учебное пособие по паразитологии

Водном эритроците от 1 до 16 бабезий. Заражённость эритроцитов достигает 6–10 % (прил. 4, рис. 13).

В. trautmanni (Piroplasma suis) – паразитирует у свиней. Расположение парных грушевидных форм центральное, угол расхождения острый, размер больше радиуса эритроцита (до 6 мкм). На пике паразитемии преобладают грушевидные формы (до 90 %).

Водном эритроците от 1 до 8 бабезий. Заражённость эритроцитов высокая – до 65 %.

Развитие в организме позвоночных. Клещи со слюной ино-

кулируют животным инвазионные формы бабезий – «спорозоиты». («Спорозоиты» – не верный, но устоявшийся термин, поскольку истинные спорозоиты образуются у споровиков в результате полового размножения, которого, по мнению большинства протозоологов, нет у пироплазмид). «Спорозоиты» (мерозоиты) проникают в эритроциты, превращаются в трофозоиты (подвижные вегетативные стадии амебовидной формы с псевдоподиями), которые питаются, развиваются и размножаются бинарным делением или почкованием. Образовавшиеся особи – мерозоиты после разрушения эритроцита внедряются в новые эритроциты, превращаются в трофозоиты и вновь делятся, образуя новые мерозоиты и обусловливая развитие паразитемии и болезненного процесса у животных.

Развитие в клещах. Бабезииды, попав в организм клеща вместе с эритроцитами позвоночного хозяина, первоначально проходят бинарное и множественное деление в просвете кишечника

иего эпителиальных клетках. Образовавшиеся сигаровидные и булавовидные стадии мигрируют в различные органы, где продолжается их деление. В слюнных железах формируются мелкие одноядерные инвазионные формы – «спорозоиты». Бабезии в яйцевых клетках при дальнейшем метаморфозе клеща обеспечивают трансовариальную их передачу клещам следующего поколения.

Диагностика. Дляобнаружениябабезиидисследуютмазки крови. Кровь берут из периферических сосудов (кончика уха или хвоста). Наместевзятиякровивыстригаютволосы, очищаюткожу ватным тампоном, смоченным водой, затем спиртовым тампоном, обезжиривают кожу эфиром, дают высохнуть и только после этого делают прокол поверхностной вены стерильной иглой или надрез кожи ножницами или лезвием бритвы. Для исследования обязательно берут первую каплю крови, так как в ней содержится зна-

131

чительно больше кровепаразитов, нежели в последующих каплях. Кроме того, делают дополнительно 2–3 мазка.

Отпогибшихживотныхделаютмазкиизкровиприразрезеселезенки, печени, почек, из капилляров головного и костного мозга, но непозже4–6 часовпослесмерти, таккакпослеэтогосрокавжаркие дни возможен полный лизис паразитов. В этих случаях рекомендуется делать мазки из крови периферических сосудов венчика копыт или конца культи хвоста, где кровепаразиты сохраняются дольше.

Для приготовления тонких мазков обезжиренным предметным стеклом прикасаются к выступившей капле крови, располагая ее ближе к концу стекла. Суженным концом шлифованного стекла прикасаются к капле (кровь должна равномерно распределиться между стеклами) и под углом 45° продвигают его по предметному стеклу, пока капля не иссякнет. Равномерность нажима и продвижения шлифованного стекла обеспечивает приготовление качественного мазка, постепенно истончающегося и оканчивающегося в виде бахромы (прил. 4, рис. 1).

Приготовленные мазки высушивают (не менее 10 мин при комнатной температуре), этикетируют (простым карандашом, иглой, скальпелем) и фиксируют (метиловым спиртом 3–5 мин или спирт-эфиром 10 мин), погружая мазки в фиксирующие жидкости или наслаивая их на мазок высоким слоем.

Фиксированные мазки окрашивают, используя различные краски. Наиболее распространенный метод окрашивания – по Романовскому – Гимза. Используется готовый раствор краски одноименного названия. Перед употреблением краску разбавляют из расчета 1 капля на 1 мл дистиллированной воды. Различные серии краски по своим красящим свойствам не одинаковы. Поэтому иногда приходится брать ее 2–3 капли на тот же объем воды, но не более, так как в концентрированных растворах краска выпадает в осадок. Рабочий раствор краски готовят непосредственно перед употреблением. На окраску одного мазка необходимо 4–5 мл красящего раствора.

Окрашивание проводят в кюветах (чашках Петри), покрывая мазки высоким слоем краски или подслаивая краску под перевернутые мазки, размещенные на спичках (без головок) или отрезках предметных стекол; второй способ окраски предпочтителен – он предохраняет мазок от загрязнения выпадающим осадком краски. Экспозиция окрашивания в пределах 15–60 мин, что зависит от ка-

132

чества краски, поэтому время окрашивания устанавливается экспериментальным путем для каждой партии (флакона) краски. После окраски мазки споласкивают дистиллированной водой, ставят почти вертикально на фильтровальную бумагу и выдерживают до полного высыхания; в случаях появления на бумаге следов краски мазки вновь ополаскивают и ставят для высушивания.

