Тема 3. Питательные среды, их приготовление, разливка. Получение элективных культур (1 ч)

Работа 8. Получение элективной культуры сенной палочки

(Bacillus subtilis)

Элективными (накопительными) называют культуры, в которых преобладают особи одного вида микроорганизмов, но наряду с ними присутствуют и другие.

Оборудование: ножницы, сено, стерильные конические колбы, вата, мел, электрическая плитка, воронка.

Ход работы

Колбу объемом 500 мл на четверть заполняют мелко нарезанным сеном, доливают водой, добавляют щепотку мела и кипятят 15-20 минут. Отвар фильтруют через вату, вложенную в воронку, в стерильные конические колбы слоем 1-2 см, закрывают ватными пробками. Температура инкубации – 22-25ºС.

Через сутки обнаруживаются подвижные формы Bacillus subtilis (рис. 4а).

В двух-трехсуточной культуре наблюдается пленка из палочек, соединенных в нити (рис. 4б).

В шести-семидневной культуре наблюдается образование спор (рис 4в).

Задание: пронаблюдать и зарисовать цикл развития Bacillus subtilis:

Рис. 4:

а - однодневная культура; б - двухдневная; в - семидневная

Работа 9. Разлив агара

Оборудование: пробирки со стерильным мясо-пептонным или сухим питательным агаром (МПА, СПА), водяная баня, спиртовка, спички, стерильные чашки Петри.

Ход работы

1. Разогреть пробирки с агаром на водяной бане до расплавления.

2. Завернутую в бумагу чашку положить перед собой, бумагу развернуть, за чашкой поместить зажженную спиртовку.

3. Обжечь пробку и горлышко пробирки с МПА, держа ее в правой руке.

4. Левой рукой вынуть ватную пробку, приоткрыть чашку Петри, ввести в нее горлышко пробирки и влить агар.

5. Закрыть чашку и, покачивая ее, распределить агар ровным слоем. Дать застыть.

Тема 4. Экология микроорганизмов. Основы санитарно-бактериологического анализа

(3 ч)

Работа 10. Количественный анализ микроорганизмов воздуха

Для ориентировочного и сравнительного определения загрязненности воздуха пользуются чашечным (седиментационным) методом Коха. Более точен аспирационный метод с помощью аппарата Кротова.

Оборудование: стерильные чашки Петри, МПА (СПА) в пробирках, водяная баня, спиртовка, карандаш по стеклу, микроскоп, термостат.

Ход работы

1. Разлить агар в чашки Петри (Р-9).

2. Открыть чашку в исследуемом помещении на 5 минут.

3. Закрыть чашку и поместить в термостат на 7 дней при t = 23-26ºС. Завернутую в бумагу чашку Петри перевернуть крышкой вниз, чтобы конденсированная влага не стекала на агар.

4. Измерить миллиметровой бумагой радиус чашки Петри и подсчитать площадь по формуле S = πr².

5. Подсчитать число выросших колоний с помощью лупы: а) бактерий; б) грибов.

6. Рассчитать количество микробов в 1 м³ воздуха, пользуясь методикой В.Л. Омелянского.

Пример расчета: по В.Л. Омелянскому, на площадь 100 см² за 5 минут оседает столько микробов, сколько их в трех литрах воздуха

S = πr² = 3,14 4,5² = 63,6 см²

63,6 см² – 43 микроорганизма

100 см² – х микроорганизмов

х (микроорганизмов в трех литрах)

Нам нужно узнать, сколько микробов оседает из 1 м³ воздуха (или из 1000 литров):

3 л – 67 микробов