Список необходимого оборудования

1. Набор красителей и реактивов для окраски препаратов.

2. Стекла предметные.

3. Стекла покровные.

4. Стекла с лунками.

5. Штатив под пробирки.

6. Петля бактериальная.

7. Шпатели стеклянные и (или) металлические.

8. Банка с ватой.

9. Пипетки градуированные на 1, 5, 10 мл.

10. Пипетки пастеровские.

11. Пинцет, ножницы, скальпель.

12. Банка с дезинфицирующим раствором для отработанных предметных стекол и пипеток.

13. Банка с дезинфицирующим раствором для обработки рук.

14. Микроскоп с осветителем.

15. Лупа х5.

16. Масленка с иммерсионным маслом.

17. Фильтровальная бумага.

18. Спиртовая или газовая горелка.

19. Установка для окраски препаратов: промывалка, лоток с мостиком.

20. Песочные часы на 1 и 2 минуты.

21. Стерильные пробирки.

22. Баллоны резиновые.

23. Карандаш по стеклу.

Порядок выполнения работ и оформления лабораторного журнала

Экспериментальная работа в лаборатории предваряется самостоятельным изучением соответствующего теоретического материала.

В ходе домашней подготовки в лабораторном журнале выполняются конспекты необходимых методик.

Время лабораторной работы должно быть использовано на освоение практических методов исследования объектов.

По результатам работы студент оформляет отчет в лабораторном журнале. Отчет выполняется в следующем порядке:

1. тема;

2. конспект необходимых методик;

3. список реактивов и оборудования;

4. краткое описание хода работы;

5. рисунки препаратов;

6. обработка данных в виде схем и заполненных таблиц;

7. выводы;

8. литература.

Тема 1. Техника микроскопирования (1 ч)

Работа 1. Устройство и работа микроскопа

Биологические микроскопы «Биолам Р-11» - «Биолам Р-17» (рабочие), «Биолам С-13» (студенческие), «Биолам Д-11» - «Биолам Д-13» (дорожные) предназначены для исследования прозрачных препаратов в проходящем свете в светлом поле при учебных и лабораторных работах.

Рис. 1. Микроскоп «Биолам РIV4.2»:

1 – основание микроскопа; 2 – коробка с механизмом микрометрической фокусировки; 3 – микрометрический винт; 4 – предметный столик; 5, 6 – винты для перемещения столика; 7 – тубусодержатель; 8 – макрометрический винт; 9 – головка; 10 – насадка монокулярная (тубус с окуляром); 11 – винт для крепления насадки; 12 – револьвер с объективами; 13 – винт, фокусирующий револьвер относительно оси тубуса; 14, 15 – кронштейн кондерсора и его рукоятка; 16 – конденсор с ирисовой диафрагмой; 17 – винт для крепления конденсора; 18 – дополнительная линза; 19 – зеркало

В микроскопах различают две части – механическую и оптическую (рис. 1).

К механической части относятся штатив с предметным столиком и тубус.

Оптическая часть включает две системы: осветительную (зеркало, конденсор с ирисовой апертурной диафрагмой и откидной линзой) и наблюдательную (объектив и окуляр).

Зеркало при больших увеличениях повернуто к свету плоской стороной.

Конденсор состоит из двух линз, которые собирают параллельные лучи света, отраженные от зеркала, в пучок в плоскости препарата. Ирисовая диафрагма предназначена для регулирования интенсивности освещения.

Объектив – система линз в металлической оправе. Увеличение зависит от кривизны фронтальной линзы. Чем больше кривизна фронтальной линзы, тем больше увеличение. Коррекционные линзы объектива компенсируют искажения изображения различного характера.

Увеличение микроскопа определяется произведением увеличений объектива и окуляра. Наибольшее увеличение: 15 х 90 = 1350 раз.

Отчетливость изображения определяется разрешающей способностью. Разрешающая способность микроскопа – это минимальное расстояние между двумя точками наблюдаемого объекта, при котором они не сливаются в одну, а видны раздельно. Предел разрешения светового микроскопа – 0,2 мкм. Повысить разрешающую способность можно двумя путями: либо освещая объект более короткими лучами света (УФЛ), либо увеличивая показатель преломления среды, граничащей с линзой до показателя преломления стекла – при использовании иммерсионных систем.

Работа 2. Правила работы с иммерсионной системой.

Микроскопирование препарата дрожжевых клеток

При использовании иммерсионного (маслянопогруженного) объектива (МИ-90; ОИ-90) достигается увеличение в 900-1350 раз. При этом на препарат наносят кедровое масло, показатель преломления которого близок к показателю преломления стекла, и между конденсором, стеклом и фронтальной линзой устанавливается гомогенная среда.

Ход работы

1. Установить оптимальную освещенность поля, пользуясь осветительным прибором и объективом малого увеличения. Конденсор поднят до упора, ирисовая диафрагма открыта.

2. Установить препарат и рассмотреть его под объективом сухой системы.

3. Прикрыть диафрагму до минимума. Приподнять объектив, сменить его на иммерсионный объектив и нанести каплю кедрового масла на препарат.

4. Погрузить в масло фронтальную линзу объектива, глядя на препарат сбоку.

5. Глядя в окуляр, вращать макровинт на себя до появления объекта в поле зрения.

6. Уточнить фокус микровинтом.

7. Изучить и зарисовать препарат.

8. По окончании работы аккуратно снять иммерсионное масло салфеткой, смоченной в бензине.

Для использования иммерсионной системы в полную силу каплю кедрового масла наносят и на верхнюю линзу конденсора.

Работа 3. Микроскопия в темном поле.

Знакомство с конденсором ОИ-13

Метод основан на освещении объекта косыми лучами света, которые не попадают в объектив, и поэтому поле зрения выглядит черным. Детали препарата частично отражают лучи и становятся видимыми, даже если их диаметр меньше разрешающей способности объектива.

Рис. 2. Схема и рисунок конденсора ОИ-13

Сферическое зеркало 1 и линза-кардиоид 2 склеены и вставлены в оправу 3 конденсора ОИ-13 (рис. 2). Оправа ввернута в цилиндр 4, укрепленный на кольце внутри корпуса 5 конденсора. Конденсор снабжен пружинящим упором и двумя центрировочными винтами 6.

Ход работы

1. Настроить освещение, пользуясь объективом малого увеличения.

2. Установить конденсор темного поля и закрепить стопорным винтом.

3. Нанести на верхнюю линзу конденсора иммерсионную жидкость.

4. Установить препарат на предметном столике. Толщина предметного стекла до 1,2 мм.

5. Поднять конденсор до соприкосновения иммерсионной жидкости с предметным стеклом.

6. Поместить в выходной зрачок объектива х90 диафрагму, снижающую апертуру до 0,85.

7. Сфокусировать микроскоп на объект с эффектом темного поля.

8. Перемещением конденсора добиться минимального размера освещенного пятна.

9. С помощью винтов 6 привести центр зоны с темнопольным эффектом в центр поля микроскопа.

10. Включить объектив с иммерсией и провести наблюдение.