- •Федеральное агентство по образованию
- •Санитария и гигиена отрасли
- •Санитария и гигиена отрасли
- •Правила работы с культурами микроорганизмов Правила и техника безопасности при работе в микробиологической лаборатории
- •Правила работы с культурами микроорганизмов
- •Лабораторная работа № 1 питательные среды и методы их стерилизации. Условия культивирования микроорганизмов
- •Классификация питательных сред
- •Методы стерилизации питательных сред
- •Стерилизация стеклянной посуды и инструментов
- •Условия культивирования микроорганизмов
- •Культивирование аэробных микроорганизмов
- •Культивирование анаэробных микроорганизмов
- •Лабораторная работа № 2 Методы определения количества клеток микроорганизмов
- •Метод подсчета клеток дрожжей в камере Горяева
- •Метод высева на агаризованные питательные среды (метод Коха)
- •Нефелометрическое определение количества клеток микроорганизмов или их биомассы
- •Лабораторная работа № 3 санитарно-бактериологическое исследование воздуха закрытых помещений
- •Санитарно-бактериологическое исследование воздуха
- •Критерий для оценки воздуха жилых помещений (число микроорганизмов в 1 м3 воздуха, по а.И. Шарифу)
- •Оценка эффективности ультрафиолетового бактерицидного излучения
- •Лабораторная работа № 4 Санитарно-бактериологическое иСследование воды
- •Определение общего микробного числа воды
- •Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий методом мембранной фильтрации (основной метод)
- •Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий титрационным методом
- •Микробиологические и паразитологические показатели безопасности питьевой воды
- •Лабораторная работа № 5 Санитарно-бактериологическое исследование смывов с рук, инструментов и предметов производства
- •Лабораторная работа № 6 Микрофлора ячменя и солода. Изучение степени микробной обсемененности образца
- •Представители эпифитной микрофлоры ячменя
- •Грибы хранения
- •Лабораторная работа № 7 Микробиологический контроль товарных хлебопекарных дрожжей и производства
- •Определение посторонних микроорганизмов в бродящей жидкости дрожжерастительных аппаратов, дрожжевом молоке и прессованных дрожжах
- •Питательные среды для выявления основных групп микроорганизмов
- •Нормы содержания посторонних микроорганизмов в 1 г различных образцов дрожжей
- •Микробиологический контроль мелассы и мелассного сусла
- •Лабораторная работа № 8 Оценка эффективности и смываемости моющих и дезинфицирующих средств
- •Оценка смываемости дезинфицирующих средств
- •Приготовление рабочего раствора средства «ф 262 Ипасепт»
- •Установление эффективности (действующих концентраций) дезинфицирующих веществ
- •Список литературы
- •Содержание
- •Иванченко Ольга Борисовна санитария и гигиена отрасли
Нормы содержания посторонних микроорганизмов в 1 г различных образцов дрожжей
Микроорганизмы мелассы |
Чистые культуры (ЧК) |
Естественно чистые культуры (ЕЧК) |
Товарные дрожжи (Т) |
Молочнокислые |
До 1 млн |
До 10 млн |
До 100 млн |
Лейконосток |
0 |
0 |
До 1 млн |
Кишечная палочка |
0 |
0 |
0 |
Гнилостные бактерии |
До 500 |
До 1000 |
До 5000 |
Посторонние дрожжи, % |
0 |
0,001 |
До 10 |
Гнилостные бактерии образуют колонии с зоной просветления молочного агара через 24–72 ч роста. Поскольку в зависимости от протеолитической активности разные виды этих бактерий образуют зоны в разный срок, просмотр посевов проводят регулярно по два раза в сутки, начиная с суточной инкубации в термостате.
Подсчет количества молочнокислых бактерий на сусло-агаре с мелом проводят на 3–5 сут роста.
Подсчет общего количества всех дрожжей проводят через 48 ч. «Дикие» дрожжи учитывают отдельно по количеству колоний, выросших на синтетической среде с лизином. На этой среде колонии культурных дрожжей не образуются. Колонии дрожжей подсчитывают через 48–72 ч.
Пример расчета.
