Завдання на виконання:

Завдання №1. Вивчення поглинальної здатності фагоцитів.

1. Одержані мазки дофарбувати фарбою Романовського-Гімзе упродовж 17 хв. Фарбу змити дистильованою водою, мазки підсушували на повітрі.

2. Облік отриманих результатів провести під світловим мікроскопом з використанням імерсійного об’єктиву ×90 і визначити 2 показники: відсоток фагоцитозу (ВФ), тобто відсоток фагоцитувальних клітин (підраховують 100 клітин нейтрофільних лейкоцитів), які поглинули мікробні частки, та фагоцитарне число (ФЧ) за формулою 5.1 (підрахунок проводять на 100 нейтрофілів).

,у.о. , де:

a – кількість клітин, які поглинули 5 – 9 бактеріальних клітин;

b – кількість клітин, які містять 10 – 14 клітин;

c – кількість клітин, в яких кількість бактерій 15 і більше.

Відсоток фагоцитувальних нейтрофілів у здорових людей складає від 47% до 72%, а фагоцитарне число – від 12 до 23.

Завдання №2. Вивчення перетравлювальної здатності фагоцитів.

1. Провести фарбування мазків (лаб. роб. №5): зафіксувати клітини метанолом 1 – 2 хв, нанести 0,1-ий % спиртовий розчин нейтрального червоного індикатора на 20 – 30 хв, змити фарбу дист. водою, підсушити мазок на повітрі.

2. Облік отриманих результатів провести під світловим мікроскопом з використанням імерсійного об’єктиву ×90 і визначити 2 показники: вміст НСТ-позитивних нейтрофілів (з розрахунку на 100 клітин) та розрахувати середній цитохімічний коефіцієнт за формулою 5.2. В полі зору мікроскопа підрахувати 100 –200 клітин нейтрофільних лейкоцитів і визначити відсоток нейтрофілів, які містять в цитоплазмі темпі зерна диформазану та кількість утворених гранул за цитохімічним коефіцієнтом (для спонтанного НСТ-тесту та для стимульованого НСТ-тесту).

3.Оцiнку цитохiмiчної реакції провести загальноприйнятим напiвкiлькiсним методом з визначенням ступеня (0 – 4) забарвлення площі клітин i підрахуванням середнього цитохiмiчного коефiцiєнту (ЦХК).

Реакцію оцінюють за чотирма ступенями в залежності від кількості гранул, що утворились в нейтрофілах: I ступінь – одиничні гранули, II ступінь – гранули займають 1/3 цитоплазми клітини, III ступінь – гранули займають 2/3 цитоплазми клітини, IV ступінь – гранули займають всю цитоплазму клітини. Розрахунок проводять за формулою 5.2:

, у.о. де:

an₊ – кількість клітин, в яких гранули диформазану займають до 25%

цитоплазми;

bn₊₊ – кількість клітин,в яких гранули диформазану займають 25 – 50 %

цитоплазми;

cn₊₊₊ – кількість клітин, в яких 55 – 75% цитоплазми покрито гранулами

диформазану;

dn₊₊₊₊ – кількість клітин, в яких гранули покривають більше 75 % цитоплазми та ядро.

Приклад розрахунку. Відсоток нейтрофілів, що мають у цитоплазмі гранули, дорівнював 10. З них 5 клітин – I ступеня, 7 клітини – II ступеня, 4 клітини – III ступеня формування гранул. Цитохімічний коефіцієнт становить:

ЦХК дорівнює 0,31 у.о. Можна зробити висновок про добре виражену активізацію фагогоцитарної системи, що характерно для нормальної реакції. При ряді патологічних процесів відновлення нітросинього тетразолію в клітинах знижено і, що особливо важливо, немає активізації цих процесів під впливом стимулювальних агентів.

4. Оформити протокол заняття, зробити висновки.