3. При проведении заключительной части учебного занятия.

Решите тесты входного контроля с 1-10 и ситуационные задачи 1-14.

Решите предложенные ситуационные задачи выходного контроля. Поясните смысл результатов своей работы по решению задач.

Выслушайте преподавателя о предстоящей Вашей работе на следующем занятии. Приведите в порядок Ваше рабочее место. Попрощайтесь с преподавателем.

Методические рекомендации к практическому занятию №3

1. Регистрация мембранного потенциала одиночного мышечного волокна скелетной мышцы лягушки.

В состоянии покоя между наружной и внутренней поверхностью мембраны клетки существует разность потенциалов, которая получила название мембранного потенциала. Для измерения величины мембранного потенциала внутрь клетки вводят микроэлектрод и с помощью усилителя постоянного тока регистрируют разность потенциалов между внутренней частью клетки и окружающими тканями. При этом о существовании разности потенциалов свидетельствует скачок потенциала, возникающий в момент прокола микроэлектродом мембраны клетки. Этот скачок потенциала вызывает смещение луча осциллографа от изоэлектрической линии.

Оборудование:усилитель постоянного тока с катодным повторителем, осциллограф, заполненные 3М растворомKClстеклянные микроэлектроды с диаметром кончика 0,6-0,7 мкм, микроманипулятор, неполяризующийся электрод, камера из органического стекла для помещения и фиксации препарата, набор препаровальных инструментов, раствор кураре 1%, раствор Рингера.

Объект исследования: лягушка.

Ход работы:готовят нервно-мышечный препарат. Мышцу, чтобы понизить е возбудимость, опускают в р-р кураре. Если этого не сделать, то мышца в момент введения электрода сократится, и хрупкий электрод сломается.

После кураризации препарат закрепляют на маленьком столике и помещают в ванночку с р-ом Рингера. Укрепляют выносной катодный повторитель на микроманипуляторе. Фиксируют электрод в держателе катодного повторителя и через специальный агар-агаровый мостик соединяют электролит, заполняющий микроэлектрод, со входом катодного повторителя. Индифферентный неполяризующийся электрод располагают на поверхности препарата. С помощью микроманипулятора подводят электрод к препарату и легким отрывистым движением погружают его в одно из поверхностных мышечных волокон. В момент прокола мембраны наблюдается скачок на экране осциллографа на величину, соответствующую значению мембранного потенциала. Сравнивая величину этого потенциал с калибровочным сигналом, определяют величину мембранного потенциала в милливольтах.

Рекомендации по оформлению протокола работы: зарисуйте кривую, наблюдаемую на экране осциллографа в момент проникновения микроэлектрода в клетку, и обозначьте на ней интервал, характеризующий мембранный потенциал. Обсудите природу мембранного потенциала.

2. Регистрация потенциала действия от мышечного волокна скелетной мышцы лягушки при внутриклеточном отведении.

При действии на возбудимую ткань раздражителя пороговой силы возникает возбуждение, которое сопровождается изменением мембранного потенциала. Такое изменение мембранного потенциала при возбуждении получило получило название потенциала действия.

Оборудование:установка для микроэлектродных исследований, микроманипулятор, влажная камера, набор препаровальных инструментов, заполненные 3М растворомKClстеклянные микроэлектроды.

Объект исследования: лягушка.

Ход работы.Готовят нервно-мышечный препарат, помещают его во влажную камеру, фиксируя мышцу в растянутом состоянии. Закрепление микроэлектрода на катодном повторителе осуществляют так же, как описано в предыдущей работе. Вводят микроэлектрод внутрь волокна, ориентируясь на возникновение скачка потенциала. После того, как электрод будет введен волокно, переводят осциллограф в ждущий режим работы. Все это необходимо для того, чтобы иметь возможность следить за появлением скачка потенциала при проколе микроэлектродом мембраны мышечного волокна. Подают импульс синхронизации от стимулятора на вход «внешнего запуска» осциллографа. Помещают двигательный нерв на стимулирующие электроды и подключают их к выходу стимулятора. Нанося на нерв вначале одиночные, а затем ритмические стимулы, подбирают их амплитуду и наблюдают на экране осциллографа возникающие потенциалы. Меняя частоту стимуляции, следят за характером наступающих при этом изменений.

Рекомендации по оформлению протокола работы: запишите в протоколе опыта наблюдаемые на экране осциллографа изменения. Обозначьте фазы потенциала действия.