1000 Л – х микробов

х (микроорганизмов в 1 м³)

7. Результаты анализа занести в таблицу:

Место посева	Кол-во колоний на площади чашки Петри	Кол-во микроорганизмов в 1 м^3 воздуха	Выводы

При формулировке выводов воспользоваться таблицей:

Критерии для санитарной оценки воздуха жилых помещений (число микроорганизмов в 1 м3 воздуха) по а.И.Шафиру

Оценка воздуха	Летний режим	Зимний режим
Чистый	Менее 1500	Менее 4500
Грязный	Более 2500	Более 7000

Работа 11. Выделение и количественный учет микроорганизмов почвы методом прямого счета С.Н. Виноградского

Оборудование: почвенные образцы, весы, разновесы, стерильные часовые стекла, ступки, резиновые перчатки, скальпели, пинцеты, колбы с 45 мл стерильной дистиллированной воды, стерильные пипетки на 0,1-0,2 мл, обезжиренные предметные стекла, 5-процентный раствор карболового эритрозина, 100-процентный этиловый спирт, микроскопы с иммерсионной системой, объектив-микрометр.

Ход работы

1. Небольшое количество почвы растирать в течение 10 минут в стерильной ступке пальцем в резиновой перчатке.

2. На стерильном часовом стекле отвесить 5 г почвы и перенести ее в колбу с 45 мл стерильной дистиллированной воды, получая разведение 1:10.

3. Встряхивать колбу 5 минут, отстоять 3-5 секунд и стерильной пипеткой перенести 0,01 мл взвеси на обезжиренное предметное стекло.

4. Распределить мазок по вычерченному заранее квадрату площадью 4 см² стерильной иглой.

5. Мазок высушить, зафиксировать, прокрасить карболовым эритрозином в течение 30 минут.

6. Промыть, высушить препарат.

7. Микроскопировать с полной иммерсионной системой, производя подсчет микроорганизмов.

Подсчет ведут в трех-пяти полях зрения микроскопа (при более точных методиках - в 50-100).

8. Рассчитать количество микроорганизмов в 1 г почвы по формуле:

,

где α – среднее количество микроорганизмов в поле зрения микроскопа, S – площадь мазка (400 мм²), S₁ – площадь поля зрения микроскопа (πr²), 0,01 – капля суспензии для мазка (мл), 5 – навеска почвы (г).

9. Сделать вывод о микрофлоре почвы, опираясь на данные С.Н. Виноградского: бедные почвы – 200-500 млн. бактерий в 1 г почвы; средние – до 1 млрд.; богатые – до 2 млрд. и выше.

Работа 12. Анализ микрофлоры воды из различных источников.

Определение общего микробного числа

Оборудование: пробирки со стерильным МПА (СПА), стерильные чашки Петри, стерильные пипетки на 1 мл, пробирки с 9 мл стерильной воды, спиртовки, пробы воды из разных источников, карандаш по стеклу, шпатель.

Ход работы

1. Соблюдая стерильность, приготовить три разведения пробы: 1:10, 1:100, 1:1000.

2. Разлить МПА (СПА) в чашку Петри.

3. 0,1 мл воды третьего разведения стерильной пипеткой перенести в чашку Петри и разровнять шпателем по поверхности застывшей среды.

4. Через 5-7 дней подсчитать число колоний в чашке Петри и определить количество бактерий в 1 мл воды (умножая на разведение).

5. Данные оформить в таблицу:

Источник воды	Кол-во микроорганизмов в 1 мл воды

6. Определить сапробность зоны водоема, сравнить со следующими нормами:

• олигосапробная – 10 - 1000 бактерий в 1 мл;

• мезосапробная – до 100 000 бактерий в 1 мл;

• полисапробная – до 1 000 000 бактерий и более в 1 мл.

Работа 13. Измерение объектов

Измерять клетки микроорганиз­мов (в мкм) можно на фиксированных и живых препаратах с помощью шкалы окулярного микрометра — окулярной ли­нейки. У кокков определяют диаметр клеток, у бактерий дру­гой формы — длину и ширину.

Оборудование: фиксированные или живые препараты (дрожжи), предметные и покровные стекла, микробиологические петли, окулярная ли­нейка, микроскоп.

Ход работы

1. Вставляют окулярную линейку шкалой вверх на диафрагму окуляра, предварительно вывинтив линзу окуляра.

2. Затем ставят препарат и определяют, скольким делениям линейки соответствует длина и ширина клетки. Измеря­ют не менее 10—20 клеток.

3. Чтобы рассчитать истинные размеры клеток, определяют цену деления окулярной линейки с помощью объектного мик­рометра. Последний представляет собой металлическую плас­тинку в форме предметного стекла с отверстием в центре; в от­верстие помещено стекло с линейкой (шкала из 100 делений). Общая длина шкалы объектного микрометра — 1 мм, величи­на одного деления — 10 мкм (0,01 мм).

4. Для определения цены деления окулярной линейки объ­ектный микрометр помещают вместо препарата на столик микроскопа и фокусируют изображение линейки при малом увеличении. Затем линейку перемешают в центр поля и меня­ют объектив на тот, при котором измеряли клетки. Передвигая столик микроскопа и поворачивая окуляр, устанавливают объ­ектный и окулярный микрометры так, чтобы их шкалы были параллельны и одна перекрывала другую. Определение цены деления окулярного микрометра проводят по принципу нони­уса, т. е. совмещают одну из черт шкалы окулярного микро­метра с чертой объектного микрометра и находят следующее совмещение. Допустим, в двух делениях объектного микромет­ра (20 мкм) умещается пять делений окулярного микрометра, тогда одно деление окулярного микрометра при данном увели­чении равняется 4 мкм (20 : 5). Зная, скольким делениям оку­лярной линейки соответствует длина и ширина изучаемых кле­ток, умножают цену деления окулярного микрометра на эти числа. Полученные значения цены делений окулярной линейки справедливы только для данной системы окуляр — объектив.

Работа 14. Микрофлора слизистой оболочки полости рта и зубного налета

В полости рта обнаруживается более 100 видов микроорганизмов. Среди них дрожжи, стрептококки, стафилококки, крупные палочки, спирохеты, вибрионы и т.д.

Оборудование: спички, спиртовка, предметные стекла, краситель (фуксин или метиленовый синий), микроскоп с иммерсионной системой.

Ход работы

1. Спичкой взять кусочек зубного налета, перенести в каплю воды на предметное стекло, сделать мазок.

2. Мазок зафиксировать и покрасить.

3. Микроскопировать с иммерсионной системой, отмечая разнообразие форм микроорганизмов (рис 5).

4. Зарисовать.

Рис. 5. Микрофлора зубного налета

Работа 15. Микрофлора кожных покровов

Оборудование: пробирки со стерильным МПА (СПА), чашки Петри, микроскоп с иммерсионной системой, краситель.

Ход работы

1. Разлить агар в две чашки Петри.

2. Прикоснуться к застывшей агаровой пластинке одной чашки грязными руками, другой – чистыми.

3. После инкубации в течение 3-5 дней при t = 25-30ºС подсчитать колонии, сделать выводы.

4. Микроскопировать окрашенные мазки разных колоний, выполнить соответствующие рисунки.