- •Биотехнология как наука и сфера производства. Предмет, цели и задачи биотехнологии, связь с фундаментальными дисциплинами.
- •Биообъекты как средство производства лечебных, реабилитационных, профилактических и диагностических средств. Классификация и общая характеристика биообъектов.
- •Макробиообъекты животного происхождения. Человек как донор и объект иммунизации. Млекопитающие, птицы, рептилии и др.
- •Биообъекты растительного происхождения. Дикорастущие растения и культуры растительных клеток.
- •Биообъекты - микроорганизмы. Основные группы получаемых биологически активных веществ.
- •Биообъекты - макромолекулы с ферментативной активностью. Использование в биотехнологических процессах.
- •Направления совершенствования биообъектов методами селекции и мутагенеза. Мутагены. Классификация. Характеристика. Механизм их действия.
- •Направления создания новых биообъектов методами генетической инженерии. Основные уровни генетической инженерии. Характеристика.
- •Клеточная инженерия и ее использование в создании микроорганизмов и клеток растений. Метод слияния протопластов.
- •Методы клеточной инженерии применительно к животным клеткам. Гибридомная технология и ее использование в биотехнологических процессах.
- •Инженерная энзимология и повышение эффективности биообъектов. Иммобилизированные биообъекты и их преимущества.
- •Иммобилизация биообъектов. Носители, используемые для иммобилизации.
- •Включение ферментов в волокна
- •Микрокапсулирование биообъектов как один из методов их иммобилизации. Микрокапсулы. Характеристика. Вспомогательные вещества. Виды оболочек.
- •Методы получения микрокапсул. Классификация. Характеристика. Технологические схемы производства.
- •16.Липосомы. Определение. Характеристика. Использование в биотехнологических процессах и для создания инновационных лекарственных форм.
- •17.Слагаемые технологического процесса. Структура биотехнологического производства.
- •Подготовительные стадии
- •Разделение жидкости и биомассы
- •Выделение продуктов биосинтеза
- •Очистка продукта
- •Концентрирование продукта
- •Подготовительные операции при использовании в производстве биообъектов микроуровня.
- •Питательные среды. Классификация. Компоненты питательных сред. Методы стерилизации.
- •20. Очистка и стерилизация технологического воздуха. Схема подготовки потока воздуха, подаваемого в ферментатор.
- •23.Характеристика биопроцессов в зависимости от целевых продуктов: первичные и вторичные метаболиты, биомасса как целевой продукт.
- •24.3Начение асептики в биотехнологических процессах. Методы стерилизации, используемые в биотехнологическом производстве.
- •25.Аппаратурное оснащение процессов выделения и очистки продуктов микробного синтеза.
- •Брожение как разновидность биологического окисления. Спиртовое брожение
- •Получение спирта и других продуктов брожения с использованием микробиотехнологическихпроцессов.
- •32.Ферменты, используемые в генетической инженерии (рестриктазы, лигазы). Генетические маркеры.
- •Механизмы регуляции биосинтеза первичных метаболитов.
- •Биологические, физико-химические и другие методы рекуперации и обезвреживания выбросов в атмосферу.
- •Инсулин. Источники получения. Рекомбинантный инсулин человека. Синтез а- и в- цепей. Биотехнологическое производство рекомбинантного инсулина.
- •Гормон роста человека. Механизм биологической активности и перспективы применения в медицинской практике. Конструирование продуцентов. Получение соматотропина.
- •Производство ферментных препаратов. Ферменты, используемые как лекарственные средства. Традиционные способы получения ферментных препаратов.
- •Микроорганизмы прокариоты - продуценты витамина в12 (пропионово-кислые бактерии и др.). Схема биосинтеза. Регуляция биосинтеза.
- •Производство моноклональных антител и использование соматических гибридов животных клеток. Гибридомы. Этапы производства моноклональных антител.
- •Подготовительные этапы перед проведением слияния
- •Слияние
- •Клонирование гибридомных клеток
- •Вакцины на основе рекомбинантных протективных антигенов и живых гибридных носителей. Технологические схемы производства вакцин и сывороток.
