (недостаточность пула хранения), или о нарушении реакции высвобождения этих веществ из тромбоцитов. |
В приложении 2 712051129 представлены примеры нарушения функций тромбоцитов при наиболее частых формах врожденных и приобретенных тромбоцитопатий и тромбоцитопений. Современные методы сосудисто‑тромбоцитарного гомеостаза в большинстве случаев дает возможность дифференцировать подобные состояния, по крайней мере, если они протекают в классической типичной форме.
В приложении 3 712051133 приведены принципы диагностики нарушений сосудисто-тромбоцитарного гемостаза.