Сборник статей 2014

		Содержание БАВ в водно-спиртовых
		40% экстрактах в пересчёте на сухой остаток, %
			л
			и
			с
			т
			ь
			е
			в
			к
			р
			а
	БАВ		п
		плодов рябины обыкновенной	и
			в
			ы
			д
			в
			у
			д
			о
			м
			н
			о
			й
			1
			4
			,
			5
	Сумма фенольных соединений	10,70 + 0,53	3
			+
			0
			,
			7
			2
			4
			,
			0
			3
	Дубильные вещества	0,23 + 0,01	+
			0
			,
			2
			0
	Антоцианы	0,72 + 0,04	-
			4
			,
			8
			0
	ФК	2,59 + 0,13	+
			0
			,
			2
			4
	Флавоноиды	0,17 + 0,01	-
	Полисахариды	25,76 + 1,28	8
			,
			9
			0
			+

279

0

,

4

4

0

,

1

0 Хлорофилл - + 0

,

0

1

Выводы. В водно-спиртовых экстрактах плодов рябины обыкновенной и листьев крапивы двудомной наибольший интерес представляют фенольные соединения, из которых для флавоноидов и гидроксикоричных кислот установили качественный состав.

АНАТОМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ ЛЮЦЕРНЫ ПОСЕВНОЙ (MEDICAGO SATIVA L.)

К.И. Ровкина

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Центр внедрения технологий

Актуальность. Применение растительных лекарственных средств не утратило своего значения, в связи с минимумом побочных эффектов, более мягким действием, а так же дешевизной источников получения препаратов. Поэтому поиск новых источников лекарственных препаратов среди уже известных растений по-прежнему немало важной задачей фармации. Внедрение в отечественную медицинскую практику новых видов лекарственного растительного сырья, продуктов его переработки, расширение ассортимента фитопрепаратов требуют совершенствования системы стандартизации и контроля их качества. Одним из этапов стандартизации является установление микроскопической структуры исследуемого объекта. Перспективным растением с точки зрения содержащихся в нем биологически активных соединений является люцерна посевная. Исследования показали, что люцерна богата витаминами, макро- и микроэлементами, флавоноидами, пектиновыми и другими биологически-активными веществами. Люцерна посевная (Medicago Sativa L.) не является официнальным лекарственным сырьем, поэтому для внедрения данного растения в медицинскую практику, наряду с фармакологическими исследованиям специфической активности и безвредности, необходимо разработать методики его стандартизации.

Цель. Изучить анатомическое строение надземной части люцерны посевной и выявить диагностически значимые признаки для определения подлинности сырья данного растения.

Материалы и методы. Объектом исследования была надземная часть люцерны посевной, собранная в Красноярском крае в июне 2013 года. Для микроскопического анализа растительное сырье фиксировали с помощью смеси спирт - глицерин - вода (1:1:1). Анатомическое строение изучали с помощью микроскопа «ЛОМО» модели МИКМЕД-6 при увеличении объектива 10х, 40х, 100х. Фотографии делали с помощью встроенной цифровой камеры высокого разрешения с адаптером «C – mount» для визуализации и компьютерного анализа.

Результаты. На поперечном срезе стебля люцерны посевной можно выделить следующие зоны: эпидерма, первичная кора, однослойная эндодерма и центральный цилиндр. Тип анатомического строения меняется от пучкового на верхушке до

280

непучкового в нижней зоне. Ксилема и флоэма верхней зоны стебля входят в состав сосудисто-волокнистых пучков, ниже они образуют сплошное кольцо. Проводящие пучки открытые, коллатеральные. Лубяные волокна в верхней зоне стебля входят в состав пучков. В клетках эндодермы встречаются кристаллы оксалата кальция. Сердцевина стебля неоднородна, имеет крупные тонкостенные клетки, в нижней зоне стебля она частично разрушается, образуя полость. При исследовании плоскостного препарата наблюдали многоугольные клетки эпидермиса, с равномерно утолщенными стенками, встречаются простые и головчатые волоски. Клетки верхней эпидермы листа имеют слабоизвилистые, равномерно утолщенные стенки. Нижняя эпидерма имеет клетки с более извилистыми стенками. Над жилками клетки прозенхимные, прямостенные. Устьичный аппарат аномоцитного типа. Устьица расположены с обеих сторон листа. С нижней стороны листа встречаются простые, одноклеточные, длинные, изогнутые волоски. Головчатые волоски расположены по краю листовой пластинки и особенно их много вдоль жилок. Так же вдоль жилок встречается кристаллоносная обкладка, в виде простых кристаллов оксалата кальция.

