Министерство здравоохранения Республики Беларусь Витебский государственный медицинский университет Кафедра микробиологии

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

по общей микробиологии для студентов II курса стоматологического факультета

Витебск

2002 г.

УДК ___________

ББК ___________

М ___

Рецензенты: профессор кафедры инфекционных болезней ВГМУ М.Л.Доценко; доцент кафедры инфекционных болезней ВГМУ Т.И.Дмитраченко

Генералов И.И. с соавт.

М ___ Методические указания по общей микробиологии для студентов II курса стоматологического факультета / Генералов И.И. с соавт. - Витебск, -

ВГМУ, 2002.- 28 с.

Авторы: Генералов И.И., Железняк Н.В., Данющенкова Н.М., Окулич В.К.

Методические указания разработаны в соответствии с учебным планом для специальности М.02.01.00 «Стоматология» и требованиями к квалификации врача-стоматолога. Предназначены для студентов стоматологических факультетов высших медицинских учебных заведений.

Утверждены и рекомендованы к изданию Центральным учебно-методическим Советом Витебского государственного медицинского университета (Протокол №___ от ___ июня 2002 г .)

УДК ____________

ББК ____________

© Генералов И.И.. с соавт.

© Витебский государственный медицинский университет, 2002

2

ОГЛАВЛЕНИЕ

ЗАНЯТИЕ №1. Устройство и оборудование микробиологической лаборатории. Правила

работы. Систематика и номенклатура микроорганизмов. Морфология бактерий. Микроскопический метод исследования. Простые методы

окраски.	стр. 5
ЗАНЯТИЕ №2. Морфология и структура прокариотов. Сложные
методы окраски.	стр. 6
ЗАНЯТИЕ №3. Морфология и структура прокариотов. Сложные
методы окраски (продолжение).	стр. 7

ЗАНЯТИЕ №4. Морфология и структура прокариотов (спирохеты, риккетсии, хламидии,

микоплазмы). Эукариоты (грибы и простейшие). Выделение чистой

культуры аэробных бактерий (1 день исследования)		стр.8
ЗАНЯТИЕ №5.	Физиология микроорганизмов. Питание, питательные среды. Рост,
размножение, пигментообразование бактерий. Выделение чистой культуры
аэробных микробов (2-й день исследования)		стр.9
ЗАНЯТИЕ №6.	Физиология микроорганизмов. Дыхание бактерий. Ферменты бактерий.
Изучение биохимических свойств чистой культуры выделенных
микроорганизмов		стр.10
ЗАНЯТИЕ №7.	Экология микроорганизмов. Влияние физических, химических и
биологических факторов на микрофлору. Стерилизация. Асептика.
Антисептика. Дезинфекция.		стр.11
ЗАНЯТИЕ №8.	Экология микроорганизмов. Микрофлора тела человека, ее роль.
Санитарно-бактериологическое исследование смыва с рук. Микрофлора
воздуха. Сан.-бактериологическое исследование воздуха		стр.12

3

ЗАНЯТИЕ №9. Экология микроорганизмов. Микрофлора воды, почвы. Санитарно-

бактериологическое исследование воды. Санитарно-бактериологическое

исследование смыва с рук (продолжение).	стр.14
ЗАНЯТИЕ №10. Микробиология полости рта.	стр.16

ЗАНЯТИЕ №11. Иммунитет. Виды иммунитета. Системы иммунитета. Лимфоидная

система. Система мононуклеарных фагоцитов.	стр.17
ЗАНЯТИЕ №12. Иммунитет. Антигены. Реакции иммунитета: механизм. Реакция
агглютинации, пассивной гемагглютинации.	стр.18
ЗАНЯТИЕ №13. Антитела. Реакции нейтрализации, преципитации. Иммунология
ротовой полости.	стр.19

ЗАНЯТИЕ №14. Система комплемента. Реакции иммунитета: гемолиза, бактериолиза,

связывания комплемента. Оценка иммунного статуса. стр. 20

ЗАНЯТИЕ №15. Иммунитет. Динамика иммунного ответа. ИФА, РИА, РИФ. Реакция

Кумбса. стр.22

ЗАНЯТИЕ №16. Иммунопатология. Аллергия. Иммунодефициты. Иммунопрофилактика,

иммунотерапия.		стр.22
ЗАНЯТИЕ №17.	Итоговое занятие по теме "Иммунитет".	стр.23
ЗАНЯТИЕ №18.	Инфекция. Роль микро- и макроорганизма в развитии инфекционного
процесса. Формы взаимодействия микро- и макроорганизма. Виды
инфекций. Биологический метод исследования.		стр.25
ЗАНЯТИЕ №19.	Генетика микроорганизмов. Бактериофагия.	стр.26
Список рекомендуемой литературы		стр.27

4

ЗАНЯТИЕ № 1.

