3. Методы определения оплодотворяющей способности спермы сельскохозяйственных животных.

Сперму от производителей получают в искусственную вагину и оценивают по активности движения спермиев, насыщенности (концентрации) в 1 мл спермы и продолжительности выживания. Кроме того, учитывают объем эякулята, общее число спермиев в нем, цвет и запах спермы. В некоторых случаях определяют также морфологический состав спермиев – процент нормальных и ненормальных по форме спермиев.

Исследование спермы начинают с определения ее объема с помощью мерной пипетки, градуированного цилиндра или мензурки. Можно определять массу эякулята взвешиванием на лабораторных весах с погрешностью не более 0.08 г.

Цвет нормальной спермы белый или белый с желтым оттенком. Серова­тый или голубоватый оттенок - при­знак олигоспермии (недостаточное чис­ло спермиев). Интенсивный желтый цвет обычно указывает на примесь мочи. Розоватый или красноватый­ - признак примеси крови, как следствие свежей травмы. Буро-красный указыва­ет на глубокую травму половых путей давнего происхождения. Зеленоватый оттенок сперма приобретает от примеси гноя. Хлопья в сперме наблюдаются при воспалении пузырьковидных желез.

Запаха нормальная сперма не име­ет или обладает легким запахом жиропота. При хронических, гнойных процессах в семенниках или в придаточных половых железах сперма может иметь гнилостный запах.

Консистенция спермы быка сливкообразная, барана - сметанооб­разная, жеребца и хряка - сходная с мо­локом.

Густота спермиев. По густоте спермы ориентировочно устанавливают насыщенность ее спермиями, относя к густой (Г), средней (С) или редкой (Р). У быков оценка Г ставится, если все поле зрения микроскопа заполнено спермиями и в пространстве между ними не укладывается длина одного спермия. Средней считают сперму, ког­да между спермиями хорошо выражены промежутки, равные приблизительно длине спермиев. В редкой сперме рас­стояние между спермиями превышает их длину.

Сложнее определять густоту спермы производителей с маточным типом осе­менения, так как у них секреты прида­точных желез очень сильно разбавляют спермиев. У всех видов животных оцен­ка по густоте не позволяет точно устано­вить насыщенность спермы спермиями, поэтому с переходом на использование разбавленной спермы при оценке эяку­лята определяют концентрацию спер­миев.

К использованию допускают сперму быков, хряков и жеребцов с оценкой Г и С, а у баранов - только Г.

Активность движения (подвижность) спермиев является выжным показателем в первоначальной оценке полученной спермы. Сперма, в которой отсутствуют спермии с активным поступательным движением, непригодна для оплодотворения.

Подвижность спермиев оценивают по 10-балльной системе. Каждый балл равен 10 % спермиев, об­ладающих поступательным движением. Если спермии имеют манежное движе­ние (по кругу) или только колеблются, качество спермы оценивают буквой К (колебательное движение). Сперму с не­подвижными спермиями обозначают буквой Н (некроспермия).

Качественные показатели спермы.

Производи- тель	Объем эякулята, мл		Число спермиев в 1 мл, млрд		Подвиж-ность спер-миев по 10-бальной системе (минималь-но допустимая)	Максималь- ный процент патологи-ческих спермиев	Макси- мальный процент незрелых спермиев
	ср.	макс.	ср.	макс.
Бык	4-5	20	1-2	6	8	18	2
Баран	1-2	5	2-4	8	8	14	2
Хряк	250	1200	0,2	1	7	20	10
Жеребец	100	600	0,2	0,8	5	25	10
Северный олень	0,3	1,2	2,0	-	8	15	4

Подвижность неразбавленной спер­мы быка определяют при температу­ре 40⁰С. На теплое предметное стек­ло наносят каплю спермы и 2-4 капли3%-ного раствора цитрата натрия, пере­мешивают, накрывают покровным стек­лом и просматривают не менее трех по­лей зрения. Поскольку оценка спермиев по подвижности достаточно субъектив­на, то для контроля в необходимых слу­чаях можно определять количество жи­вых и мертвых спермиев.

При оценке спермы на густоту и подвижность спермиев применяют комплексное обозначение, позволяю­щее удобно отражать ее качество. На­пример, Г -10 баллов означает, что ис­следуемая сперма густая и 100 % спер­миев обладают головным прямолиней­ным движением; Г -9 баллов означает 90 %, 8 - 80, Г-7 -70 % подвижных спермиев и т. д.

Концентрацию сперми­ев (количество в 1 мл эякулята) наибо­лее точно определяют в счетной камере Горяева или другого автора. Это один из основ­ных показателей качества спермы, на который ориентируются при разбавле­нии эякулята.

Для определения концентрации спермиев жеребцов Г. В. Паршу­тин и Е. В. Румянцева сконструировали специальные стандарты. Они представ­ляют собой запаянные пробирки, содер­жащие жидкость, имеющую цвет, соот­ветствующий той или иной известной концентрации спермы. Для определе­ния концентрации исследуемую сперму наливают в пробирку с диаметром стан­дартных пробирок, устанавливают ря­дом с ней пробирки стандарта и подби­рают наиболее подходящий по виду стандарт, на котором отмечено количе­ство спермиев в 1 мл спермы.

Концентрацию спермиев в эякулятах хряка удобно определять оптическим стандартом С. И. Сердюка.

