13.2. Методы обнаружения и количественного определения монооксида углерода.
Обнаружение СО в крови проводят непосредственно, без предварительного изолирования. Используют спектроскопические, спектрофотометрические, газохроматографические, химические и другие методы.
Спектрофотометрический метод обнаружения монооксида углерода в крови.
В крови лиц, отравленных СО, имеются как окси, так и карбоксигемоглобин. Кровь разбавляют до тех пор, пока раствор приобретет светло-розовую окраску.
Спектр оксигемоглобина имеет две полосы поглощения: 577-589 и 536-556 нм; карбоксигемоглобина - при 564-579 и 523-546 нм. При добавлении (NH4)2S или Na2S2O4 (дитионит) оксигемоглобин превращается в дезоксигемоглобин, который имеет одну полосу - 546-596 нм. Карбоксигемоглобин не восстанавливается при добавлении сульфида аммония или дитионита и полосы поглощения карбоксигемоглобина не исчезают. Для обнаружения COHb в крови спектофотометрическим методом снимают спектр поглощения крови, разбавленной и обработанной дитионитом. При наличии COHb в крови – в спектре поглощения наблюдаются 2 максимума, при отсутствии COHb – один максимум. Метод малочувствителен, применяется при содержании 10-30% COHb.
Химические методы обнаружения СО в крови.
Эти методы основаны на том, что кровь, содержащая COHb, не изменяет свою окраску от прибавления определенных реактивов, а не содержащая COHb - изменяет окраску.
1. Проба Гоппе-Зейлера (после прибавления 30% NaOН кровь с COHb остается красной, а не содержащая COHb - буреет).
2. Проба Бюркера (при добавлении K3[Fe(CN)6] кровь, не содержащая COHb, становится желтой).
3. Проба Залесского (реакция с CuSO4: кровь, не содержащая HbCO, становится зеленой).
4. Проба Либмана (при добавлении 40% раствора формальдегида появляется коричнево-черная окраска).
Количественное спектрофотометрическое определение COHb.
Определение COHb состоит в том, что измеряют оптическую плотность разбавленной и обработанной дитионитом анализируемой крови при 538 нм (А1) и 550 нм (А2), затем насыщают кровь монооксидом углерода ( переводят все формы гемоглобина в COHb) и измеряют А при 538 нм (А3). ). Расчет HbCO проводят по формуле
Насыщение крови монооксидом углерода проводят в два этапа:
Первый этап - пропускают СО в течение 15 минут. Второй этап - прибавляют дитионит и еще 5 минут пропускают СО, т.к. в крови остается метгемоглобин, который переводят в дезоксигемоглобин (прибавлением дитионита), а затем в HbCO. Метгемоглобин более прочно связан с кислородом (в метгемоглобине Fe3+, а в оксигемоглобине и гемоглобине - Fe2+).
Известны и другие методики спектрофотометрического определения COHb, отличающиеся аналитическими длинами волн и формулами расчета COHb.
Газохроматографическое определение СО.
Кровь, содержащую СО, нагревают, пары собирают и вводят в хроматограф. СО восстанавливается в присутствии катализатора (Ni) в CH4, который регистрируют детектором (ДИП).
Наиболее надежным диагностическим признаком отравления СО являются результаты судебно-химического исследования.
Физиологическая норма содержания СOHb в крови - 1,5-3%, верхняя граница нормы - 10%.
10-20% - легкая головная боль;
20-30% - головная боль, ощущение пульса в висках;
30-40% - сильная головная боль, слабость, тошнота, рвота;
40-50% - то же, учащение дыхания и пульса;
50-60% - учащение дыхания, пульса, судороги;
60-70% - то же, ослабление дыхания и сердечной деятельности;
70-80% - слабый пульс, остановка дыхания и смерть.
Такое соответствие между концентрацией HbCО и тяжестью отравления имеется не всегда. Эти данные приблизительны. Тяжесть отравления зависит от внешних условий (давление, влажность воздуха, температура) и особенностей организма (возраст, пол).
Оказание первой помощи: вынести на свежий воздух, искусственное дыхание.