Выводы. Проведено микроскопическое исследование надземной части люцерны посевной, выявлены некоторые диагностические признаки.

КВАНТОВО-ХИМИЧЕСКОЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МЕЖМОЛЕКУЛЯРНОГО ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ В СИСТЕМЕ «ФЕНОЛ-БЕНЗОАТ» КАК МОДЕЛИ РЕАКЦИИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ С БЕЛКОВЫМИ МИШЕНЯМИ

О.А. Чусова

Алтайский государственный медицинский университет, г. Барнаул Кафедра фармакогнозии и ботаники

Актуальность. Химическая структура лекарственных веществ, входящие в их состав функциональные группы, определяют разнообразие механизмов их химического взаимодействия со структурами организма. Биомолекулы, в большинстве своем, имеют сложное строение, и поэтому возникают сложности с исследованием процессов их взаимодействия с лекарственными веществами. Как следствие, необходимы упрощенные модели, позволяющие изучить параметры данных процессов.

Цель. Экспериментально определить термодинамические параметры процесса комплексообразования в системе "фенол-бензоат натрия", как модели взаимодействия БАВ с биомолекулами, в состав которых входят фенольная или карбоксильная группы. Рассчитать квантово-химически параметры данного процесса. Сравнить полученные результаты с экспериментальными.

Материалы и методы. Экспериментальное исследование: на первом этапе определили энтальпию взаимодействия бензоата и фенола. Тепловой эффект процессов был измерен с помощью калориметра с точностью измерения 0,01°С, для этого растворили фенол в дистиллированной воде, а затем последовательно бензоат в дистиллированной воде и фенол в полученном растворе бензоата. С помощью компьютерного регистратора был построен график изменения температуры и графическим способом найдены тепловые эффекты. Исходя из значений тепловых эффектов каждого процесса, используя постоянную калориметра, измеренную в предварительном эксперименте, рассчитали энтальпию взаимодействия бензоата и фенола.

На втором этапе определили степень образования комплексов криоскопическим методом. Степень образования комплексов при различных значениях концентраций позволяет определить константу прочности комплексов. В свою очередь, константа прочности позволяет определить энергию Гиббса. Оценили энтропию процесса комплексообразования исходя из экспериментальных значений ΔG и ΔH. Квантово-

281

химические расчеты проводились с помощью программного пакета FireFly. Расчеты производились с использованием кластерной модели в базисе B3LYP 6-31G(d,p). Для учета специфической сольватации в кластере использовали 30 молекул воды, общая сольватация была рассчитана в модели PCM. Для каждой из систем было рассчитано 20 вариантов, средняя энергия и другие термодинамические параметры были определены с учетом распределения Гиббса.

Результаты. В ходе эксперимента были получены значения: ΔH = 14,60±0,73кДж/моль, ΔG = 16,95±0,62 кДж/моль, значение ΔS составляет величину порядка 8 Дж/ моль*К. Кван-тово-химические расчеты дали следующие значения: ΔH = 64,5кДж/моль, ΔG = 64,5 кДж/моль, ΔS =0 Дж/ моль*К. В изученной системе наблюдается образование весьма прочного комплекса за счет высокоэнергичной водородной связи. Следует заметить, что энтропия процесса весьма мала, что характерно для процессов в конденсированном состоянии. Наибольший вклад в прочность комплекса вносит энтальпийная составляющая. Полученные выводы подтверждаются и теоретическими методами. Наблюдается качественное соответствие между экспериментальными и расчетными результатами.

Выводы. Исходя из полученных данных, можно предположить, что наличие в молекуле лекарственного вещества фенольной функциональной группы позволяет прочно связываться с белковыми мишенями, имеющими остатки глутаминовой или аспарагиновой кислот. Наличие карбоксильной группы дает возможность образования прочного комплекса с остатками тирозина.

ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРОССГЕМИНА В НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ CENTAUREA SCABIOSA L.