В настоящее время станции искусст­венного осеменения пользуются фото­электроколориметрическим методом, основанным не на прямом подсчете спермиев, а на учете степени оптичес­кой плотности спермы, т. е. мутности. Этот метод позволяет быстро (2-3 мин) определить концентрацию спермиев в сперме, но так как фотоэлектроколори­метр создан для анализа истинных ра­створов, а сперма является взвесью и вней содержится большее или меньшее количество эпителиальных и других клеток, то результат нередко может быть неточным.

Для получения более точных резуль­татов М. П. Рязанский разработал пря­мой метод подсчета числа спермиев в сперме на скоростном (за 37-40 с) авто­матическом счетчике клеток - целлос­копе. С этой целью можно использовать и венгерский прибор «Пикоскель».

Определение количе­ства мертвых спермиев. В. А. Морозов предложил использовать красители, которые окрашивают спер­миев только мертвых и с колебательны­ми движениями. Самый простой способ окраски спермы быков следующий. Ис­следуемая сперма должна иметь кон­центрацию спермиев 0,2-0,4 млрд/мл, при более высокой концентрации эяку­лят разбавляют 3%-ным раствором цит­рата натрия до указанного показателя. Готовят 1-5%-ный раствор эозина во­дорастворимого на 3%- ном растворе ли­мoннoкиcлoгo натрия. На чистое обез­жиренное теплое (35 ⁰С) предметное стекло наносят каплю спермы, добавля­ют 2-3 капли краски, подогретой до 30 ⁰С, смешивают 2-4 с и делают три тонких мазка, которые высушивают. В каждом препарате подсчитывают 100­-150 спермиев, отдельно учитывая коли­чecтвo с окрашенными и неокрашенны­ми головками.

Определение содержа­ния патологических форм спермиев и включений спермы у быков проводят в мазках, окрашенных азур-эозином или другими красителя­ми, где подсчитывают 100-200 сперми­ев и различные включения. Среди нор­мальных спермиев всегда находится бо­лее или менее значительное количество патологических форм. Чаще аномалии выявляются в хвостовой части сперми­ев, основании головки и шейки. С воз­растом к моменту физиологической зре­лости производителя количество ано­мальных спермиев уменьшается. Могут встречаться самые различные патологи­ческие формы спермиев: гигантского размера или карликовые, спермии с дву­мя-тремя головками, но общим хвос­том, с двумя хвостами, с укороченным хвостом, его деформацией или отсут­ствием, с цитоплазматической капель­ кой, слишком большой или маленькой головкой и другие формы. Иногда встречаются спермии, лишенные голов­ки, но способные двигаться.

При микроскопическом исследова­нии спермы выявляются следующие включения: клетки плоского, переход­ного эпителия, клетки семенных ка­нальцев (зернистые); форменные эле­менты крови – эритроциты и лейкоциты; гиалиновые шары, круглые или овальные, иногда слоистые и напоминающие зерна крахмала, амилоидные тельца, сильно блестящие – лецитиновые зернышки, кристаллы спермина и др. Если примесей в сперме мало, это считается нормой. Если примесей много, необходимо выявить их источник и причину.

В результате исследования могут быть установлены следующие недостатки:

асперматизм (Азм) – отсутствие спермы;

олигосперматизм (Озм) – малый объем эякулята;

аспермия (А) - отсутствие в сперме спермиев;

олигоспермия (О) – недостаточное число спермиев в эякуляте;

некроспермия (Н) - мертвые спер­мии;

тератоспермия (Т) – патологические спермии и др.

Производителя можно использовать для естественного или искусственного осеменения, если его сперма отвечает требованиям действующей инструкции по осеменению животных.

Решающее значение для оценки спермы имеет определение оплодотворяющей способ­ности спермиев. Установлено, что она может быть выявлена только в отноше­нии определенной группы самок, нахо­дящихся при конкретных условиях су­ществования и времени осеменения. Оплодотворение зависит от степени родства самки и производителя, состоя­ния их здоровья, упитанности, качества кормления и др. Поэтому для определе­ния оплодотворяющей способности спермы лучше всего использовать здо­ровых ремонтных телок. Правильно по­ставленная биологическая проба спер­мы на здоровых животных - самый на­дежный критерий ее оценки. Все другие методы являются только косвенными, т. е. они позволяют лишь условно судить об оплодотворяющей способности спермы. Сперма считается нормальной, если оплодотворяемость от первого осе­менения составляет не менее 70-75 %. Быки с пониженной оплодотворяющей способностью спермы дают маложиз­ненное потомство, и их нельзя исполь­зовать ни при искусственном, ни при ес­тественном осеменении.

Наблюдения показали, что даже все­стороннее лабораторное исследование спермы иногда не отражает ее качеств. От некоторых жеребцов с прекрасными лабораторными показателями спермы оплодотворяемость кобыл оказывалась низкой, если интервалы между садками были больше 48 ч. Осеменение кобыл через 24-36 ч этими же производителя­ми давало резкое повышение плодови­тости. Этот факт Х. И. Животков объяс­няет неодинаковой выживаемостью спермиев отдельных производителей в половом аппарате матки и предлагает применять у ценных производителей «биологическую пробу», заключающу­юся в осеменении кобыл через различ­ные промежутки времени. На основа­нии учета итогов этих осеменений уста­навливают индивидуальную нагрузку.