ТЕМА: Устройство и оборудование микробиологической лаборатории. Правила работы. Систематика и номенклатура микроорганизмов. Морфология бактерий. Микроскопический метод исследования. Простые методы окраски.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1.Ознакомиться с правилами работы в микробиологической лаборатории.

2.Знать устройство светового биологического микроскопа.

3.Научиться работать с иммерсионной системой микроскопа.

4. Научиться микроскопировать мазки, ознакомиться с правилами обращения с

культурами микробов, приготовлением мазков, окраска их простым методом.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1.Международная классификация и таксономия микроорганизмов .

2.Основные морфологические формы бактерий.

3.Методы изучения морфологии и структуры бактерий.

4.Этапы приготовления мазков из агаровых и бульонных культур.

5.Назначение простых методов окраски.

6.Правила пользования микроскопом.

7.Иммерсионный объектив, его преимущества.

ЛИТЕРАТУРА:

1.Лекционный материал.

2.Учебник "Микробиология" З.Н. Кочемасова, стр. 16-21.

3.«Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 4-9, 19-23.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

I/ Приготовление мазков из бульонной культуры стафилококка. Окраска метиленовой синью.

2/ Приготовление мазка агаровой культуры кишечной палочки. Окраска фуксином. З/ Микроскопия демонстрационных мазков: стрептококков.

4/ Микроскопия и зарисовка в альбом 3 препаратов.

ПРЕПАРАТ №1	ПРЕПАРАТ №2
Staphylococcus aureus	Escherichia coli
окраска метиленовым синим	окраска фуксином
ПРЕПАРАТ №3
Streptococcus lactis
окраска метиленовым синим

I. Этапы приготовления мазков.

1. Приготовление мазка из агаровой культуры.

а\ На середину обезжиренного предметного стекла нанести петлей ка физиологического раствора.

б\ Внести стерильной петлей в каплю физиологического раствора агаровую культуру.

в\ Равномерно распределить культуру на предметном стекле в виде круга в диаметре 1- 1,5см.

г\ Простерилизовать петлю в пламени.

5

д\ Высушить мазок при комнатной температуре или для ускорения						над	пламенем
спиртовки.
е\ Зафиксировать мазок в пламени.
ж\ Окрасить мазок.
з\ Промыть водой.
и\ Высушить мазок.
к\ Нанести на мазок каплю иммерсионного масла.
л\ Микроскопия мазка.
2. Приготовление мазка из бульонной культуры.
а\ На середину обезжиренного предметного стекла нанести стерильной петлей или
стерильной	пастеровской	пипеткой	каплю	бульонной	культуры	и	равномер
распределить в виде мазка диаметром 1-1,5см. Далее см. выше пункты г-л.

II. Правила работы с иммерсионной системой микроскопа.

1.Поднять конденсор до уровня предметного столика и открыть ирис-диафрагму.

2.Глядя сбоку в верхнюю линзу конденсора, вращаяи зеркало, найти изображение источника света.

3.Установить иммерсионный объектив.

4.На предметный столик поместить препарат с каплей иммерсионного масла и закрепить

препарат клеммами.

5. Под контролем глаза макровинтом опустить тубус до соприкосновения линзы объектива с каплей масла на препарате. Очень осторожно погрузить под контролем глаза линзу в масло, не доводя до соприкосновения со стеклом.

6.Глядя в окуляр, макровинтом медленно поднимать тубус до появления изображения в поле зрения.

7.Вращая микровинт не более, чем на 1/2 оборота, добиться четкого изображения.

8.После просмотра препарата макровинтом поднять тубус, нять препарат, протереть фильтровальной бумагой фронтальную линзу иммерсионного объектива, салфетку положить на предметный столик.

9.Перевести на малое увеличение и опустить тубус до упора.

