- •49 01 01 “Технология хранения и переработки растительного сырья”
- •49 01 02 “Технология хранения и переработки животного сырья”
- •91 0101 “Производство продуктов и организация общественного
- •Содержание
- •Общие указания к методике выполнения и защиты лабораторных работ
- •Цветные реакции на белки
- •Биуретовая реакция
- •Нингидриновая реакция
- •Ксантопротеиновая реакция
- •Реакция Адамкевича
- •Реакция Фоля
- •Физико-химические свойства белков
- •Определение изоэлектрической точки белков
- •Высаливание белков сульфатом аммония
- •Необратимое осаждение белков
- •Осаждение белков органическими веществами
- •Денатурация белков при нагревании
- •Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами
- •Осаждение белков органическими кислотами
- •Осаждение белков солями тяжелых металлов
- •Разделение и очистка белков методом диализа
- •Методы определения азота в биологических объектах
- •Количественное определение общего азота по методу Кьельдаля
- •Определение различных форм азота в молоке и сыре
- •Метод определения общего количества азота в сыре
- •Метод определения общего количества растворимого азота
- •Метод определения азотосодержащих небелковых соединений
- •Метод определения аминного азота (пептиды, аминокислоты, амиды, аммиак)
- •Определение белка в молоке по Лоури
- •Определение влажности весовым методом
- •Метод высушивания до постоянной массы
- •Определение влажности ускоренным методом высушивания
- •Определение влажности экспрессным методом высушивания
- •Нуклеопротеиды
- •Гидролиз нуклепротеидов дрожжей
- •Список используемых источников
- •Приложение а
- •Значение рК для ионизируемых групп в аминокислотах
- •Приложение б
- •Методики приготовления реактивов
Приложение б
(справочное)
Методики приготовления реактивов
Разбавленный раствор яичного альбумина. Белок одного куриного яйца, отделенный от желтка, хорошо взбивают и смешивают в колбе при встряхивании с десятикратным объемом воды. Раствор фильтруют через двойной слой смоченной водой марли, помещенный в воронку.
Раствор растительного альбумина. 25 г пшеничной муки смешивают со 100 мл воды и встряхивают в течение часа с помощью встряхивателя. Взвесь муки центрифугируют. Прозрачный центрифугат содержит преимущественно альбумин.
Раствор глиоксиловой кислоты. К 2 г Мgв порошке, слегка увлажненному, приливают при охлаждении 50 мл заранее охлажденного до 00С насыщенного раствора щавелевой кислоты. Осадок оксалата магния растворяют, отфильтровывают и промывают небольшой порцией воды. Фильтрат подкисляют уксусной кислотой и доводят водой до объема 200 мл. Раствор хранят в холодильнике.
Раствор яичного альбумина. Белки куриных яиц отделяют от желтков, смешивают с 15–20 кратным объемом воды и фильтруют через несколько слоев марли.
Раствор яичного белка, содержащего альбумины, глобулины и сульфат аммония. Белки из трех куриных яиц отделяют от желтков, смешивают с 700 мл дистиллированной воды и 300 мл насыщенного раствора сернокислого аммония и отфильтровывают через несколько слоев марли.
Смешанный индикатор Гроака. Отвешивают 0,14 г метилового красного и 0,07 г метилового синего и растворяют в 150 мл 95% -ного этилового спирта.
Титрованный 0,02н раствор серной кислоты с индикатором Гроака и борной кислотой. 6 мл серной кислоты (относительная плотность 1,84) и 30 мл индикатора Гроака (см. приложение Б, п.6) растворяют в 10 л воды. К этому раствору добавляют 60 г борной кислоты.
Определение поправки на нормальность раствора серной кислоты: 1,9064 г пе рекристаллизованной буры растворяют в 100 мл воды и 20 мл полученного 0,1н раствора разбавляют водой до 100 мл в мерной колбе. 10 мл точно 0,02н раствора буры титруют раствором серной кислоты (в трех повторностях) и определяют поправку к нормальности серной кислоты путем отношения объемов 0,02н растворов буры и серной кислоты.
Селеновый катализатор. В фарфоровой ступке тщательно растирают 100 г К2SО4, 15,64 г СиSО4· 5 Н2О и 1 г металлического селена до однородной смеси.
Метиленовый красный. 0,2 г метиленового красного растворяют в 60 мл 96%-ного этилового спирта и добавляют 40 мл воды.
0,1% раствор белка казеина по Гаммарстену на фосфатном буфере. 3,8 г Na3PO4 . 12H2O растворяют в 80 мл дистиллированной воды при 40оС, добавляют 100 мг казеина по Гаммарстену и после полного растворения последнего устанавливают рН смеси 1н НСI на уровне 6,5; объем раствора доводят дистиллированной водой до 100 мл.
Реактив А. 2 г NaOH и 10 г Na2CO3+ 500 мл дистиллированной воды.
Реактив В. 5 мл 1,1 % раствора К-Na виннокислого + 0,5 мл раствора СиSO4.5H2O.
Реактив С. 50 мл реактива А + 1 мл реактива В. Готовится перед каждой работой.
Реактив Фолина. 10 г Nа2WоО42Н2О (перекристаллизованный) и 2,5 гNа2МоО42Н2О помещают в круглодонную колбу на 200-250 мл, приливают 70 мл воды и хорошо перемешивают. К полученному раствору добавляют 5 мл 85%-ного раствора фосфорной кислоты и 10 мл концентрированной НСI. Колбу на шлифе присоединяют к обратному холодильнику, после чего смесь нагревают при умеренном кипячении в течение 10 часов. После кипячения прибавляют 15 г сернокислого лития (Li2SO4), 5 мл дистиллированной воды, 1 каплю брома (бромной воды). Избыток брома удаляют кипячением под тягой без холодильника в течение 15 мин, после чего жидкость охлаждают и разводят дистиллированной водой до 100 мл, фильтруют через стеклянный фильтр или бумажный, разводят водой с таким расчетом, чтобы получился раствор 1н кислоты. Для этого кислотность реактива определяют предварительно, титруя разведенный в 10 раз реактив 0,1н щелочью в присутствии фенолфталеина до слабо-розовой окраски. Реактив может храниться в темной склянке длительное время. Перед употреблением реактив разводят водой в отношении: 1 часть реактива и 3 части дистиллированной воды.
Молибденовый реактив: 3,75 г молибдата аммония растворяют в 50 мл воды и добавляют 50 мл 32%-ной азотной кислоты ().