3. Возбудитель туберкулеза

Микроорганизм рода Mycobacterium (лат. mycos – гриб, bacterium – палочка) включает в себя 49 видов как патогенных, так и непатогенных. К патогенным относят микобактерии, вызывающие туберкулез у людей (Мус. tyberculosis), животных (Мус. bovis), птиц (Мус. avium), мышей (Мус. murium), а также у холоднокровных – рыб, змей, лягушек, черепах (Мус. poikilotermum); возбудителей проказы (Мус. leprae) и паратуберкулеза крупного рогатого скота (Мус. paratuberculosis).

Патогенные микобактерии вызывают туберкулез – инфекционную хронически протекающую болезнь у человека, животных, птиц, особенно кур. Патологоанатомически он характеризуется образованием множественных туберкулов (бугорков), подвергаемых творожистому перерождению, обызвествлению. Возбудителей туберкулеза человека и крупного рогатого скота открыл Р. Кох в 1882 г. Птичий вид установили Штраус и Гамалея (1891).

Наряду с истинными возбудителями туберкулеза животных, человека, в объектах окружающей среды присутствуют так называемые атипичные микобактерии, отличающиеся по своим свойствам от туберкулезных и друг от друга.

Чем же продиктован интерес к атипичным микобактериям? Во-первых, их обнаруживают не только у людей и животных, больных туберкулезом, но и в условно благополучных стадах среди животных, у которых они вызывают сенсибилизацию к туберкулину. Во-вторых, отдельные атипичные микобактерии могут вызывать ряд хронических заболеваний, напоминающих туберкулез, которым присвоено название «микобактериозы». В-третьих, атипичные микобактерии очень сложно дифференцировать от истинных микобактерии туберкулеза. Атипичные микобактерии широко распространены в природе, что обусловливает их попадание в организм животных через корм, подстилку и другие объекты окружающей среды. В последние годы при лабораторной диагностике патологического материала, молока, кормов, воды, почвы, объектов внешней среды резко возросло число выделений атипичных микобактерий, что требует тщательной их идентификации, однако строгая классификация атипичных микобактерий до сих пор отсутствует. Наибольшее распространение получила классификация Раньона (1959), основанная на двух свойствах атипичных микобактерий: образование пигмента и скорость роста. По Раньону различают четыре группы:

I – фотохромогенные микобактерии, приобретающие темно-оранжевую окраску при выращивании на свету. В полной темноте они не образуют пигмента. Основной представитель – Мус. kansassii;

II – фотохромогенные микобактерии, приобретающие ярко-оранжевую окраску независимо от выращивания на свету или в темноте. Основные представители – Мус. scrofulaceum, Мус. gordonae, Мус. aquae и др.;

III – нефотохромогенные микобактерии, могут быть неокрашенными или иметь желтовато-оранжевые оттенки. Однако пигментация не зависит от экспозиции на свету. Основные представители – Мус. intracellulare, Мус. battey;

IV – быстрорастущие микобактерии, образуют колонии в течение недели при 25-37 ⁰С. Представители – Мус. phlei, Мус. smegmatis, Мус. fortuitum.

Морфология. Микобактерии туберкулеза – кислото-, спирто- и щелочеустойчивые микроорганизмы. Неподвижны, спор и капсул не образуют, жгутиков не имеют. Типичная форма – стройные или слегка изогнутые палочки с закругленными краями. В электронном микроскопе микобактерии всех видов имеют вид палочки с закругленными краями. Однако встречаются нередко изогнутые и овальные формы. Размеры клеток могут значительно варьировать в зависимости от возраста культуры: длина от 1,5 до 4 мкм, ширина от 0,2 до 0,5 мкм. Установлена филогенетическая близость микобактерий туберкулеза с лучистыми грибами-актиномицетами: медленное развитие микобактерий на элективных питательных средах, способ размножения, полиморфность и способность при определенных условиях иногда образовывать нитевидные ветвистые формы с колбовидными вздутиями на концах. Это послужило причиной замены названия бациллы Коха на микобактерию туберкулеза (Мус. tuberculosis).

Микобактерии характеризуются высоким содержанием липидов (от 30,6 до 38,9 %), вследствие этого трудно окрашиваются анилиновыми красителями, но хорошо воспринимают краску после обработки карболовым фуксином при подогревании. При таком методе микобактерий туберкулеза хорошо удерживают красители и не обесцвечиваются при воздействии разведенных кислот, щелочей и спирта, чем отличаются от других микробов. На этом основан метод окраски микобактерий по Циль-Нильсену.

