Подтверждающие исследования

Фармакологические

пробы

СФ

ГЖХ

Химические

реакции

Реакции

окрашивания

МКС

Реакции

осаждения

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

При выполнении общего (ненаправленного) анализа на группу веществ, изолируемых полярными растворителями, ТСХ - скрининг в общих и частных системах растворителей проводится раздельно для веществ кислого и слабоосновного характера и для веществ основного характера.

Рассмотрим систему ТСХ- скрининга лекарственных веществ, разработанную Г.М. Родионовой ( Московская медицинская академия).

9.2. Исследования веществ кислотного и слабоосновного характера в общих системах растворителей.

Условия анализа:

1.Подвижная фаза - ацетон: хлороформ = 1: 9.

2. Неподвижная фаза - закрепленный слой силикагеля КСК на стеклянных пластинах 912 см (в отдельных случаях «Силуфол»).

3. Высота подъема фронта растворителя 10 см.

4. Время насыщения камеры 15-20 мин.

Схема разметки пластинки.

Пластинка условно делится на 4 горизонтальные зоны по анализируемым соединениям (А, Б, В, Г) и 3 вертикальные зоны по значениям Rf отдельных групп соединений.

Зона А - наносим растворы метчиков (амидопирин, барбамил).

Зона Б - 1/25 экстракта из кислой среды (для качественного анализа).

Зона В - стандарт (циклобарбитал) для расчета значений R_st.

Зона Г - 1/10 экстракта из кислой среды (используется после элюирования в частных системах).

После хроматографирования исследуемые соединения распределяются по вертикальным зонам следующим образом:

I зона - амидопирин, антипирин, кофеин (R_f=0-0,25).

II зона - фенобарбитал, барбитал, нитразепам, барбамил, этаминал-натрий, циклобарбитал, бутобарбитал (R_f=0,31-0,41).

III зона - диазепам (R_f=0,41-0,64).

Обнаружение соединений на хроматограмме проводится путем последовательной обработки слоя сорбента зон А, Б, В, (при закрытой зоне Г) следующими реактивами:

 0,1% раствор ДФК в CHCl₃ и 5% раствор HgSO₄ - обнаруживаются производные барбитуровой кислоты (красно-фиолетовые пятна).

 10% FeCl₃ - производные пиразолона: антипирин - красно-оранжевое окрашивание, амидопирин - сине-фиолетовое.

 реактив Драгендорфа по Мунье и 10% раствор H₂SO₄ (для повышения чувствительности): антипирин, амидопирин - оранжевое, кофеин - оранжево-коричневое, нитразепам, диазепам - оранжево- желтое.

Рассчитывают R_st.

Слой сорбента из зоны Г, расположенный параллельно окрашенному пятну в зоне Б, снимают и экстрагируют метанолом (зона I) или ацетоном (зона 2,3). Экстракты хроматографируют в частных системах растворителей.

9.3. ТСХ-скрининг веществ кислотного характера в частных системах растворителей.

Схема нанесения соединений на хроматограмму при исследовании в частных системах:

Зона А и Б - метчики (вещества, входящие в исследуемую зону).

Один метчик - циклобарбитал.

Зона В - элюат из зоны Г, полученный при анализе в общих системах.

Соединения I зоны:

1. Подвижная фаза - ацетон: циклогексан=5:1.

2. Сорбент - незакрепленный слой основного оксида алюминия на стеклянной пластинке 912.

3. Реагент - 10% раствор FeCl₃ на антипирин и амидопирин.

Соединения II зоны:

1. Подвижная фаза-хлороформ: н-бутанол : 25% NH₄OH=70:40:5.

2. Сорбент - силикагель КСК, забуференный 0,1н раствором H₃BO₃, закрепленный на стеклянной пластинке 912.

3. Реагенты: 0,1% раствор ДФК (дифенилкарбазон) и 5% раствор HgSO₄ - на барбитураты.

Обнаружение нитразепама  – гидролиз на пластинке (6н HCl, 140⁰C, 40 минут) с последующим образованием азокрасителя с - нафтолом.

Соединения III зоны:

1.Подвижная фаза-этилацетат: бензол: этанол: 25% раствор NH₃ = 95:15:5:2,5.

2. Сорбент - силикагель КСК, закрепленный на стеклянных пластинках 912.

3. Реактив Драгендорфа.

Рассчитывают R_st.