ЗАНЯТИЕ № 2

ТЕМА: Морфология и структура прокариотов. Сложные методы окраски.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1.Освоить теоретический материал по теме занятия. Знать сущность и назначение сложных методов окраски: по Граму, по Бурри-Гинсу. Иметь представление о принципе люминесцентной микроскопии.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1.Структура бактериальной клетки: обязательные и необязательные структуры.

2.Методы для изучения анатомии бактерий, значение.

3.Оболочка: строение, роль.

4.Принципы и сущность окраски по Граму.

5.Протопласт, сферопласт, L-формы бактерий.

6.Капсула бактерий, роль. Методы выявления капсул.

7.Нуклеоид, роль, методы обнаружения.

8.Принцип люминесцентной микроскопии.

6

ЛИТЕРАТУРА:

1.Лекционный материал.

2.Учебник "Микробиология" З.Н.Кочемасова, 1984 г., стр.22-26.

3.«Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр.6-8, 13-19.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

I/ Приготовление мазков из смеси сарцины и кишечной палочки, окраска по Граму в модификации Синева.

2/ Микроскопия демонстрационных мазков с капсульными бактериями, окраска по БурриГинсу.

З/ Зарисовка двух препаратов
	ПРЕПАРАТ №1	ПРЕПАРАТ №2
	смесь E.coli и Sarcina flava	Капсула у бактерий
	окраска по Граму	окраска по Бурри-Гинсу

4/ Микроскопия препарата, окрашенного акридиновым оранжевым для выявления нуклеоида.

5/ Просмотр слайдов.
Сложные и другие методы окраски:
1. Окраска по Граму.
Наносят	на	фильтровальную	бумагу, пропитанную	карболово-спиртовым

раствором генцианового фиолетового дистиллированную воду на1–2 минуты, снимают фильтрованную бумагу, наносят раствор Люголя на 1–2 минуты, сливают его и наливают пипеткой этиловый спирт на30 секунд. Тщательно промывают водой, докрашивают водным раствором фуксина 1–2 минуты. Промывают и высушивают мазок.

ЗАНЯТИЕ № 3.

ТЕМА: Морфология, структура прокариотов. Сложные методы окраски.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1.Освоить теоретический материал по теме занятия.

2.Продолжить знакомство с морфологией и структурой микроорганизмов .

3.Ознакомиться с техникой окраски по Нейссеру.

4.Ознакомиться с фазово-контрастной микроскопией.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1.Цитоплазма и ее структуры, их назначение.

2.Методы для обнаружения зерен волютина.

3.Споры, условия и механизм образования.

4.Физико-химические особенности спор, значение спорообразования, методы обнаружения спор.

5.Жгутики, строение, роль.

6.Методы изучения подвижности.

7.Пили, их значение.

8.Принцип фазово-контрастной микроскопии.

ЛИТЕРАТУРА:

1.Лекционный материал.

2.Учебник "Микробиология" З.Н. Кочемасова, стр.25, 26-29.

3.«Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр.6-7, 17-19.

7

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

I/ Приготовление мазков из взвеси дрожжей, окраска по Нейссеру.

2/ Приготовление мазков из спорообразующей культуры, окраска генцианвиолетом. З/ Микроскопия демонстрационных мазков со спорами, окраска по Ожешко.

4/ Зарисовка трех препаратов:

	ПРЕПАРАТ №l		ПРЕПАРАТ №2
Зерна волютина в дрожжах			Споры Вас.anthracoides
	окраска по Нейссеру		окраска генцианфиолетовым

ПРЕПАРАТ №3

Споры Вас.anthracoides

окраска по Ожешко

5/ Демонстрация препарата "раздавленная капля" в фазово-контрастном микроскопе для изучения подвижности.

ЗАНЯТИЕ №4.

ТЕМА: Морфология и структура прокариотов(спирохеты, риккетсии, хламидии, микоплазмы). Эукариоты (грибы и простейшие). Выделение чистой культуры аэробных бактерий (1 день исследования).

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1.Знать теоретический материал по теме занятия.

2.Продолжить знакомство с морфологией и структурой микроорганизмов .

3.Знать отличия прокариотов и эукариотов.

4.Овладеть техникой посева петлей на чашку с мясопептонным агаром для получения роста отдельных изолированных колоний.