В чашке Петри выросло 50 колоний молочнокислых бактерий, посев на эту чашку сделан из разведения дрожжей в 100 тыс. раз, значит, число бактерий в 1г дрожжей составляет: 50 · 100 000 = 5 млн клеток.
Микробиологический контроль мелассы и мелассного сусла
Меласса является первоисточником попадания на производство основных вредителей. Поэтому необходимо высевать пробы мелассы, непосредственно перерабатываемой на производстве, а также из всех ее хранилищ. Посев производят в те же среды, которые используют при анализе дрожжей.
Предварительно готовят необходимую стерильную посуду: один стеклянный стаканчик с бумажным колпачком, две пипетки на 1 или 2 мл, водопроводную воду: 90 мл в колбе и 9 мл – в пробирке.
Непосредственно перед посевом из отобранной пробы взвешивают 10 г мелассы в стеклянный стаканчик. Далее мелассу разводят стерильной водой из колбы с помощью стерильной стеклянной палочки (разведение 1:10). Затем 1 мл тщательно перемешанного раствора переводят в пробирку с 9 мл воды (разведение 1:100). Посев в чашки Петри производят дважды из обоих разведений. Для каждого разведения следует пользоваться отдельной стерильной пипеткой. Просмотр и подсчет выросших микроорганизмов осуществляют, как описано выше.
Можно считать мелассу хорошей, если она содержит в 1 г до 2000 клеток и нет преобладания отдельных видов микроорганизмов. В плохой мелассе количество микроорганизмов превышает 10 000 клеток в 1 г и преобладают их отдельные виды. Особенно опасен лейконосток.
Техника посева мелассного сусла аналогична применяемой при анализе дрожжей и мелассы.
Питательные среды и растворы
1. Сусло-агар. К солодовому суслу с содержанием 8 % СВ добавляют 2 % агара и нагревают до кипения. Среду разливают в пробирки по 5 и 10 мл и стерилизуют при избыточном давлении 0,5 атм в течение 20 мин.
2. Дрожжевой агар. К дрожжевой воде добавляют 4 % сахарозы и 2 % агара. После расплавления агара среду разливают в пробирки по 10 мл и стерилизуют при давлении 0,5 атм в течение 20 мин.
3. Дрожжевая вода. 1 л водопроводной воды и 80 г прессованных дрожжей кипятят в течение 20 мин, фильтруют в горячем виде, стерилизуют при давлении 1 атм в течение 20 мин.
4. Дрожжевой автолизат. 1 кг чистой культуры дрожжей размешивают в 1л водопроводной воды, добавляют 10 мл уксусной кислоты для предотвращения развития бактерий, доводят рН до 5,4–5,0 и помещают в термостат при температуре 45–48 С на 40–48 ч. Фильтруют через складчатый фильтр, разливают в пробирки и стерилизуют при давлении 0,5 атм в течение 30 мин.
5. Синтетическая среда с лизином. В 1 л водопроводной воды растворяют 50 г глюкозы, 5 г лизина, 1 г КН2РО4, 1 г МgSO4, FeSO4 –следы. Каждый компонент растворяют отдельно и добавляют в указанном порядке. Далее вносят 20 г агара, расплавляют его, разливают в пробирки и стерилизуют при давлении 0,5 атм в течение 20 мин. Отдельно готовят раствор детиобиотина в стерильной воде (50 г в 100 мл). Для растворения детиобиотина в среду на кончике скальпеля вносят питьевую соду. 0,1 мл раствора детиобиотина вносят в чашки Петри перед посевом дрожжей на синтетическую среду с лизином.
6. Синтетическая среда с нитратом. Для определения титра денитрофикации в 1 л водопроводной воды растворяют 20 г глюкозы, 1 г КН2РО4, 0,5 г МgSO4, 10г KNO3, разливают в пробирки по 10 мл, стерилизуют при давлении 0,5 атм в течение 20 мин.
Задание
1. Определить качество товарных дрожжей по микробиологическим показателям.
2. Оценить обсемененность мелассы.
Контрольные вопросы
1. Задачи микробиологического контроля на дрожжевом производстве.
2. Микрофлора мелассы.
3. Методы выявления отдельных представителей микроорганизмов.
4. Особенности роста отдельных представителей микроорганиз-мов на индикаторных средах.