gilmanovgemostaz

Протеин С

1.Клотинговый метод – трудоемок (по удлинению АЧТВ после активации ПрС в стандартной плазме и в плазме пациента)…

2.Метод с хромогенным субстратом (фотометрический) –

аналогично определению активности ферментов.

3.ИХЛ, ИФА – количество протеина С.

N= 70-130% от уровня нормальной плазмы

- гиперпотребление (тромбозы, тромбофлебиты, ДВС);

-уменьшение синтеза (старческий возраст, болезни печени, действие варфарина, длительный прием пероральных КА)

=> тромбофилия.

Тесты антикоагулянтной системы

Резистентность ф.V к активированному ПрС (РАПС, aPCR) –

по удлинению АЧТВ при активации ПрС в смеси субстратной плазмы, дефицитной по ф.V, с:

плазмой пациента,

нормальной донорской плазмой.

Лейден-мутация (G1691A) – методом ПЦР.

Протеин S (ПрS) – кофактор ПрС; норма – 60-140% от норм. плазмы.

При острофазовой реакции (связывание с С4-BP) возможен недостаток ПрS и снижение активности ПрС.

Маркеры активации плазменного гемостаза

1.Ранние – F1+2, Т-АТ

2.В момент образования сгустка – FM, ФП А

3.Поздние - D-димеры, ПДФ

Маркеры повреждения эндотелия

1.Фактор Виллебранда (кол-во, активность)

2.ТPA, тромбомодулин

3.PAI-1, эндотелин, молекулы адгезии

( ICAM-1, VCAM-1, P- и E-селектины…)

Тесты тромбоцитарного звена

Длительность кровотечения при стандартном проколе кожи - методы Duke, Ivy, Шитиковой

Количество тромбоцитов в крови, ТЦ формула

Агрегация тромбоцитов (спонтанная и индуцированная разными дозами АДФ, коллагеном, адреналином, тромбином, ристомицином)

Проточная цитофлуориметрия – выявление рецепторных глико-

протеинов тромбоцитов (www.biocytex.fr ), Р-селектина…

Время кровотечения по Ivy

Р=40 мм рт.ст.

Референтные пределы: взрослые – 2-9 мин, дети – 3-12 мин.

from: Platelets. Second Edition (A.Michelson). Elseiver, 2007.

ЭКО-МЕД-СМ

Подсчет количества тромбоцитов

В камере Горяева – низкая точность, возможно занижение результатов (сорбция на стекле пипеток, меланжеров, пробирок, камеры). Точность выше при фазово-контрастной микроскопии.

CV = 10-30%.

По Фонио – в мазке крови на 1000 эритроцитов. Низкая точность, но можно одновременно оценить морфологию тромбоцитов.

На гематологическом анализаторе – точно, в стандартных условиях, быстро. Важно предотвратить агрегацию (постоянное перемешивание). CV = 4-10% - важно для оценки динамики.

Показатели активности тромбоцитов

1.Спонтанная и индуцированная агрегация ТЦ (индукторы – АДФ, коллаген, адреналин, тромбин, ристомицин)

	2. PF4 – тромбоцитарный фактор 4		ИФА-тесты
	3. -TG - -тромбоглобулин

ОЦЕНКА ФУНКЦИИ ТРОМБОЦИТОВ

Богатая тромбоцитами плазма (PRP)

+ Индуктор агрегации

Базовое	Увеличение
светопропускание	светопропускания
	РЕНАМ

Агрегация тромбоцитов

 На агрегометре – тип кривой, ее параметры.

Типичная бифазная кривая агрегации тромбоцитов (богатая тромбоцитами плазма - PRP)

100
90
80
70
60	Введение
50
	индуктора
40
30
20
10
0
	Лаг-фаза	Первичный	Вторичный ответ
		ответ	(высвобождение)

 На стекле / в пробирке – время образования	первых ТЦ
агрегатов (просветление + зерна) при	добавлении
индуктора к плазме, богатой тромбоцитами.

Кривые агрегации тромбоцитов