5.Ознакомиться с устройством термостата.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1.Извитые формы бактерий. Спирохеты, строение, классификация, методы изучения их морфологии.

2.Риккетсии: морфология, структура, особенности физиологии .

3.Хламидии: морфология, структура, циклы развития.

4.Микоплазмы: морфология, особенности строения.

5.Грибы, морфология, строение, классификация.

6.Простейшие, строение, классификация.

ЛИТЕРАТУРА:

1.Лекционный материал.

2.Учебник "Микробиология" З.Н. Кочемасова с соавт., с.32-42.

3.«Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 21-23, 26-29.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1.Изучение и зарисовка демонстрационных препаратов(спирохеты, хламидии, кандиды, плесени, простейшие).

8

ПРЕПАРАТ №1	ПРЕПАРАТ №2
Treponema pallidum	Chlamidia trachomatis
окраска по Романовскому-Гимзе	окраска метиленовым синим
ПРЕПАРАТ №3	ПРЕПАРАТ №4
Candida albicans	Toxoplasma gondii
окраска метиленовым синим	окраска по Романовскому-Гимзе

ПРЕПАРАТ №9

Зарисовать 1 из трёх демонстрационных препаратов грибов родов

Mucor, Aspergillus или PeniciIlium

2.Посев смеси микробов на чашку Петри с МПА для выделения чистой культуры бактерий

3.Оформление протокола по выделению чистой культуры.

ПРОТОКОЛ №1

ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ МИКРООРГАНИЗМОВ

Протокол заполняется на следующих занятиях по ходу выделения чистой культуры.

ЗАНЯТИЕ №5.

ТЕМА: Физиология микроорганизмов. Питание, питательные среды. Рост, размножение, пигментообразование. Выделение чистой культуры аэробных микробов/2-й день исследования/.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1.Знать теоретический материал по теме занятия.

2.Иметь представление о механизме и способах размножения бактерий, о роли пигментообразования.

3.Уметь охарактеризовать колонию /культуральные свойства/.

4.Научиться делать пересев отдельной колонии на скошенный агар.

5.Закрепить практические навыки по приготовлению мазка, простой метод окраски.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1.Химический состав бактериальной клетки

2.Метаболизм бактерий.

3.Механизм питания.

4.Типы питания бактерий.

5.Питательные среды, требования к ним, классификация сред.

9

6.Рост и размножение бактерий, механизм деления.

7.Фазы размножения на жидкой среде.

8.Пигментообразование у бактерий, условия для этого процесса, классификация и значение пигментов.

9.Что такое колонии, по каким признакам проводится характеристика колоний и с какой целью?

10.Методы выделения чистой культуры аэробных бактерий.

11.Выделение чистой культуры аэробных бактерий- 2-й день исследования. Ход исследования.

ЛИТЕРАТУРА:

1.Лекционный материал.

2.Учебник "Микробиология" 3.И. Кочемасова, стр.43-47,51-55.

3.«Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 32-41

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

Второй день выделения чистой культуры. Ход исследования: 1) осмотр посевов, характеристика колоний /культуральные свойства/; 2) приготовление мазков из колоний каждого вида, окраска фуксином, микроскопия /морфологические свойства/; 3) проба с КОН для определения тинкториальных свойств; 4) пересев колоний одного вида на скошенный агар. Продолжение оформления протокола.

ЗАНЯТИЕ № 6.

ТЕМА: Физиология микроорганизмов. Дыхание. Ферменты бактерий. Изучение биохимических свойств чистой культуры.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1.Знать теоретический материал по теме занятия.

2.Иметь представление о биохимической активности бактерий как о дифференциальнодиагностическом признаке при определении вида микроба.

3.Уметь сделать заключение о виде выделенной культуры.

4.Знать об особенностях культивирования анаэробов.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1.Ферменты бактерий. Свойства, классификация.

2.Роль и значение ферментов.

3.Определение сахаролитических свойств, состав сред Гисса.

4.Определение протеолитических свойств.

5.Определение каталазной и оксидазной активности.

6.Дыхание, типы дыхания.

7.Методы культивирования анаэробов.

ЛИТЕРАТУРА:

1.Лекционный материал.

2.Учебник "Микробиология" З.Н. Кочемасова, стр. 47-51.