Микобактерий с трудом окрашиваются положительно по Граму и приобретают сине-фиолетовый цвет.

Для быстрого обнаружения микобактерий в различных объектах существует люминесцентный метод, в основе которого лежит их способность окрашиваться люминесцентными красителями (родамин-аурамином) и давать золотисто-желтый цвет под воздействием ультрафиолетового излучения. Метод обладает высокой чувствительностью, дает цветное изображение возбудителя. Исследование ведется при среднем увеличении, что дает возможность просмотреть большее поле, чем при иммерсионной микроскопии под большим увеличением.

Благодаря электронной микроскопии у микобактерий выявлены трехслойная клеточная стенка, микрокапсула, цитоплазматическая мембрана и др. В состав цитоплазматической мембраны входят липопротеидные комплексы, различные ферментные системы, в частности, ответственные за окислительно-восстановительные процессы. Цитоплазма микобактерий представлена гранулами, вакуолями и полостями, число которых может возрастать после воздействия химических агентов.

В микрокультурах, развивающихся в жидких питательных средах, микобактерии человеческого и бычьего видов образуют косы, жгуты, завитки, скопления. Микрокультуры легко обнаруживают при обычной микроскопии мазков, окрашенных по методу Циль-Нильсена. В препаратах, приготовленных из первичных посевов, при исследовании под фазовым контрастом обычно различают гомогенные зернистые элементы, среди которых встречаются сферические светопреломляющие структуры.

В культурах, выделенных от крупного рогатого скота, чаще находят шаровидные образования правильной формы, одинаковых размеров, а также отдельно лежащие нитевидные структуры.

Культивирование. Микобактерии туберкулеза размножаются в строго аэробных условиях на специальных элективных питательных средах, содержащие соединения углерода, азота, водорода и кислорода, а также магний, калий, серу и фосфор. Стимулирующее влияние на рост туберкулезных микобактерии оказывают соли железа и некоторые другие элементы. Необходимым условием для осуществления биохимических процессов у микобактерии является создание оптимальной температуры: 37-38 ⁰С для человеческого, 38-39 ⁰С для бычьего и 39-41 ⁰С для птичьего вида. Следует отметить, что микобактериям туберкулеза присущ медленный обмен веществ: рост культур проявляется через 15-30 суток и более, в начале в виде почти незаметных микроколоний, из которых затем формируются визуально наблюдаемые макроколонии. В 1887 г. Нокар и Ру обнаружили у микобактерии туберкулеза глицеринофильность. Глицерин оказался лучшим источником углерода: прибавление его в мясной бульон и агар вызывает обильный рост культур.

При выборе среды следует учитывать ее назначение: для пересева и сохранения субкультур лучше использовать простые глицерин содержащие среды (МПГБ, глицериновый картофель). Для первичного выделения культур оправдали себя только плотные яичные среды Петраньяни, Гельберга и др. Для изучения биохимических свойств микобактерии и других целей целесообразно применять безбелковые синтетические среды Сотона, Моделя.

Возбудители туберкулеза, особенно птичьего вида, ряд атипичных и сапрофитных микобактерии при росте в жидких питательных средах образуют как поверхностный, так и придонный рост с наличием бугристой, морщинистой пленки крошкообразной консистенции, имеющей желтовато-коричневый, кремовый или бурый цвет.

На плотных средах микобактерии образуют сливающиеся бугристые колонии, которые могут иметь гладкую блестящую или шероховатую поверхность, а также сплошной морщинистый налет белого, или белого с желтоватым оттенком, или же другого цвета.

Существуют методы ускоренного выращивания (микрокультивирование) микобактерий, предложенные рядом исследователей (Прайс, 1941; Е. А. Школьникова, 1948; Н. М. Колычев, 1970 и др.).

Метод Прайса. Мазок на стекле высушивают, затем выдерживают 5 минут в 5 % стерильном водном растворе серной кислоты. Кислоту смывают стерильной дистиллированной водой. Мазок помещают в жидкую питательную среду, в которой рост микобактерий проявляется на стеклах через 2-6 суток в виде микрокультур, после их окраски по Циль-Нильсену при микроскопии.

Биохимические свойства. Микобактерии туберкулеза содержат различные ферменты. Ферменты эстераза и липаза расщепляют жиры; дегидраза – органические кислоты, в том числе аминокислоты; уреаза – мочевину, перигалола – углеводы, каталаза – перекись водорода; протеолитические ферменты (протеаза) – белок. Микобактерии ферментируют алкоголь, глицерин и многочисленные углеводы, лецитин, фосфатиды. У молодых культур микобактерий туберкулеза сильно выражены редуцирующие свойства, что, в частности, проявляется в их способности восстанавливать теллурит.