А.Г. Осадчий

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра фармацевтической химии

Актуальность. Валидация аналитических методик является важнейшим элементом системы стандартизации при разработке нормативной документации, регламентирующей качество фармацевтической продукции. В настоящее время в СибГМУ ведутся исследования по разработке эффективного и безопасного лекарственного средства для лечения описторхоза на основе сесквитерпеновых лактонов василька шероховатого Centaurea scabiosa L., семейство Asteraceae. Для разработки проекта фармакопейной статьи на лекарственное сырье василька шероховатого, используемого для получения нового препарата, необходимо не только предложить методику количественного определения основного действующего вещества - сесквитерпенового лактона гроссгемина, но и провести валидацию данной методики.

Цель. Установить параметры пригодности хроматографической системы, специфичности, прецизионности и правильности в рамках валидационной оценки аналитической методики количественного определения гроссгемина в сырье C. scabiosa методом хроматографии в тонком слое-денситометрии.

Материалы и методы. Параметры пригодности хроматографической системы, специфичности, прецизионности и правильности устанавливали в соответствии с международными и российскими рекомендациями по валидации аналитических методик контроля качества фармацевтической продукции.

Сырье (надземная часть C. scabiosa) заготавливали в окрестностях поселка Кандинка Томской области в августе 2013 г. Стандартный образец гроссгемина предоставлен научно-производственным холдингом «Фитохимия» (г. Караганда). Для количественного определения гроссгемина в сырье C. scabiosa получали хлороформное извлечение методом бисмацерации при нагревании. Пробу извлечения наносили

282

хроматографическим шприцом М-10Н на хроматографическую пластинку Sorbfil ПТСХ- АФ-А вместе с серией разведений стандартного образца гроссгемина. Пластинку хроматографировали восходящим способом в системе растворителей гексан-ацетон- уксусная кислота (20:10:0,1). После высушивания пластинки пятна гроссгемина на хроматограмме детектировали путем погружения в раствор калия перманганата с последующим смыванием излишков проявителя проточной водой. Количественную оценку содержания гроссгемина в пробах проводили методом абсолютной градуировки с использованием программного обеспечения «Видеоденситометр Sorbfil 2.3» (Россия).

Результаты. Установление исследуемых параметров валидации аналитической методики проводили на 9 образцах модельной смеси хлороформного извлечения из надземной части С. scabiosa L. с известным содержанием гроссгемина. Определение выполняли в одних условиях и в один день. При использовании указанной системы растворителей на полученных хроматограммах наблюдается четкое разделение пятен анализируемого вещества (гроссгемин) и других сопутствующих соединений, чем обеспечивается специфичность методики количественного определения, а также подтверждает параметр пригодности хроматографической системы.

Полученные результаты количественного содержания гроссгемина в модельных смесях были подвергнуты метрологической обработке. Величина относительной ошибки составила 3,39 а отклонение от среднего результата в серии из 9 независимых определений

– 3%. На основании полученных данных можно судить о правильности и прецизионности предлагаемой методики.

Выводы. Установлено соответствие аналитической методики количественного определения гроссгемина в сырье С. scabiosa требованиям валидации по параметрам пригодности хроматографической системы, специфичности, прецизионности и правильности.

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕТВ ВАСИЛЬКА ШЕРОХОВАТОГО ДИКОРАСТУЩЕГО И КУЛЬТИВИРУЕМОГО

П.Ю. Афиян

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра фармацевтической химии

Актуальность. В настоящее время в медицине, наряду с синтетическими препаратами, широкое применение получили лекарственные средства растительного происхождения, так как они обладают меньшим количеством побочных эффектов. На кафедре фармацевтической химии СибГМУ ведутся исследования по изучению василька шероховатого (Centaurea scabiosa L.) как перспективного источника получения противопаразитарного средства. Несмотря на то, что василёк шероховатый довольно широко распространён в природе, введение этого растения в культуру и получение из культивируемого сырья оригинальных препаратов является достаточно актуальным.

Цель. На основании сравнительного химического анализа показать перспективность введения василька шероховатого в культуру.

