Задание 1. Изучить влияние блокаторов некоторых ион-транспортных систем на изменение объема эритроцитов, помещенных в среды с различной осмолярностью

1. Приготовить раствор для промывки эритроцитов (150 мМ NaCl) и раствор для инкубации эритроцитов, содержащий 150 мМ NaCl, 1 мМ KCl, 10 мМ глюкозы).

2. Кровь поместить в центрифужную пробирку и центрифугировать в течение 5 минут при 3000 об\мин.

3. Плазму удалить, а осадок эритроцитов промыть 150 мМ NaCl при тех же условиях центрифугирования.

4. Методом последовательных разведений суспензии эритроцитов добиться соотношения в кювете среда: эритроциты 1:1000.

5. Для сжатия клеток к суспензии клеток добавить 200 мкМ сахарозы, и инкубировать 15 мин при 37⁰С.

6. С помощью спектрофотометра произвести регистрацию изменений оптической плотности суспензии в течение 5 мин при длине волны 800 нм.

7. Поместить эритроциты в гипоосмотическую среду, сохраняя разведение 1:1000. Инкубировать 15 мин при 37⁰С.

8. С помощью спектрофотометра произвести регистрацию изменений оптической плотности суспензии в течение 5 мин при длине волны 800 нм.

9. Провести аналогичные измерения при добавлении в суспензию эритроцитов 3мкМ клотримазола – блокатора Са²⁺-зависимых калиевых каналов, 200 мкМ буметанида – блокатора Na,K,2Cl-котранспорта.

10. Сделать выводы об участии указанных ион-транспортных систем в регуляции объема эритроцитов.

ЗАДАНИЕ2. Исследовать объем-индуцированный Na⁺/H⁺- обмен в эритроцитах потенциометрическим методом

1. Собрать установку для регистрации рН.

2. Приготовить раствор для промывки эритроцитов (150 мМ NaCl) и раствор для инкубации эритроцитов, содержащий 150 мМ NaCl, 1 мМ KCl, 10 мМ глюкозы).

3. Кровь поместить в центрифужную пробирку и центрифугировать в течение 5 минут при 3000 об\мин.

4. Плазму удалить, а осадок эритроцитов промыть 150 мМ NaCl при тех же условиях центрифугирования.

5. В термостатируемую кювету налить 4 мл раствора для инкубации эритроцитов и добавить 1 мл осажденных (упакованных) эритроцитов.

6. Кювету поместить на магнитную мешалку.

7. Через 5 минут инкубирования при постоянном помешивании к суспензии добавить 0,5 мл 2 М раствора сахарозы и регистрировать рН через каждые 20-30 секунд в течение 30 мин.

8. Полученные результаты представить графически: по оси Х отложить время (сек. ), по оси Y – рН суспензии.

9. На основании полученной двухфазной кривой определить скорость закисления суспензии. Это и будет скорость Na⁺/H⁺ - обменника.

Вопросы для самоконтроля

1) Факторы, оказывающие влияние на объем клеток.

2) Роль Na/H-обменника в эритроцитах.

Тема 4. Вискозиметрия: использование для определения вязкости различных жидкостей

Цель:определить величины относительной, удельной и приведенной вязкости исследуемых растворов.

Материалы и оборудование: секундомер, водные растворы неорганических солей, водные растворы сахарозы, пробирки, пипетки, мерные колбы, фильтровальная бумага, стеклянный капиллярный вискозиметр.

Вопросы для самоподготовки:

1) Вязкость как внутреннее трение жидкости.

2) Методы измерения вязкости.

3) Вязкость крови и факторы, влияющие на нее.