Токсинообразование. Микобактерии туберкулеза содержат эндотоксины – туберкулины (Р. Кох, 1890), которые проявляют токсическое действие только в больном организме. Жирные кислоты (масляная, пальмитиновая, туберкулостеариновая, олеиновая) способствуют распаду клеточных элементов, творожистому перерождению тканей, блокируют липазу и протеазы, вырабатываемые микобактериями. Вирулентные микобактерии содержат полисахаридные компоненты, корд-фактор, повышающий их ви­рулентность, кроме того, корд-фактор разрушает митохондрии клеток зараженного макроорганизма, нарушая процессы дыхания и фосфорилирования.

Антигенная структура. Микобактерии туберкулеза содержат полисахаридо-белково-липоидный комплекс, названный полным антигеном. При парентеральном введении у животных наблюдают образование антител, которые выявляют в серологических реакциях – РА, РП, РСК и др.

Туберкулины также относятся к антигенам. В отдельности ни одна из фракций микобактерий туберкулеза (туберкулопротеиды, туберкулолипиды, туберкулополисахариды) не вызывает иммунологических сдвигов в организме. Образование антител вызывает лишь полисахаридо-липоидный комплекс, т. е. полный антиген.

Среди атипичных микобактерий различают общие и групповые антигены. Для их идентификации используют серологические тесты, чаще метод диффузионной преципитации в агаре по Оухтерлони.

Устойчивость. Микобактерии туберкулеза отличаются устойчивостью к химическим и физическим воздействиям, особенно к высушиванию. В высушенной мокроте, кусочках пораженной ткани, пыли микобактерии сохраняют жизнеспособность от 2 до 7 месяцев и более; в проточной воде – более года, в почве – до 3 лет. Низкие температуры не влияют на жизнеспособность микобактерии.

Микобактерии весьма чувствительны к воздействию прямых солнечных лучей, в жаркие дни в мокроте они погибают через 1,5-2 ч. Особенно губительно для них ультрафиолетовое излучение. Важное значение в санитарно-профилактическом отношении имеет высокая чувствительность микобактерии к нагреванию. Во влажной среде они погибают при 60 ⁰С в течение 1 ч, при 65 ⁰С – через 15 минут, при 70-80 ⁰С – через 5-10 минут. В свежем молоке возбудитель туберкулеза сохраняется 9-10 суток, а в скисшем молоке гибнет под воздействием молочной кислоты; в масле – недели, а в некоторых сырах – даже месяцы. Микобактерии туберкулеза по сравнению с другими неспорообразующими бактериями значительно более устойчивы к химическим дезинфицирующим веществам; 5 % раствор фенола и 10 % раствор лизола разрушают возбудителя через 24 ч, 4 % формалин – после 3 ч.

В качестве дезинфицирующих растворов при туберкулезе наиболее эффективны: 3 % щелочной раствор формальдегида при 3 часовой экспозиции; 2 % (по формальдегиду) раствор метафора, растворы хлорной извести, нейтрального гипохлорита кальция и взвеси, содержащие не менее 5 % активного хлора при экспозиции 3 ч; 1 % раствор глутарового альдегида, 8 % эмульсия феносмолина из расчета 1 л/м² и при экспозиции 3 ч и др.

Патогенность. Бычий вид микобактерии вызывает болезнь у коров, овец, коз, свиней, лошадей, кошек, собак, оленей, маралов и др. Из лабораторных животных наиболее чувствительны кролики и морские свинки, у которых развивается генерализованный туберкулез.

Птичий вид микобактерии вызывает туберкулез у кур, индеек, цесарок, фазанов, павлинов, голубей, уток и др. В естественных условиях возможно заражение домашних животных (лошади, свиньи, козы, овцы, иногда крупный рогатый скот) и даже человека.

Из лабораторных животных наиболее подвержены кролики, морские свинки менее восприимчивы.

Инкубационный период длится от нескольких недель до нескольких лет. Доказана персистенция L-форм, которые обладают способностью к реверсии в типичные микобактерии. Наличие L-форм рассматривают как причину рецидива туберкулеза в оздоровленных стадах (В.С. Федосеев, А.Н. Байгазанов, 1987).

