4.3 Изучение динамики оксидазной активности в культуральной жидкостиTrametes hirsuta 56, иммобилизованного на различных носителях

Изучение динамики оксидазной активности в культуральной жидкости Trametes hirsuta 56 осуществляли при использовании в качестве носителей стальных губок и растительной губки люфы.

Иммобилизацию продуцента осуществляли в колбах Эрленмейера объемом 750мл на круговой качалке. В боксе в стерильных условиях в зоне пламени горелки в колбы вносили 150 мл питательной среды, 0,5% по объему посевного материала (IIпассаж, 3 суток роста) и носители в количестве 50 см³, что составило для стальных губок – 6 г, люфы – 3 г. В контрольные колбы вносили 150 мл питательной среды и 0,5% по объему посевного материала (IIпассаж, 3 суток роста). Активность посевного материала составила 6,2 Е_ОА.

Питательная среда имела следующий состав: мука пшеничная – 29,0 г/л; кукурузный экстракт – 6,4 г/л; NH₄NO₃– 2,0 г/л; КН₂РО₄– 1,3 г/л; вода водопроводная – до 1 л. Для стимулирования продуцирования лакказы в среду был добавленCuSO₄ в концентрации 0,05г/л.pHсреды до стерилизации – 5,6-5,8. Затем колбы инкубировали на круговой качалке с частотой вращения 200 об/мин при температуре 32 ºС в течение 10 суток. Опыт осуществляли в трех повторностях.

В результате проведения экспериментов было установлено, что максимальная активность лакказы при иммобилизации гриба на стальных губках была отмечена на 7 сутки эксперимента (3,5 Е_ОА) Рисунок 8Рисунок 8. Максимум активности лакказы при иммобилизации продуцента на растительной губке люфе пришелся на 5 сутки эксперимента (1,4 Е_ОА).

Рисунок 8. Динамика оксидазной активности в культуральной жидкостиTrametes hirsuta 56, иммобилизованного на различных носителях

Также было установлено, что продуктивность по лакказе культуры продуцента , иммобилизованной на различных носителях, превышает продуктивность по лакказе неиммобилизованной глубинной культуры. Так, продуктивность на стальных губках составляла 0,5 Е_ОА/ сут. (3,5 Е_ОА на 7 сутки), тогда как продуктивность неиммобилизованной культуры 0,2 Е_ОА/ сут. (0,9 Е_ОАна 5 сутки). Продуктивность на люфе составила 0,3 Е_ОА/ сут. (1,6 Е_ОАна 5 сутки).

4.4 Изучение динамики оксидазной активности культуральной жидкости базидиального грибаTrameteshirsuta56, иммобилизованного с использованием различных способов засева носителя

Изучение динамики оксидазной активности культуральной жидкости грибной культуры Trametes hirsuta 56 осуществляли при использовании двух вариантов засева носителя: глубинной культурой по методу Iqbalcсоавторами [IqbalM.etal., 2005 ]и поверхностной культурой (агаровыми блоками) по методуRodríguezCoutocсоавторами [RodríguezCoutoS.etal., 2004]. В качестве носителя в данном эксперименте использовали стальные губки.

Губки из нержавеющей стали были порезаны на кусочки диаметром приблизительно 1,5 см. Перед использованием носитель был подвержен кипячению в течение 10 мин, а затем трижды промыт дистиллированной водой.

Носитель был подвержен стерилизации в автоклаве при температуре 121 ºС в течение 40 мин.

Иммобилизацию продуцента осуществляли в колбах Эрленмейера объемом 750мл на круговой качалке. В боксе в стерильных условиях в зоне пламени горелки в колбы вносили 150 мл питательной среды, 0,5% по объему посевного материала (IIIпассаж, 3 суток роста) с концентрацией воздушно-сухой биомассы 15г/л и влажностью 8% и носитель в количестве 50 см³, что составляло для стальных губок – 6 г. Активность посевного материала составила 6,2 Е_ОА.

Засев носителя поверхностной культурой (агаровыми блоками) также осуществляли в боксе в стерильных условиях в зоне пламени горелки путем внесения в колбы 150 мл питательной среды, 3 агаровых блока площадью 0,5 см²каждый с мицелием гриба (7 суток роста), с концентрацией абсолютно-сухой биомассы 0,0025 г/см², и носитель в количестве 50 см³, что составляло для стальных губок – 6 г.

Питательная среда имела следующий состав: мука пшеничная – 29,0 г/л; кукурузный экстракт – 6,4 г/л; NH₄NO₃– 2,0 г/л; КН₂РО₄– 1,3 г/л; вода водопроводная – до 1 л. Для стимулирования продуцирования лакказы в среду был добавленCuSO₄ в концентрации 0,05г/л.pHсреды до стерилизации – 5,6-5,8. Затем колбы инкубировали на круговой качалке с частотой вращения 200 об/мин при температуре 32ºС в течение 10 суток. Опыт осуществляли в трех повторностях. Результаты эксперимента приведены на Рисунок 9.

Рисунок 9. Динамика оксидазной активности культуральной жидкости базидиального гриба Trametes hirsuta 56, иммобилизованного различными вариантами засева носителя

В результате проведения экспериментов было установлено, что активность лакказы грибной культуры, иммобилизованной на стальных губках, достигает максимального значения на 7 сутки эксперимента (рисунок 8). При этом активность лакказы при засеве носителя глубинной культурой (3,5 Е_ОА) значительно превышала активность лакказы при засеве носителя поверхностной культурой (2,2 Е_ОА).

Сравнение двух использованных методик показало, что при иммобилизации глубинной культуры по методу Iqbalcсоавторами [IqbalM.etal., 2005] в колбу вносили 0,01г абсолютно сухого мицелия, а при иммобилизации поверхностной культуры по методуRodríguezCoutocсоавторами [RodríguezCoutoS.etal., 2004] в колбу вносили 0,0038 г абсолютно сухого мицелия. Возможно, что при выравнивании количества вносимого мицелия при засеве глубинной культурой и поверхностной культурой, последняя будет не менее эффективна.