- •Области применения моноклональных антител. Характеристика.
- •Культуры растительных клеток. Методы культивирования. Лекарственные препараты, получаемые из каллусных и суспензионных культур.
- •Культуры животных клеток. Методы культивирования.
- •51.Антибиотики как биотехнологические продукты. Биологическая роль антибиотиков как вторичных метаболитов. Пути создания высокоактивных продуктов антибиотиков.
- •Биомедицинские технологии. Определение. Характеристика.
- •Препараты биогенных стимуляторов. Характеристика. Классификация. Технологические схемы производств.
- •Препараты из животного сырья. Характеристика. Классификация. Технологические схемы производства.
- •Краткая история развития биотехнологии и периоды развития биотехнологии. Характеристика. Биотехнология лекарственных средств.
- •Области применения моноклональных антител. Методы анализа, основанные на использовании моноклональных (поликлональных) антител.
- •Ферменты, используемые в генетической инженерии. Последовательность операций при включении чужеродного гена в векторную плазмиду. Перенос вектора с чужеродным геном в микробную клетку.
- •Цикл развития каллусных клеток, понятие дифферинцировки и дедифференцировки в основе каллусогенеза. Тотипотентность и ее значение.
- •Характеристика каллусных и суспензионных культур тканей растений. Понятие физиологической асинхронности и физиологической гетерогенности.
- •Синтез вторичных метаболитов с использованием культуры клеток и тканей растений.
- •Иммунобиотехнология. Диагностикумы, аллергены, бактериофаги, токсины и анотоксины. Характеристика и способы получения.
- •Нормофлоры (пробиотики, микробиотики, эубиотики) - препараты на основе живых культур микроорганизмов-симбионтов. Характеристика. Резидентная микрофлора жкт, причины дисбактериоза.
- •Протеомика и геномика. Характеристика. Значение для целей фармации.
- •Контроль и управление биотехнологическими процессами. Контроль основных параметров процесса (состав технологических растворов, газов, рН среды и т.Д.).
- •Промышленные способы получения антибиотиков (общая схема).
- •Биомедицинские технологии. «Антисмысловые» нуклеиновые кислоты, пептидные факторы роста тканей и др. Биологические продукты новых поколений. Перспективы практического применения.
- •Пептидные факторы роста тканей
- •Интерлейкины. Механизм биологической активности. Перспективы практического применения.
- •Биополимеры, характеристика, микробиологический метод получения.
- •Жирорастворимые витамины (эргостерин и витамины группы д). Продуценты и схема биосинтеза.
- •Каротиноиды и их классификация. Схема биосинтеза. Образование из каротина витамина а.
- •Проблемы трансформации стероидных структур. Микробиологический синтез гидрокортизона.
- •Фитогормоны, классификация, характеристика. Индукторы митотического цикла.
- •79.Иммуносупрессоры. Циклоспорин а-ингибитор иммунного ответа кальций нейрина. Применение втрансплантологии. Новые иммуносупрессоры природного присхождения.
-
Характеристика каллусных и суспензионных культур тканей растений. Понятие физиологической асинхронности и физиологической гетерогенности.
Каллус — неорганизованная, пролиферирующая масса дифференцированных растительных клеток.
Метод культур тканей, или микроразмножение in vitro исключительно удобен для быстрого размножения и сохранения здоровых растений. Для этого производят отбор соответствующих эксплантов, подвергают стерилизации с последующим переносом на подходящую питательную среду. Качество эксплантов зависит от вида и фазы развития растения; органа, из которого взят эксплант; сезона года. Установлено, что меристемные ткани, сердцевина луковиц, клубнелуковиц и корневищ, надежно защищен-ные листьями и чешуйками, являются стерильными. Перед удале-нием покрывающих структур их каждый раз протирают 70% этанолом. Открытые органы — источники эксплантов подвергают стерилизации ртуть- или хлорсодержащими агентами.