Патогенез. Возбудитель туберкулеза, попав в организм аэрогенным, алиментарным и другими путями, проникает в межклеточные щели слизистой оболочки, где их поглощают подвижные полиморфноядерные лейкоциты (фагоциты) и с током лимфы или крови разносят по всему организму. Размножение микобактерий туберкулеза и взаимодействие с ними макрофагов происходит преимущественно в тканях с избирательной локализацией туберкулезного процесса (лимфатические узлы, легкие, печень и др.). В дальнейшем в местах жизнедеятельности возбудителя формируется защитный очаг – туберкул.

Туберкулезные изменения в тканях представляют собой воспалительную реакцию, включающую в себя процессы альтерации (некроз части тканевых элементов), экссудации (выход из сосудов плазмы с форменными элементами) и пролиферации (формирование соединительной капсулы). Основу туберкула составляют фагоциты. Туберкул вначале имеет сероватый цвет и округлую форму; величина его от булавочной головки до чечевичного зерна.

Затем узелок окружается соединительнотканной капсулой. Ткань внутри инкапсулированного узелка из-за отсутствия притока питательных веществ и под воздействием токсинов возбудителя отмирает и превращается в сухую крошковатую массу, напоминающую творог (казеоз).

Процесс формирования первичного туберкулезного очага получил название первичного комплекса. Исход первичного туберкулезного процесса может быть различным. При высокой естественной резистентности организма и минимальных дозах возбудителя может произойти заживление первичного туберкулезного комплекса с одновременным разрушением содержащихся в нем микобактерии. Но чаще всего инкапсулированные первичные очаги обызвествляются и вместе с находящимися внутри них туберкулезными микобактериями сохраняются в организме длительное время, даже в течение всей жизни.

В организме с пониженной резистентностью процесс инкапсуляции возбудителя в первичном очаге выражен слабо. Вследствие недостаточной регенерации соединительной ткани происходит расплавление стенок туберкулезного узелка, при этом микобактерии попадают в здоровую ткань, что приводит к образованию множества мелких узелков, которые могут сливаться между собой, образуя крупные туберкулезные фокусы.

Микобактерии из туберкулезных фокусов могут попасть в кровь, что приводит к генерализации процесса и развитию в разных органах туберкулезных очагов различной величины. При такой стадии болезни отмечается неблагоприятный исход туберкулезной инфекции – истощение и смерть.

Следует отметить, что в последние годы довольно часто наблюдается скрытое течение туберкулезной инфекции, при котором возбудитель длительное время пребывает в макроорганизме, но специфические туберкулезные изменения во внутренних органах и тканях отсутствуют.

Эпизоотологические данные. К туберкулезу наиболее восприимчив крупный рогатый скот, свиньи, норки, куры.

Источник возбудителя – больные животные, выделяющие возбудитель с калом, мочой, молоком, мокротой. Наиболее опасны животные со скрытым течением туберкулеза. Особенно много возбудителя выделяют животные с открытыми формами туберкулеза (туберкулез легких, кишечника, вымени). Факторы передачи возбудителя – корма, объекты внешней среды; для молодняка – обрат и молоко от больных коров. Основные пути заражения – аэрогенный и алиментарный. Птица, кроме того, заражается трансовариально, и выведенные цыплята являются источником возбудителя инфекции. Небезопасны для животных люди с открытыми формами туберкулеза. Наличие возбудителя туберкулеза в организме животного не всегда приводит к возникновению заболевания.

Болезнь распространяется сравнительно медленно. Определенной сезонности в проявлении эпизоотического процесса не наблюдается. Возможно заражение людей и животных несвойственными им видами возбудителя. Свиньи в равной степени восприимчивы ко всем видам возбудителя. Крупный рогатый скот может заражаться М. tuberculosis, однако такие случаи наблюдают не у всех животных.

Предубойная диагностика. По локализации туберкулезного процесса у крупного рогатого скота различают легочную форму (при поражении органов дыхания), кишечную (с локализацией процесса в кишечнике) и генерализированную, у коров наблюдается поражение вымени, а также генерализованный туберкулез.

В случае поражения легких больные животные страдают от одышки, повышения температуры тела, сильного кашля, особенно по утрам, затрудненного дыхания, угнетения, потери аппетита. При аускультации области грудной клетки отмечаются влажные или сухие хрипы. Если в процесс вовлекается плевра, то животное ощущает болезненность при надавливании между ребер. При локализации процесса в подчелюстных и заглоточных лимфатических узлах последние увеличены, что нередко приводит к затруднению акта глотания и приступам удушья. Поражение кишечника сопровождается расстройствами – поносами, запорами с приступами колик.

