Закладка элективной культуры азотобактера

1. Приготовить элективную питательную среду указанного состава.

2. Разлить среду в колбы слоем в 1-2 см. Заразить комочком почвы.

3. Закрыть неплотно ватными пробками (аэробные условия).

4. Инкубировать при комнатной температуре в течение 7-10 дней до развития на поверхности жидкости сероватой пленки.

Изучение культуры

1. Приготовить препарат «раздавленная капля» и изучить его, пользуясь объективом х 40. При изучении окрасить на выявление капсулы.

2. Приготовить фиксированный окрашенный препарат. Изучить, пользуясь иммерсионной системой.

При микроскопировании обнаруживаются крупные круглые клетки p. Azotobacter, покрытые слизистой капсулой, часто сдвоенные (рис. 14).

3. Зарисовать наблюдаемые формы.

Рис. 14. Азотобактер:

1 – одиночные и двойные клетки с капсулами; 2 – сарцинная форма капсулой

Изучение клубеньковых азотфиксирующих бактерий p. Rhyzobium

1. Выполнить тонкий срез через клубенек с помощью острой бритвы.

2. Приготовить препарат «раздавленная капля», окрасить фуксином.

3. Микроскопировать, пользуясь объективом х 40.

4. Отжать каплю сока из разрезанного клубенька на предметное стекло.

5. Выполнить мазок, приготовить фиксированный препарат, окрашенный кристаллвиолеттом.

6. Микроскопировать, используя иммерсионную систему.

На препаратах выявляются прямые и изогнутые палочки p. Rhyzobium.

Рис. 15. Клубеньковые бактерии: 1 – фасоли, 2 – клевера

Работа 27. Процесс нитрификации

Оборудование: питательные среды С.Н. Виноградского:

для первой фазы нитрификации:	для второй фазы нитрификации:
вода – 100 мл (NH4)2SO4 – 0,2 г K2HPO4 – 0,1 г MgSO4(·7H2O) – 0,05 г NaCl – 0,2 г FeSO4(·7H2O) – 0,4 г CaCo3 – 0,5 г	вода – 100 мл NaNO2 – 0,1 г Na2CO3 – 0,1 г NaCl – 0,05 г K2HPO4 – 0,05 г MgSO4(·7H2O) – 0,03 г FeSO4(·7H2O) – 0,04 г CaCo3 – 0,5 г

стерильные колбы на 1000150 мл, ватные пробки, мел, почва, реактив «цинк-йод-крахмал», разбавленная серная кислота (1 часть H₂SO₄ + 3 части воды или 1 капля H₂SO₄ на 5 капель воды), H₂SO_4конц, дифениламин, фарфоровая палетка, микроскоп с иммерсионной системой, фуксин, спиртовка, предметные стекла.

Ход работы

Закладка элективных культур первой и второй фаз нитрификации

1. Приготовленные питательные среды разлить в колбы слоем 0,5-1 см.

2. Заразить комочком почвы, закрыть ватной пробкой.

3. Инкубировать в термостате при t = 25-28ºС в течение 15-20 суток.

Изучение первой фазы нитрификации

1. Провести качественную реакцию на присутствие азотистой кислоты: в фарфоровую палетку внести 3 капли цинк-йод-крахмала и 1 каплю разбавленной H₂SO₄, туда же – каплю исследуемой жидкости. В присутствии азотистой кислоты жидкость окрашивается в темно-синий цвет. Реакция идет следующим образом:

ZnCl₂ + ZnY₂ + 2H₂SO₄ = 2ZnSO₄ + 2HCl + 2HY

2HNO₂ + 2HY = 2H₂O + 2NO + Y₂

Йод вступает во взаимодействие с крахмалом.

По интенсивности окраски сделать вывод о содержании азотистой кислоты.

2. Приготовить постоянный препарат культуральной жидкости и изучить его под иммерсионным объективом микроскопа. При изучении выявляются бактерии p. Nitrosomonas в виде овальных палочек.