3.«Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 35, 41-43.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

3 день выделения чистой культуры. Ход исследования: 1/ проверка чистоты выросшей на скошенном агаре чистой культуры/осмотр посевов, приготовление мазка, окраска по Граму/; 2/ изучение биохимических свойств: посев на среду Гисса для

10

выявления сахаролитической активности, в МПБ –протеолитической; 3/ определение каталазной активности (проба с Н202).

4 день выделения чистой культуры. Ход исследования: 1/ учет биохимических свойств по демонстрационным рядам.

В графе "результат" заполнить таблицу - отметить продукты расщепления углеводов: до кислоты - К, до кислоты и газа - КГ, при наличии индола или сероводорода поставить +.

Л	С	Г	М	Мн		МПБ
					H2S		индол

Заключение:

ЗАНЯТИЕ №7.

ТЕМА: Экология микроорганизмов. Влияние физических, химических и биологических факторов на микрофлору. Стерилизация. Асептика. Антисептика. Дезинфекция.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1.Знать теоретический материал по теме занятия.

2.Изучить практическое применение физических, химических и биологических факторов.

3.Знать назначение различных методов стерилизации.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1.Перечислить физические факторы и характеры их действия на микроорганизмы.

2.Стерилизация: определение, физические методы стерилизации ,

3.Влияние химических факторов на микроорганизмы, механизм действия.

4.Химическая, физико-химическая стерилизация, консервация.

5.Асептика, антисептика, дезинфекция. Определение, назначение .

6.Требования, предъявляемые к антисептикам.

7.Влияние биологических факторов. Виды симбиоза.

8.Антагонизм, формы антагонизма.

ЛИТЕРАТУРА:

1.Лекционный материал.

2.Учебник "Микробиология" З.Н. Кочемасова, стр. 71-77.

3.«Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 29-31.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

I/ Учет демонстрационного опыта по действию 1% и 5% растворов карболовой кислоты на микроорганизмы.

Наличие роста отметить знаком +, отсутствие роста отметить знаком (-).

11

Название		Испытуемые растворы и время действия
микроба
	1% р-р карболовой кислоты				5% р-р карболовой кислоты
	5мин.	10мин.	15мин.	20мин	5мин.	10мин.	15мин.	20мин.
Споровая
культура
Неспоровая
культура

ЗАКЛЮЧЕНИЕ:

2/ Демонстрация опыта Бухнера.

З/ Подготовка к стерилизации посуды и питательных сред. 4/ Знакомство с аппаратурой для стерилизации.

ЗАНЯТИЕ №8.

ТЕМА: Экология микроорганизмов. Микрофлора тела человека, ее роль. Санитарнобактериологическое исследование смыва с рук. Микрофлора воздуха. Санитарнобактериологическое исследование воздуха.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1.Знать теоретический материал по теме занятия.

2.Научиться брать смывы с рук и проводить санитарно-бактериологическое исследование для оценки санитарного состояния.

3.Уметь делать посев воздуха методом седиментации и определять микробное число.

4.Знать состав среды Кесслера, Эндо.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1.Понятие об экологии микроорганизмов, задачи.

2.Микробные экосистемы и их компоненты /биоценоз, биотоп/ . Понятие об эковаре.

3.Микрофлора тела человека.

4.Значение нормальной микрофлоры.

5.Дисбактериоз: причины, лечение и профилактика.

6.Санитарно-бактериологическое исследование смыва с : цельрук и методика исследования.

7.Санитарно-показательные микробы: определение, свойства.

8.Микрофлора воздуха.

9.Показатели санитарного состояния воздуха. Методы определения микробного числа.

ЛИТЕРАТУРА:

1.Лекционный материал.

2.Учебник "Микробиология" З.Н. Кочемасова, стр.58, 61-65.

3.«Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 53-54, 193-197.

12

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Санитарно-бактериологическое исследование смыва с . Оформлениерук протокола.

3. Сан. бак. исследование воздуха учебной комнаты. Оформление протокола. Определение микробного числа воздуха делать по демонстрационным чашкам.

День	материал для	ход исследования			Результат
	исследования				исследования
1	воздух	посев на чашку Петри		с	МПА
		методом седиментации в течение 30
		минут, термостат на 24 ч.			выросло Х колоний
		Подсчет выросших колоний
2		Определение	микробного	числаХ умножить на 60
		воздуха по Павловичу
		приготовление	мазков из	разных
		типов колоний, окраска фуксином,
		микроскопия.
Заключение:

13

ЗАНЯТИЕ №9.

