2. Цветные реакции на белки.
2.1. Реакция Миллона.
Реактив Миллона состоит из нитратов ртути (I) и (II) в HNO3 с примесью HNO2. Реакция реактива Милона с белками обусловлена присутствием в них остатка тирозина.
В пробирку наливают 0,5 мл раствора белка и 0,5 мл реактива Миллона. Образуется белый осадок под действием соли ртути и азотной кислоты, входящих в состав реактива Миллона. При нагревании осадок окрашивается сначала в розовый, а затем в коричнево-красный цвет.
2.2. Реакция Адамкевича.
Реакция обусловлена присутствием в белке остатков аминокислоты триптофана.
К 1 мл сыворотки добавляют 0,5 мл ледяной уксусной кислоты (содержит примесь глиоксилевой кислоты) и нагревают до растворения белка. Содержимое пробирки охлаждают и, наклонив пробирку, осторожно по стенке наслаивают 1 мл концентрированной серной кислоты. На границе двух слоев жидкости возникает красно-фиолетовое окрашивание. При нагревании окрашивание появляется быстрее.
2.3. Нингидриновая реакция.
Реакция обусловлена наличием в белке остатков α-аминокислот.
+ RСОН + СО2 + NН3
В пробирку наливают 1 мл раствора белка, добавляют 5 капель 0,2% раствора нингидрина и нагревают. Через несколько минут наблюдают появление сине-фиолетового окрашивания.
2.4. Реакция Шульце – Распайля.
Реакция Шульце - Распайля обусловлена наличием в белке остатков триптофана. Они, взаимодействуя с оксиметилфурфуролом, дают продукты конденсации, окрашенные в вишнево-красный цвет. Оксиметилфурфурол образуется из фруктозы в присутствии концентрированной серной кислоты:
К 0,5 мл сыворотки добавляют 1-2 капли 10% раствора сахарозы и по стенке пробирки наслаивают 1 мл конц. серной кислоты. Слегка встряхивают пробирку. На месте соприкосновения воды и кислоты появляется вишнево-красное окрашивание.
3. Реакции осаждения белков.
3. 1. Осаждение белков при нагревании.
В пробирку наливают 0,5 мл раствора белка и нагревают. Наблюдают появление опалесценции. При кипячении может выпасть осадок.
3.2. Осаждение белков солями тяжелых металлов.
Белки при взаимодействии с солями тяжелых металлов (медь, ртуть, свинец и др.) денатурируют и образуют нерастворимые в воде комплексные соединения вследствие адсорбции тяжелого металла на поверхности белковой молекулы. На этом основано использование белков в качестве противоядия при отравлении тяжелыми металлами.
В две пробирки наливают по 0,5 мл раствора белка. В первую добавляют 2 капли 5% раствора сульфата меди, во вторую – 2 капли 5% раствора ацетата свинца. В обеих пробирках выпадает осадок белка.
3.3. Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами.
Выпадение белка в осадок при взаимодействии с концентрированными минеральными кислотами обусловлено дегидратацией белковых молекул, образованием нерастворимых комплексных солей белка и кислот. В избытке серной и соляной кислот осадок белка растворяется. Избыток азотной кислоты не растворяет осажденный белок. Реакция с азотной кислотой используется при клинических исследованиях мочи на присутствие в ней белка (проба Геллера).
В пробирку наливают 1 мл концентрированной азотной кислоты и затем, наклонив пробирку, осторожно приливают по стенке равный объем раствора белка. На границе двух жидкостей появляется белый осадок белка. Встряхивают пробирку и добавляют избыток азотной кислоты. Осадок не исчезает. Повторяют опыт с концентрированными соляной и серной кислотами.