Когда поражено вымя, то в процесс вовлекаются надвыменные лимфатические узлы. Вымя, особенно задняя часть его, припухает, на ощупь плотное, отмечаются бугристые участки, болезненные при ощупывании. Молоко из пораженной доли водянистое, иногда с примесью крови или творожистой массы. У быков обычно поражаются, семенники с клинической картиной орхитов.

При генерализованном хроническом течении туберкулезного процесса поражаются поверхностные лимфатические узлы: подчелюстные, заглоточные, околоушные, шейные, коленной складки и др. Они увеличены, плотные, болезненные. Больное животное быстро теряет упитанность, наступает истощение.

У свиней клиническое проявление туберкулеза во многом такое же, как и у крупного рогатого скота. Особенно часто у них поражаются подчелюстные заглоточные и шейные лимфатические узлы. Иногда болезнь протекает без видимых клинических признаков.

У овец и коз туберкулез чаще протекает бессимптомно. При редких случаях поражения органов дыхания и вымени клинические признаки болезни сходны с признаками болезни крупного рогатого скота.

Лошади болеют туберкулезом сравнительно редко, и болезнь у них в основном протекает латентно. Больные лошади утомляются в работе, если поражены легкие, отмечается кашель и постепенное истощение.

Послеубойная диагностика. Проводя послеубойную ветеринарно-санитарную экспертизу, главное внимание обращают на состояние лимфатических узлов грудной полости и легких, так как эти органы чаще вовлекаются в туберкулезный процесс.

У крупного рогатого скота в легких образуются специфические узелки (туберкулы) различной величины – от малозаметных до куриного яйца и более. Вокруг очага развивается соединительнотканная капсула, наполненная творожистой массой (казеозный некроз), в ряде случаев – гнойными фокусами. При хроническом течении болезни в туберкулезном узелке появляется обызвествление. Если прощупать доли легкого, то можно обнаружить плотные бугристые участки. Одновременно с этим и воспалительный процесс вовлекаются бронхиальные и средостенные лимфатические узлы. При экссудативном процессе лимфоузлы увеличены в объеме, ткань их значительно уплотнена и на разрезе видна творожистая масса желтоватого цвета.

Поражение кишечника чаше наблюдается у молодняка, туберкулезный процесс охватывает брыжеечные лимфатические узлы. Не все, а один или несколько увеличены и имеют такие же морфологические изменения, как и лимфоузлы легких.

В неблагоприятных условиях содержания и кормления животных, особенно телят, что значительно снижает резистентность организма, возбудитель туберкулеза гематогенным путем распространяется по всему организму, вызывая генерализованный процесс. При этом поражаются печень, селезенка, почки, мышечная и костная ткани, органы грудной полости. Все органы бывают усеяны туберкулезными узелками не крупнее просяного зерна. Такой процесс принято называть милиарным поражением. Строение милиарных узелков сходно с типичными туберкулами. Поражение серозных покровов (плевры и брюшины) у крупного рогатого скота протекает с образованием плотных узелков, покрытых блестящей серозной оболочкой (продуктивный процесс). Количество узелков иногда огромное. Они могут срастаться друг с другом. Такая (весьма характерная) картина поражения серозных покровов называется «жемчужницей».

В молочной железе обнаруживают крупноочаговые поражения в виде казеозного мастита (особо плотные дольки с наличием казеозного распада с частичным отложением крупинок извести).

У свиней первичные поражения находят в лимфатических узлах головы, легких или кишечника (брыжейки) и реже в печени и других органах, причем морфологические изменения в них такие же, как у крупного рогатого скота. Из органов чаще других поражаются легкие. Генерализованный туберкулезный процесс и поражение серозных оболочек у свиней наблюдается редко.

У лошадей болезнь чаще обнаруживается при осмотре легких, где много мелких узелков. Возможны поражения и в мезентеральных лимфоузлах. Они при этом увеличены и при вскрытии в них обнаруживают творожисто-гнойное перерождение ткани.

Постановку диагноза на туберкулез при проведении после убойной экспертизы следует дифференцировать от поражений в тканях и органах при актиномикозе, паратуберкулезном энтерите крупного рогатого скота, псевдотуберкулезе, а также от эхинококкозных пузырей и некротических фокусов, личинок трематод и поражений бластоматозного характера.

При разрезе актиномикозного очага отсутствует отложение извести, на стенках разреза имеется куполообразное впячивание, нет неприятного запаха и, как правило, не поражены регионарные лимфатические узлы. При паратуберкулезном энтерите крупного рогатого скота воспалительный процесс локализуется в стенках кишечника с образованием утолщений и грубых складок. В узелках псевдотуберкулезного происхождения нет отложений, солей извести. Поражение органов и тканей паразитарного и бластоматозного происхождения не изменяет регионарных лимфатических узлов.