ТЕМА: Экология микроорганизмов. Микрофлора воды, почвы. Санитарнобактериологическое исследование смыва с рук/продолжение/. Санитарнобактериологическое исследование воды.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1.Знать теоретический материал по теме занятия.

2.Закончить санитарно-бактериологическое исследование смыва с рук.

	3. Ознакомиться	с методикой			определения общих и термотолерантных и
колиформных бактерий при исследовании воды по демонстрационному материалу.
	Санитарно-бактериологическое				исследование		воды		методом	мембранной
фильтрации.
День	Материал для			Ход исследования					Результат
	исследования								исследования
1	Вода		Фильтрование 3 объемов воды по 100
	водопроводная		мл через мембранные фильтры
			помещение фильтров на среду Эндо и
			выращивание при 370С на 24 ч.
2			Учет	роста	красных	и		розовых
			колоний
			Приготовление		мазков				из
			лактозоположительных				колоний,
			окраска	по	Граму, микроскопия
			(наличие Грпалочек).
			Постановка оксидазного теста
			Посев Гроксидазоотрицательных
			палочек на полужидкую
			лактозопептонную среду.
			Инкубация при 370С и 440С в течение
			24 ч.
			Учет		кислотообразования				и
			газообразования.
			При наличии общих колиформных
			бактерий		определяют		-		термо
			толерантные колиформные			бактери
			(инкубация при 440С в течение 24 ч.).

Заключение:

14

Санитарно-бактериологическое исследование воды титрационным методом.

День	Материал для	Ход исследования	Результат исследования
	исследования		объемы воды, мл
			100	10	1
1	Вода	Посев 9 объемов воды (3 объема по
		100 мл, 3 по 10 и 3 по 1.0 мл) на
		глюкозо-пептонную или
		лактозопептонную среду с
		индикатором Андреде. Посев 100 и
		10 мл во флаконы и пробирки
		соответственно в 10 и 1 мл
		концентрированной среды; посев 1мл
		в пробирку с 9 мл среды обычной
		концентрации. Термостат 37оС на 24
		часа.
		Учет помутнения, кислото- и
2		газообразования. Пересев на среду
		Эндо из всех объемов воды (1 чашка
		для 100 мл, 1-для 10 мл и 1-для 1 мл).
		Термостат 37оС на 24 ч.
		Учет роста красных и розовых
		колоний на среде Эндо
3		Приготовление мазков; окраска по
		Граму, микроскопия (наличие Гр-
		палочек).
		Постановка оксидазного теста.
		(оксидазный тест отрицательный).
		Пересев колоний| с Грпалочками и
		отрицательным оксидазныи тестом
		полужидкую лактозо-пептонную
		среду. Термостат 37оС на 24 ч.
4		Учет кислото- и газообразования.
Количество положительных результатов по таблице:
	Заключение:
	При наличии	общих колиформных бактерий определяют термотолерантные
бактерии (инкубация при 440С в течение 24 часов).

15

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1/ Цель и методика санитарно-бактериологического исследования смыва с рук. 2/ Состав среды Кесслера и Эндо.

З/ Микрофлора воды, источники загрязнения воды. 4/ Показатели санитарного состояния воды.

5/ Методы определения общих и термотолерантных колиформных бактерий. 6/ Микрофлора почвы, показатели санитарного состояния почвы.

ЛИТЕРАТУРА:

1.Лекционный материал.

2.Учебник "Микробиология" 3,Н. Кочемасова, стр. 56-57.

3.«Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 50-52.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

I/ Учет роста на среде Кесслера /газообразование при 440С/.

2/ Дальнейший ход исследования с использованием демонстрационного материала/учет роста красных колоний на среде Эндо, проба с КОН, оксидазный тест/.

З/ Заключение по санитарно-бактериологическому исследованию смыва с рук.

4/ Разбор методов мембранной фильтрации и титрационного метода с использованием демонстрационного материала.

ЗАНЯТИЕ №10.

ТЕМА: Микробиология полости рта.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1.Знать теоретический материал по теме.

2.Ознакомиться с методами изучения нормальной микрофлоры полости рта.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1.Микрофлоры полости рта (аутохтонная, аллохтонная, случайная, их состав).