Материалы и методы. Объектами исследования служила надземная часть василька шероховатого (Centaurea scabiosa L.), собранная в естественных условиях обитания в фазе конца бутонизации-начала цветения и выращенная в лаборатории по выращиванию лекарственных растений СибГМУ. Основными биологически активными веществами, которые по проведённым ранее исследованиям, отвечают за проявление противопаразитарной активности, являются сесквитерпеновые лактоны и флавоноиды. Качественный состав указанных веществ изучали методом хроматографии в тонком слое сорбента на пластинках «Sorbfil ПТСХ-П-А» (Россия) в восходящем токе выбранной системы растворителей при температуре 19-23оС в герметически закрытых стеклянных

283

камерах. В качестве стандартных образцов веществ-свидетелей использовали сесквитерпеновые лактоны (цинаропикрин, гроссгемин) и флавоноиды (рутин, апигенин, лютеолин).

Количественное определение сесквитерпеновых лактонов проводили методом планарной хроматографии с последующей цифровой обработкой хроматограмм в компьютерной программе «Видеоденсиметр Sorbfill». Исследуемые извлечения наносили на пластины в виде пятен с интервалом 9 мм, пятна детектировали насыщенным раствором калия перманганата способом погружения. Для количественного определения флавоноидов использовали метод дифференциальной спектрофотометрии, основанный на их способности образовывать с алюминия хлоридом комплексы, устойчивые в кислой среде. В качестве стандарта использовали ГСО рутина.

Результаты количественного определения подвергнуты математической обработке с использованием программного пакета «Statistica 6.0».

Результаты. Установлено, что качественный состав сесквитерпеновых лактонов василька шероховатого дикорастущего и культивируемого идентичен. По данным ТСХ анализа в надземной части растения содержатся сесквитерпеновые лактоны гваянового типа гроссгемин и цинаропикрин. Количественное содержание цинаропикрина в надземной части василька шероховатого дикорастущего составило 0,59±0,02, а культивируемого 0,72±0,06 %. Анализ качественного состава флавоноидов показал, что оба объекта исследования содержат апигенин, лютеолин и рутин. Содержание суммы флавоноидов в пересчёте на рутин в надземной части василька шероховатого дикорастущего составило 2,67±0,04, а культивируемого 2,02±0,04 %.

Выводы. Василек шероховатый культивиремый по качественному и количественному содержанию сесквитерпеновых лактонов и флавоноидов не уступает дикорастущему и может служить источником получения противопаразитарных средств.

МОДУЛЯЦИЯ АКТИВНОСТИ АДФР-ЦИКЛАЗЫ КЛЕТОК СРЕДНЕГО МОЗГА ПРИ НАРУШЕНИИ ЕГО РАЗВИТИЯ

С.А. Анисимов

Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф.ВойноЯсенецкого, г. Красноярск

Кафедра биологической химии с курсами медицинской, фармацевтической и токсикологической химии

НИИ молекулярной медицины и патобиохимии

Актуальность. Пренатальное нарушение развития головного мозга в течение многих лет является актуальной проблемой для исследователей (Шайкин В.И., 2004; DiPietro J.A., 2004; Schwabe L. et al., 2012). Материнский стресс, токсическое воздействие, инфекции, гипоксия, ишемия и другие факторы предрасполагают к внутриутробному поражению головного мозга и последующему нарушению когнитивных функций у детей, но их патогенез недостаточно изучен (Huppertz B., 2008; Schwabe L. et al., 2012). В то же время, одним из механизмов патогенеза аутизма как одного из вариантов пренатального нарушения развития может являться НАД_конвертирующий фермент АДФ- рибозилциклаза/НАД-гликогидролаза/CD38 (Higashida H. et al., 2001; Munesue T. et al., 2010), который также может служить потенциальной мишенью для направленной терапии аутизма (Higashida H. et al., 2012).

Цель. Протестировать возможность применения модуляторов АДФР-циклазной активности клеток среднего мозга в физиологических условиях и при пренатальном нарушении его развития.