Лабораторная диагностика. Выделить возбудителя туберкулеза в чистом виде трудно. Успех во многом зависит от исследуемого материала. В качестве последнего можно использовать пораженные органы и ткани, кровь, экссудат, транссудат, гной, молоко, масло, творог, мочу, фекалии, навоз, почву, воду, соскобы с различных объектов животноводческих помещений и др. В каждом случае перед посевом применяют соответствующий метод обработки материала.

Для освобождения от посторонней микрофлоры исследуемый материал (молоко, мочу, слизь, пораженные органы и ткани) обрабатывают 6-10 % раствором серной кислоты (метод Гона) не более 25-30 минут.

Для обработки жидкого, полужидкого, кашицеобразного материала и соскобов с объектов среды обитания животных используют метод флотации. Сущность метода заключается в том, что исследуемый материал взбалтывают в колбе вместе с углеводородами (бензол, бензин и др.), а всплывающий слой пены – флотат, содержащий микобактерии туберкулеза, используют для приготовления мазков, посевов на питательные среды, заражения лабораторных животных.

Дифференциация микобактерии туберкулеза. Для дифференциации микобактерий существуют следующие методы: микроскопический, культуральный, цитохимический, биохимический, серологический, аллергический, биологический и др.

Микроскопический метод. Бычий вид – микобактерии достигают длины 1,5-3,5 и толщины 0,3-0,5 мкм; также встречаются в виде овоидных и кокковидных форм. Палочковидные формы чаще прямые и изогнутые, с округленными концами и зернистостью.

Человеческий вид микобактерий – более длинные, тонкие и стройные. Микобактерии птичьего вида наблюдаются в виде коротких и длинных полиморфных палочковидных форм. Представители микобактерий мышиного вида тоже полиморфны.

Необходимо знать, что размеры и форма всех туберкулезных микобактерии весьма относительны и при определенных усло­виях выращивания колеблются, иногда в довольно широких пределах.

Культуральный метод. Вирулентные культуры микобактерии бычьего вида на питательных средах растут очень медленно в виде сферических, гладких и шероховатых колоний, чаще в виде сухих крошек.

Культуры микобактерий человеческого вида также растут в виде сферических колоний, которые встречаются как в R-, так и в S-форме.

Свежевыделенные культуры микобактерий птичьего вида растут быстрее, чем человеческого и бычьего. Рост характеризуется образованием гладких, мелких, круглых, белых, блестящих, с ровными краями колоний, располагающихся как единично, так и в виде скоплений или сплошного слизистого налета.

Биологический метод. Сущность биологического метода дифференциации заключается в определении патогенности культуры для морских свинок, кроликов, птиц и других лабораторных животных, которые отличаются восприимчивостью к различным микобактериям туберкулеза.

Дифференциацию выделенных культур проводят на двух кроликах массой не менее 1,5-2 кг, которым в краевую вену уха вводят суспензию культуры микобактерии в физиологическом растворе: первому в дозе 0,1, второму – 0,01 мг бактериальной массы.

Возбудитель туберкулеза бычьего вида на протяжении 3 месяцев вызывает генерализованное поражение, человеческого вида – нетипичные туберкулезные очажки регрессивного характера, птичьего вида – септическую форму болезни без образования специфических патологических изменений в органах и тканях с летальным исходом в течение 2-3 недель.

Параллельное заражение двух морских свинок такими же дозами культуры позволяет дифференцировать возбудителя птичьего вида, к которому они нечувствительны, в то время как микобактерии человеческого и бычьего видов у них вызывают прогрессивные туберкулезные изменения. У кур, зараженных внутривенно бактериальной массой, микобактерии птичьего вида в дозе 1 мг вызывают туберкулезные поражения селезенки, печени и кишечника. Куры к возбудителю человеческого и бычьего видов менее чувствительны.

Биохимический метод. Основан на проявлении различной ферментативной активности микобактерий разных видов.

Наиболее демонстративны следующие тесты биохимической дифференциации микобактерий: ниациновый тест, реакция восстановления нитратов, амидазная проба, каталазная и арилсульфатазная активность, рост на среде с салицилатом натрия, деградация (разрушение) салицилата натрия, ПАСК, использование нитрата как единственного источника азота, устойчивость к 5 % хлориду натрия и пикриновой кислоте, сахаролитическая активность, гидролиз твина-80 и др.