2.Оральные и другие виды стрептококков, их свойства, патогенетическое значение. Вейлонеллы, нейссерии, лактобактерии, актиномицеты, бактероиды, фузобактерии, лептотрихии, извитые формы бактерий, их патогенетическое значение. Непостоянная микрофлора полости рта.

3.Онтогенез нормальной микрофлоры. Состав микрофлора полости рта в первые часы после рождения до появления зубов и после появления зубов и у лиц престарелого возраста.

4.Микрофлора слюны, спинки языка, зубного налета, зубодесневого кармана.

5.Влияние различных (внешней среды и физиологических) факторов на микрофлору полости рта.

6.Значение нормальной микрофлоры полости рта. Дисбактериоз полости рта.

ЛИТЕРАТУРА:

1.Лекционный материал.

2.Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. Под ред. Л.Б. Борисова и А.Н. Смирновой. - М., 1994.

16

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1.Приготовление мазка из зубного налета, окраска по Граму, микроскопия.

Для приготовления мазка из зубного	налета	на обезжиренное стекло петлей
нанести каплю стерильного физиологического раствораNaCl, деревянной палочкой или
спичкой с поверхности больших коренных зубов	взять	зубной налет и равномерно

распределить в капле физиологического раствора. Высушить, зафиксировать, окрасить.

ПРЕПАРАТ №1

Мазок зубного налета Окраска по Граму

2. Демонстрациия методов изучения нормальной микрофлоры.

ЗАНЯТИЕ №11.

ТЕМА: Иммунитет. Виды иммунитета. Системы иммунитета. Лимфоидная система. Система мононуклеарных фагоцитов.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1.Знать теоретический материал по теме занятия.

2.Уметь в мазках определить феномен розеткообразования Т-лимфоцитов с эритроцитами барана.

3.Уметь оценить и правильно зарисовать мазки с завершенным и незавершенным фагоцитозом.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1.Иммунология. Определение понятия иммунитет.

2.Виды иммунитета: неинфекционный и инфекционный иммунитет .

3.Факторы естественной резистентности организма.

4.Системы иммунитета.

5.Лимфоидная система. Развитие и дифференцировка Т-лимфоцитов.

6.Субпопуляции Т-лимфоцитов, функция.

7.Развитие и дифференцировка В-лимфоцитов, их функция.

8.Система фагоцитов. Фагоцитоз: стадии, завершенный и незавершенный, иммунный и неиммунный фагоцитоз.

ЛИТЕРАТУРА:

1.Лекционный материал.

2.Учебник "Микробиология" З.Н. Кочемасова, стр. 134-137.

3.«Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 69-70.

4.«Медицинская иммунология» Д.К.Новиков с соавт.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

I/ Микроскопия и зарисовка препаратов с розеткообразованием.

17

2/ Микроскопия и зарисовка мазков с завершенным и незавершенным фагоцитозом.

ЗАНЯТИЕ №12.

ТЕМА: Иммунитет. Антигены. Реакции иммунитета: механизм. Реакция агглютинации, пассивной гемагглютинации.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1.Знать теоретический материал по теме занятия.

2.Ознакомиться с методикой постановки реакций агглютинац, пассивнойи гемагглютинации.

3.Знать назначение этих реакций.

4.Знать назначение и получение препаратов: диагностируй, агглютинирующая сыворотка, эритроцитарный диагностику».

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Антигены. Понятие, свойства. Гаптены.

2. Инфекционные антигены: группо-, видо-, типоспецифические, протективные. Антигенная мимикрия.

3.Бактериальные антигены: О, Н, К. Их свойства. Антигенные свойства токсинов, анатоксинов.

4.Неинфекционные антигены.

5.Реакции иммунитета, назначение.

6.Реакция агглютинации: ингредиенты, механизм, назначение .

7.Получение и применение агглютинирующих сывороток и диагностикумов.

8.Реакция непрямой /пассивной/ гемагглютинации. Ингредиенты, получение, назначение.

ЛИТЕРАТУРА:

1.Лекционный материал.

2.Учебник "Микробиология" З.Н. Кочемасова, стр. 142-147.

3.«Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 71-78.

4.«Медицинская иммунология» Д.К.Новиков с соавт., 1998.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

I/ Постановка и учет ориентировочной реакции агглютинации.

2/ Постановка и учет развернутой реакции агглютинации для определения вида микроба.