Материалы и методы. Исследование выполнено в ЦКП НИИ молекулярной медицины и патобиохимии КрасГМУ. Моделирование нарушения развития головного мозга

284

проводили на крысятах линии Wistar: на 12-й день с момента зачатия беременным самкам подкожно вводили растворы ротенона (концентрация 0,5 мг/кг веса, в 100% ДМСО, n=10 крысят), вальпроевой кислоты (500 мг/кг веса, в физиологическом растворе, n=4); их комбинации (n=8); контролем служили крысята от самки с инъекцией 100% ДМСО (1 мл/кг веса, n=9). На 90-е сутки развития производили забор ткани среднего мозга, в гомогенате ткани определяли АДФ-рибозилциклазную активность по стандартной методике (Graeff R. M. и соавт., 1994) и выражали в ед/мин/мг белка. Модуляцию активности проводили с помощью АТФ (1мМ), оАТФ (100 мкМ) и НАД (1 мМ). Статистически значимые различия во всех группах до и после применения модуляторов оценивали с помощью теста Уилкоксона, сравнение экспериментальных групп с контрольной до модуляции – с помощью теста Манна-Уитни. Результаты представлены в виде медианы и межквартильного размаха, p – уровень значимости.

Результаты. Исходная АДФР-циклазная активность различалась значимо (p=0,034 для ротенона, p=0,016 для комбинации ротенона и вальпроата) в группах с введением ротенона, комбинации ротенона с вальпроевой кислотой в сравнении с контролем: исходная активность в контрольной группе составляла 0,26 (0,23…0,43) ед/мин/мг белка, в группе с введением ротенона – 0,58 (0,39…1,42), комбинации ротенона и вальпроата – 0,12 (0,09…0,23) ед/мин/мг белка. При приложении модуляторов значимый эффект оказали АТФ и НАД в контрольной группе (АТФ: p=0,011; НАД: p=0,021) и группе с введением ротенона (АТФ: p=0,037; НАД: p=0,028): после добавления АТФ в контрольной группе активность АДФР-циклазы составила 0,15 (0,14…0,21) ед/мин/мг белка, в группе с воздействием ротенона – 0,44 (0,27…0,69); при добавлении НАД в контроле – 0,12 (0,07… 0,29), в группе с ротеноном – 0,29 (0,09…0,49) ед/мин/мг белка. В остальных группах при приложении всех тестируемых модуляторов значимых различий не было обнаружено.

Выводы. Потенциальными модуляторами, с помощью которых возможно корректирующее воздействие на АДФР-циклазную активность клеток среднего мозга в норме и при пренатальном нарушении его развития, являются АТФ (активатор нуклеотидных рецепторов) и НАД (субстрат/лиганд для АДФР-циклазы).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВПИТЫВАЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ ПЕРЕВЯЗОЧНОГО МАТЕРИАЛА НА ОСНОВЕ СФАГНОВОГО МХА

Е.А. Безверхняя

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Центр внедрения технологий, СибГМУ

Актуальность. Одной из актуальных задач отечественной медицинской науки является создание инновационных технологий, на базе которых возможно производство высокоэффективных изделий для лечения ран. Конкурентными преимуществами современных изделий для лечения ран являются такие свойства, как высокая впитывающая (абсорбционная) способность, ранозаживляющая активность, отсутствие сенсибилизирующего действия и несинтетическое происхождение. Большинство из перечисленных выше свойств присущи сфагновому мху (Sphagnum fuscum Schimp.). Сфагновый мох способен впитывать и сохранять до 20 и более весовых частей воды на часть сухого веса. При нанесении на раневую поверхность он обеспечивает поддержание оптимальной влажности, постоянной температуры и газообмена в ране, предотвращает реинфицирование. В качестве перевязочного средства сфагновый мох успешно использовали вплоть до второй Мировой войны. Таким образом, разработка нового перевязочного материала на основе сфагнового мха, обладающего высокой впитывающей способностью, является перспективным направлением.

Цель. Оценка впитывающей способности образцов перевязочного материала на основе сфагнового мха в различных модификациях в соответствии с направлением исследования.

285

Материалы и методы. Объектами исследования послужили образцы перевязочного материала на основе сфагнового мха. В качестве контроля использовали распушенную целлюлозу из сорбционной повязки Hartmann Zetuvit (Германия), вату хирургическую (Россия).

Исследуемые образцы:

1.Нативный сфагновый мох, размер частиц 0,5 мм (НСМ0,5);

2.Нативный сфагновый мох, размер частиц 2 см (НСМ2);

3.Нативный сфагновый мох, цельное сырье (НСМЦ);

4.Отбеленный сфагновый мох, размер частиц 0,5 мм (ОСМ0,5);

5.Отбеленный сфагновый мох, размер частиц 2 см (ОСМ2);

6.Отбеленный сфагновый мох, цельное сырье (ОСМЦ);

7.Распушенная целлюлоза из сорбционной повязки Hartmann Zetuvit (Германия) (РЦ);

8.Вата хирургическая (Россия) (ВХ).