Самая длительная стерилизация по времени не превышает 40 минут, в других случаях время заметно меньше. В усредненном варианте и применительно к различным культурам растительных тканей, наряду с этанолом (70–95%), рекомендуют еще серебра нитрат (1%), бензалконий хлорид (0,01— 0,1%) с длительностью экспозиции 0,1—5; 5—30 и 5—20 минут соответственно.
Экспланты (за исключением материала из надземных частей растений) целесообразно промывать в растворах неионогенных ПАВ перед обработкой дезинфектантом. После этого ткань тщательно промывают водопроводной водой в течение 10—30 минут, а затем погружают в раствор дезинфектанта и нерезко взбалты-вают в течение отведенного времени. После стерилизации расти-тельный биообъект трижды промывают свежими порциями стерильной дистиллированной воды.
Стерилизующий эффект можно повысить следующими проце-дурами: проведением стерилизации под вакуумом для удаления пузырьков воздуха; помещением материала в 70% этанол до того, как обработать раствором другого дезинфектанта; использованием таких увлажняющих агентов как твин 80 или твин 20 в виде добавок к растворам дезинфектантов для снижения поверхностного натя-жения и обеспечения более полного контакта дезинфектанта с .материалом.
В последние годы все чаще применяют специальные емкости (сосуды) для изоляции в асептических условиях органов из молодых растений. Мембранные наборы могут быть использованы при культивировании протопластов, в соматическом эмбриогенезе, при получении культур цветов и в других направлениях.
С применением мембран существенно ускоряется рост в сравнении с агаризованной средой, лучше удается освобождать культуры от ингибирующего влияния фенольных веществ, выделяющихся в среду, а также предохранять клеточную линию от существенных повреждений при изучении метаболитов, продуцируемых культурами, и др. Таким путем удается уменьшить расход материалов и, как следствие, снизить цены, поскольку культуры могут поддерживаться в течение длительного времени без замены культуральных контейнеров. Ингредиенты (продукты) для культивирования растительных тканей должны производиться в соответствии с требованиями СМР. Этим гарантируется их высокое качество. Пригодность ингредиентов сред, обеспечивающих рост тканевых культур, оценивают, как минимум, на трех клеточных линиях в 1—3-х пассажах. Избранные основные среды дополняют углеводами, витаминами, регуляторами роста (в зависимости от используемой клеточной линии).
Питательные среды стерилизуют обычно в автоклавах. В принципе желательна стерилизация автоклавированием (1200С) небольщих объемов питательных сред, поскольку многие ингредиенты разрушаются при более продолжительном нагрева-нии и давлении. Установлено, что температура выше 1200С может быть причиной нарушения качества сред, и, как следствие, плохого роста культур.
Некоторые ингредиенты в растворенном виде стерилизуют фильтрованием (через фильтры с порами 0,22 мкм в диаметре) и в виде стерильных растворов вносят в приготовленные среды перед их использованием. Питателъные среды по своему составу достаточно разнообразны, однако в какой-то мере они и однообразны. В частности, их компоненты можно подразделить на 3 группы: источники органического углерода (чаще — сахароза), неоргани-ческие соли (включая источники азота) и стимуляторы роста. К числу последних относятся некоторые витамины комплекса В и растительные гормоны — цитокинины и ауксины. Почти универ-сальной средой для клеток различных видов является среда М5 Т. Мурасиге и Ф. Скуга (см. главу 4). Тем не менее, при работе с разными растительными объектами необходим специальный под-бор ингредиентов сред для достижения поставленных целей. Пи-тательные среды могут быть плотными за счет внесения 0,7—1% агар-агара ижидкими. Показано,например,чтодлямикрокультуры ананасов предпочтителънее жидкие среды.
Микроразмножение in vitro можно осуществлять из существующих в растении тканей меристемного типа (зародыш, верхушка основного побега) или позже образующиеся пазушные побеги, равно как и из дополнительных меристематических тканей (точки роста, эмбриоиды) изолированных органов растений, где они формируются непосредственно в родительской ткани; из промежуточного каллуса или клеток суспензионных культур.