Ингредиенты		Разведения диагностической сыворотки
	1:1000	1:2000	1:4000	1:8000	1:16000	К
	1	2	3	4	5	6
Физ. раствор	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0
Агглютинирующая	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	-
сыворотка 1:500	Исследуемая культура по 3 капли во все пробирки

Результат

Примечание: Агглютинирующая сыворотка разводится до титра, указанного на этикетке.

18

ЗАКЛЮЧЕНИЕ:

3/ Серологический метод диагностики: учет демонстрационной развернутой реакции агглютинации с оформлением протокола.

Ингредиенты				Разведения сыворотки больного
	1:100			1:200		1:400	1:800	1:1600	К
	1			2		3	4	5	6
Физ. раствор	1,0			1,0		1,0	1,0	1,0	1,0
Сыворотка	1,0			1,0		1,0	1,0	1,0	-
больного 1:50
		Диагностикум по 3 капли во все пробирки
Результат

ЗАКЛЮЧЕНИЕ:

4/ Учет демонстрационной РПГА для серодиагностики.

ингредиенты		Разведения сыворотки больного
	1:20	1:40	1:80	1:1600	К
	1	2	3	4	5
Физ. раствор	0,4	0,4	0,4	0,4	0,4
Сыворотка	0,4	0,4	0,4	0,4	-
больного 1:10
Диагностикум	0,4	0,4	0,4	0,4	0,4
эритроцитарный
Результат
ЗАКЛЮЧЕНИЕ:

ЗАНЯТИЕ №13.

ТЕМА: Антитела. Реакции нейтрализации, преципитации. Иммунология полости рта.

					ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:
Изучить теоретический материал по теме занятия.
Ознакомить		студентов	с	методикой	постановки	реакции	нейтрализации
преципитации.
Разобрать диагностические препараты для реакции нейтрализации и преципитации.
Уметь	оценивать		реакцию	радиальной	иммунодиффузии		для	определен
концентрации секреторного IgA в слюне.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

Антитела: определение, структура иммуноглобулинов. Классы иммуноглобулинов и их свойства.

19

Реакция нейтрализации: ингредиенты и их получение(анатоксин, антитоксическая

сыворотка, экзотоксин), назначение и методы постановки реакции нейтрализации.
Реакция преципитации: цель	постановки, ингредиенты,			их	получение.	Методы
постановки реакции преципитации
Иммунные механизмы в полости рта. Неспецифические факторы защиты.
Защитные механизмы слюны, десневой		жидкости,	фагоцитоз.		Защитная		роль и
свойства эмали зуба.
Специфические факторы	защиты. Роль	антител	и	Т-лимфоцитов		в	защите от

инфекции. Местный иммунитет полости рта. Функции секреторных иммуноглобулинов А.

ЛИТЕРАТУРА:

1.«Медицинская иммунология» Д.К.Новиков с соавт.

2.«Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 78-81.

3.«Медицинская микробиология, вирусология, иммунология.» Под ред. Л.Б. Борисова и А.Н. Смирновой. - М., 1994.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

а/ постановка и учет реакции кольцепреципитации.

Ингредиенты:	1- Вытяжка из пятна крови
	2- Сыворотка, преципитирующая белок человека
	3- Сыворотка, преципитирующая белок курицы

Ход работы: в пробирку №1 внести пипеткой 1 мл сыворотки, преципитирующей белок человека, осторожно по стенке наслоить такое же количество вытяжки. В пробирку №2 внести сыворотку, преципитирующую белок курицы и также наслоить исследуемую вытяжку. Полученный результат зарисовать в альбоме и сделать заключение в виде белка.

б/ демонстрация реакции преципитации в геле для определения токсигенности.

в/ учет реакции определения концентрации секреторногоIgA в слюне методом радиальной иммунодиффузии.

ЗАНЯТИЕ №14.

ТЕМА: Иммунитет. Система комплемента. Реакции иммунитета: гемолиза, бактериолиза, связывания комплемента. Оценка иммунного статуса.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1.Знать теоретический материал по теме занятия.

2.Знать назначение реакций лизиса, связывания комплемента .

3.Иметь представление об ингредиентах, участвующих в этих реакциях

4.Уметь учесть РСК, сделать заключение.

5.Иметь представление о методах оценки иммунного статуса .

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

20