Серодиагностика. Для ранней диагностики туберкулеза, а также для определения антигенного родства между истинными и атипичными микобактериями используют реакцию связывания комплемента (РСК) с антигенами УНИИЭВ (Ю. Я. Кассич) и СибНИВИ (Э. Д. Лакман); реакцию пассивной, или непрямой, гемагглютинации (РПГА); реакцию кольцепреципитации; реакцию диффузной преципитации в геле (РДП).

Аллергическая диагностика туберкулеза. Ведущее место в прижизненном распознавании туберкулеза у животных и птиц занимает аллергическая диагностика с использованием туберкулина (Р. Кох, 1890). Однако еще до Коха в России Гельман (1888-1889) изготовил экстракт из туберкулезных бактерий и испытал его с диагностической целью на больных туберкулезом коровах, получив положительный результат. Диагностика с помощью туберкулина наиболее распространенный метод в медицине и ветеринарии. В настоящее время основным прижизненным методом исследования животных на туберкулез служит внутрикожная туберкулиновая проба. Туберкулин для млекопитающих изготавливают из штаммов только бычьего вида.

Для внутрикожной пробы применяют сухой очищенный туберкулин (протеин пурифиед дериват – ППД). ППД был предложен М.А. Линниковой для медицинской практики. В ветеринарии используют стандартизированный сухой очищенный туберкулин для млекопитающих, который содержит в диагностической дозе 10 000 ± 2000 туберкулиновых единиц (ТЕ), т. е. 0,2 мг препарата, растворенного в 0,2 мл растворителя.

Сухой очищенный туберкулин (ППД) для птиц готовят по той же технологии, что и ППД для млекопитающих, – из культурального фильтрата микобактерий туберкулеза птичьего вида и применяют для диагностики у птиц и свиней.

Туберкулин вводят внутрикожно крупному рогатому скоту, буйволам, зебу, верблюдам, оленям – в область средней трети шеи, свиньям – наружной поверхности основания уха, курам – в бородку.

С этой целью применяют инъекционные иглы (МРТУ № 46-84-42 или 0612), которые следует менять при каждом наполнении шприца туберкулином. Используют и безыгольные инъекторы марки ИБВ-0,1, БИ-7 «Овод», которые ускоряют и упрощают процесс введения туберкулина.

Учитывают реакцию через 72 ч по результатам измерения толщины кожной складки с учетом характера образовавшейся припухлости. При положительной реакции появляется разлитой отек размером 35х45 мм и больше, без строго очерченных границ, тестообразной консистенции, с повышенной местной температурой и чувствительностью (болезненность). Кожная складка увеличивается на 3 мм и более. Кожную складку измеряют с помощью кутиметра и по разнице между показателем толщины возникшей припухлости и складки неизмененного участка кожи устанавливают степень увеличения.

Курам туберкулин вводят внутрикожно в одну бородку, вторая служит контролем. Реакцию учитывают через 30-36 ч. Положительная реакция проявляется в виде опухания бородки, она утолщена, тестообразна, горячая и отвисает книзу.

Кроме внутрикожной пробы в определенных случаях используют глазную, подкожную и внутривенную пробы.

Крупный рогатый скот может быть инфицирован возбудителем человеческого, птичьего видов, паратуберкулезными или атипичными микобактериями. Такие животные положительно реагируют на туберкулин млекопитающих, но не являются туберкулезными. Такие реакции называют неспецифическими и разделяют на парааллергические и псевдоаллергические.

Парааллергические реакции – результат сенсибилизации крупного рогатого скота атипичными микобактериями, псевдоаллергические – результат воздействия возбудителей паразитарных болезней и других факторов.

Для дифференциации аллергических реакций у животных предложен комплексный аллерген (КАМ) из атипичных микобактерий (А. Н. Шаров, 1978).

Специфическая профилактика. При туберкулезе иммунитет нестерильный, продолжается до тех пор, пока в организме присутствуют живые микобактерии туберкулеза. Роль живых бактерий туберкулеза в образовании иммунитета выявил Р. Кох в опыте повторного заражения больных туберкулезом морских свинок. При их первичном заражении туберкулезными микобактериями под кожу на месте инъекции через 10-14 суток образуется язва, не заживающая до гибели животного. При повторной инокуляции (через 4-6 недель) той же культуры участок кожи в месте инъекции через 1-3 суток некротизируется, отторгается и образуется весьма быстро заживающая, в противоположность первичной язве. Этот опыт был назван феноменом Коха.