Для изучения впитывающей способности исследуемых образцов применяли метод, описанный Ю.К.Абаевым, модифицированный в соответствии с целью и задачами нашего исследования

Результаты. Исследована впитывающая способность (ВС) 6 образцов перевязочного материала на основе сфагнового мха в сравнении с контролем:

Величина ВС у образцов на основе нативного сфагнового мха (НСМ0,5, НСМ2, НСМЦ) и у образцов на основе отбеленного сфагнового мха (ОСМ0,5, ОСМ2, ОСМЦ) отличается на 2-5%.

Величина размера частиц сфагнового мха оказывает влияние на величину ВС: у образцов с размером частиц 0,5см минимальные значения ВС - 1520,4±45,1 - 1737,7±51,3; у образцов с размером частиц 2см максимальные значения ВС - 2920,8±87,3 - 3096,2±92,4.

Все исследуемые образцы на основе сфагнового мха обладают высокой ВС по отношению к жидкостям с различными реологическими свойствами, превышающей ВС образцов сравнения: РЦ на 42,7% и 29,7%, и ВХ на 54,2% и 44,9%.

Все исследуемые образцы на основе сфагнового мха фиксируют и эффективно удерживают абсорбированную жидкость. Потери жидкости не превышают 3,25±0,09%, в сравнении с РЦ потери жидкости - 4,65±0,12% - 20,63±0,63%, а у ВХ - 12,07±0,35%- 26,42±0,68%.

Выводы. Образцы перевязочного материала с размером частиц мха 2см (НСМ2 и ОСМ2) демонстрируют в эксперименте наибольшую величину впитывающей способности и в тоже время эффективно удерживают поглощенную жидкость. Следовательно, данные образцы являются наиболее перспективными при разработке высокоэффективного современного впитывающего материала.

286

МИКРОБИОЛОГИЯ. ИММУНОЛОГИЯ

ИЗУЧЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БОЛЬНЫХ ИКСОДОВЫМ КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛИОЗОМ

И.Д. Пименов

Сибирский государственный медицинский университет г. Томск. Кафедра инфекционных болезней и эпидемиологии.

Актуальность. Иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ) – инфекционное трансмиссивное природно-очаговое заболевание. Известно, что функциональное состояние лимфоцитов, отражающее особенности иммунного ответа на возбудитель инфекции, можно оценивать, изучая морфологические особенности этих клеток. Известно, что из биологических мутагенных факторов цитогенетические нарушения способны вызвать не только вирусы, но и некоторые бактерии.

Цель. Характеристика функционального состояния и цитогенетического статуса лимфоцитов у больных острым иксодовым клещевым боррелиозом (ИКБ).

Материалы и методы. В качестве материала использовалась капиллярная и венозная кровь 12 больных с диагнозом серопозитивного варианта острого ИКБ, госпитализированных на 2-3 неделе заболевания (группа IA), а также 10 пациентов из этой же группы в период реконвалесценции через 3 месяца после эффективного курса антибиотикотерапии (группа IB). Контрольная группа (группа II) состояла из 12 здоровых лиц. Взятие образцов крови осуществляли в динамике на 1-ый и 30-ый дни, то есть до и после окончания курса антибиотикотерапии. У всех обследованных лиц брали венозную кровь для получения стимулированных фитогемагглютинином культур лимфоцитов, которые инкубировали в течение 72 ч. И получали препараты для хромосомного анализа и РБТЛ. Кроме того, для оценки числа клеток в состоянии апоптоза и уровня пролиферативного ответа лимфоцитов, нами был использован метод лазерной проточной цитометрии с детекцией иммунофлуоресцентно окрашенных клеток, инкорпорировавших бромдезоксиуридин с использованием набора FITC BrdU Flow Kit («BD Pharmingen», США).