Механизм формирования иммунитета при туберкулезе до конца не выяснен. Несомненно одно: присутствующие в крови больных антитела (агглютинины, комплементсвязывающие и др.) играют ничтожную роль в защите макроорганизма. Значительную защитную функцию организма осуществляют Т-лимфоциты, тканевые элементы, образующие специфические бугорки (эпителиоидные, гигантские и лимфоидные клетки). Бугорок может инкапсулироваться и обызвествляться, что приводит к разрушению содержащихся в бугорке микобактерий. И. И. Мечников первый указал на роль макрофагов в разрушении возбудителя туберкулеза. Однако фагоцитоз имеет незавершенный характер и фагоцитированные микобактерии не погибают, а даже сохраняются в макрофагах.

Вакцину против туберкулеза предложили в 1924 г. французские ученые Кальметт и Герен. В течение 13 лет они культивировали штамм бычьих туберкулезных палочек на картофеле, пропитанном бычьей желчью с 5 % глицерина. В результате 230 пересевов культуры, непрерывно подвергавшейся воздействию желчи, авто­ры получили стойкий вариант с определенными биологическими свойствами. Штамм этот назван культурой BCG (Bacterium Calmett – Guerin), по-русски БЦЖ. Кальметт и Герен предложили использовать культуру БЦЖ как безопасную вакцину для иммунизации людей и животных, в первую очередь крупного рогатого скота. В России противотуберкулезные прививки являются одним из важнейших мероприятий в профилактике туберкулеза человека. В ветеринарной практике вакцина БЦЖ не нашла применения.

Ветеринарно-санитарная оценка и мероприятия. Полностью туша и все другие продукты убоя направляются на утилизацию в двух случаях: первый – когда туши имеют тощую упитанность, любую форму поражения туберкулезом органов или лимфатических узлов, второй – при обнаружении генерализованного туберкулезного процесса (когда одновременно поражены грудные и брюшные органы и большинство регионарных лимфатических узлов) независимо от упитанности.

Туши нормальной упитанности (кроме туш свиней и непораженных органов) при наличии поражения туберкулезного происхождения в лимфатическом узле, в одном из внутренних органов или других тканях направляют как условно годные на обезвреживание методом проварки или для переработки в консервы с усиленным температурным режимом. Внутренний жир перетапливают. Непораженный туберкулезом кишечник направляют для использования на данном предприятии в качестве оболочки при выработке только вареных колбас, а при отсутствии такой возможности направляют на производство сухих кормов. Пораженные туберкулезом органы и ткани, независимо от формы поражения, направляют на утилизацию.

Если туберкулезное поражение в свиных тушах в виде обызвествленных очагов найдено только в подчелюстных лимфатических узлах, то последние удаляют, а голову вместе с языком обезвреживают проваркой. Тушу, внутренние органы и кишечник направляют на промпереработку. При аналогичном поражении лишь брыжеечных лимфатических узлов направляют на утилизацию кишечник, а тушу и остальные внутренние органы направляют на промпереработку.

В случае обнаружения в одном из тех же лимфатических узлов поражений в виде казеозных необызвествленных очагов или туберкулезных поражений (независимо от их вида) одновременно и в подчелюстных, и в брыжеечных узлах последние удаляют, кишечник направляют на утилизацию, а тушу и остальные органы – на выработку мясных хлебов, консервов или проварку.

При поражении туберкулезом костей все кости скелета направляют на техническую утилизацию, а мясо обезвреживают проваркой или переработкой в консервы с усиленным термическим режимом.

При убое животных, положительно реагирующих на туберкулин, и отсутствии патологоанатомических изменений в лимфатических узлах, тканях и органах туберкулезного характера туши выпускают без ограничения, шкуры – без дезинфекции.

Молоко от коров, буйволиц, овец и коз в неблагополучном по туберкулезу хозяйстве (ферме, стаде) обезвреживают и используют в следующем порядке: от животных оздоровляемых групп до постановки их на контроль молоко обезвреживают в хозяйстве при 90 ⁰С в течение 5 минут или при 85 ⁰С в течение 30 минут, после чего отправляют на молокозавод, где его подвергают повторной пастеризации при обычном режиме и в дальнейшем перерабатывают без ограничений. В таком режиме работают пастеризаторы ВДП - 300, 600, 1000 л/ч, ОПФ-1-300 л/ч.

Запрещается продажа молока и молочных продуктов на рынке из неблагополучных по туберкулезу хозяйств и от клинически больных и положительно реагирующих на туберкулез животных частного сектора.