Результаты. . В культурах мононуклеарных клеток больных острым ИКБ, по сравнению с контролем и группой реконвалесцентов, происходит значительный рост числа лимфоцитов с цитогенетическими нарушениями кластогенного и анеугенного типов, при одновременном подавлении пролиферативного ответа на митоген и увеличении элиминации генетически поврежденных клеток путем апоптоза. При анализе препаратов ФГА-стимулированной РБТЛ, полученных на 1-ый день госпитализации больных ИКБ, число бластрансформированных клеток или клеток с крупными ЯОР было существенно ниже, чем подобных клеток в препаратах, полученных от группы контроля (P<0,01), а также в препаратах тех же больных после курса лечения (P<0,05). В культурах, полученных от больных ИКБ было установлено достоверное уменьшение числа лимфоцитов в S- и G2/M-фазах клеточного цикла при одновременном существенном увеличении числа клеток в G0/G1-фазах и в состоянии апоптоза (P<0,01), по сравнению с соответствующими значениями в контроле, что косвенно свидетельствует об аресте

287

клеточного цикла в G1-фазе, подавлении пролиферации и стимуляции старения и гибели иммунокомпетентных клеток. Из структурных аберраций хромосом в культурах мононуклеарных клеток больных острым ИКБ установлено существенное повышение числа клеток с хроматидными и, в меньшей степени, хромосомными разрывами (P<0,01).

В культурах мононуклеаров периферической крови больных острым ИКБ показано значительное увеличение числа гипоплоидных, полиплоидных лимфоцитов, а также числа клеток с микроядрами, митозов с отставанием хромосом, многогрупповых метафаз или многополюсных митозов (P<0,05).

Выводы. 1. Механизмы формирования цитогенетических нарушений вероятнее всего носят опосредованный характер и связаны с активацией в ходе инфекционного процесса образования эндогенных оксидантов, вызывающих окислительный стресс, повреждение ДНК, патологический митоз, поли- и анеуплоидию, преждевременное старение клеток и их апоптоз.

2. По-видимому, выявленные изменения, зависят от тяжести течения заболевания и имеют значение для оценки эффективности антибактериальной терапии и исходов взаимодействия возбудителя ИКБ с иммунной системой хозяина.

СРАВНЕНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО СОСТАВА ЖИДКИХ КИСЛОМОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ

Е.М. Каменских

Сибирский государственный медицинский университет г. Томск. Кафедра микробиологии и вирусологии.

Актуальность. Такие кисломолочные продукты, как питьевой йогурт, кефир, ряженка, бифидок и другие давно и прочно вошли в наш повседневный рацион. Широкое их потребление объясняется не столько вкусовыми предпочтениями, как стойким мнением о полезности данных продуктов. Достаточно популярным маркетинговым ходом является заявление о содержании большого количества микроорганизмов, которые не только улучшают пищеварение, но и способствуют повышению иммунитета. В список наиболее известных пробиотических культур входят микроорганизмы родов Lactobacillus и Bifidobacterium. Какие механизмы лежат в основе полезного действия данных микроорганизмов? А содержатся ли они в принципе в данных товарах? Какие продукты следует считать наиболее полезными? На эти вопросы мы попытались ответить.

Цель. Анализ жидких кисломолочных продуктов рынка Томска на содержание микроорганизмов.

Материалы и методы. Для сбора первоначальной информации проводился анализ жидкой кисломолочной продукции в 2-х крупных супермаркетах Томска. В результате были выбраны продукты, которые исследовались в дальнейшем: «Имунеле», закваски «Genesis» для йогурта, «Активиа», кефир «Простоквашино», продукты фирмы «Деревенское Молочко» (снежок, бифидок, ряженка, биойогурт), йогурт «Для всей семьи», «Эрмигут», «Чудо» йогурт, «Тан», «Бифацил», биопродукт кисломолочный кефирный и биойогурт «Bio Баланс», «Актуаль». При приготовлении мазков с самих кисломолочных изделий окрашивался продукт, что не позволяло различить микроорганизмы. Поэтому мы исследовали микробный состав продуктов путем посева на питательные среды. Для этого использовались: 1% МПА, смесь 1% МПА с молочнокислым продуктом 1:10, жидкая молочная сыворотка, жидкая молочная сыворотка с различными солями, молочный агар. Наилучшие результаты были получены при работе с молочным агаром, который мы и использовали в дальнейшем. Культуры, выросшие на молочном агаре изучали по морфологическим, тинкториальным (окраска по Граму) и культуральным свойствам.

288