Исследование мазка начинают под малым увеличением микроскопа. В наиболее тонкой части мазка (в концевой части или в его бахромке) находят хорошо окрашенный участок, который затем исследуют под иммерсионным объективом с окуляром × 7 или × 10. Просматривают несколько полей зрения – до обнаружения типичных форм кровепаразитов.

Правильная окраска узнается по внешнему виду. Макроскопически мазок должен быть окрашен в розовый цвет с незначительным фиолетовым оттенком. Пироплазмиды отчетливо выделяются нарозовомфонеэритроцитовввидеконтурирующихобразований, состоящихизпротоплазмысине-фиолетовогоцвета, иногдасвакуолью в центре, и ядра в виде разнообразных по форме включений хроматина красно-рубинового или красно-фиолетового цвета.

Вперекрашенныхмазкахэритроцитысинегоцвета, ивнихтрудно различить паразитов. Для обесцвечивания мазки погружают на 1–2 секунды в 80°-ный спирт или воду, подкисленные уксусной кислотой (на 100 мл спирта или воды – 2 капли кислоты). Вынутыемазкинемедленнообмываютводой, высушиваютиисследуют. Принедостаточномобесцвечиваниимазкаэтупроцедуруповторяют.

За пироплазмид (здесь мы интерпретируем не только бабезиид, а представителей всего отряда Piroplasmida) принимаются лишь те объекты, которые имеют соответствующую форму, типично окрашены и располагаются внутри эритроцита; последнее устанавливают при подъёме тубуса микроскопа – объект признаётся внутриэритроцитарным при одновременном исчезновении его и эритроцита из поля зрения.

Пироплазмиды, как и другие кровепаразиты, окраску воспринимают дифференцированно, то есть восприятие окраски у ядер и протоплазмы не одинаково. Инородные образования окрашиваются, как правило, однородно и часто дают металлический отблеск.

Каждую обнаруженную форму квалифицируют как эндоглобулярное простейшее. К числу дифференциально-диагностических признаков пироплазмид относятся:

133

1)определённый состав форм, присущих паразиту;

2)наличие характерных конечных форм деления (двойные грушевидные у бабезиид, мальтийский крест у нутталлий, гранатные тела у тейлерий);

3)доминирующий угол расхождения у двойных (парных) грушевидных форм (острый или тупой);

4)преобладающее местоположение паразита в эритроците (центральное или периферическое);

5)длина парных грушевидных форм по сравнению с радиусом эритроцита (больше или меньше радиуса);

6)количество хроматиновых скоплений в паразите (одно, два и более);

7)степень поражённости эритроцитов паразитами (путём подсчёта их числа в ста полях зрения микроскопа), выраженная в процентах.

При микроскопии мазков крови необходимо дифференцировать анаплазмоидныеформынекоторыхпироплазмидотимитирующих непротозойных образований, от посторонних включений и всевозможных артефактов. Среди них:

1)тельца Жолли – круглые или овальные образования, окрашивающиеся в интенсивный синеили темно-фиолетовый цвет, реже в ярко-красный; располагаются в протоплазме эритроцитов большей частью одиночно, иногда с двумя-тремя тельцами или в виде мелкой зернистости;

2) базофильная зернистость (пунктуация) – представлена в виде мелких, различной величины и формы включений тёмно-синего цвета, в беспорядке разбросанных по всей площади эритроцита и хорошо заметных на розовом его фоне;

3)кровяные пластинки (тромбоциты) выглядят как кусочки протоплазмы без ядра, овальной или круглой формы, окрашенные в розовый цвет, содержат небольшое количество

зёрнышек; находятся не в эритроцитах, а в плазме крови. При микроскопии мазков обращается внимание на изменения качественного состава крови: анизацитоз, полихромазия, пойкило-

цитоз, в лейкоцитарной формуле сдвиг влево.

Кроме микроскопии мазков крови в лабораторной практике используются и серологические методы диагностики РСК, РДСК, РНГА, РИФ, ИФА.

134

Семейство Theileriidae

Передача инвазии осуществляется клещами трансфазно; преэритроцитарные многоядерные стадии в позвоночном хозяине имеются, развиваются в клетках лимфатической системы.

Род Theileria. Эритроцитарные стадии (мерозоиты) тейлерий отличаются разнообразием форм. Они, как правило, мелких размеров (0,5–2 мкм), чаще округлой или палочковидной формы, в одном эритроците от 1 до 9 паразитов. В России тейлерии как возбудителиболезнейпаразитируютукрупногорогатогоскота, уовец и коз, у северных оленей и лошадей.

Т.annulata–паразитируетукрупногорогатогоскота.Вэритроци- тахвстречаютсяпаразитыкруглой,овальной,запятовиднои,палочковидной, крестообразной(делящиесястадии) иточечнойформы. В паразитах овальной формы хроматин располагается в виде одного скопления по периферии, иногда как бы выступая за пределы цитоплазмы; такие формы напоминают перстень. В продолговатых формах хроматин концентрируется на утолщенном конце, напоминая шляпку гриба. Размеры тейлерий – от 0,5 до

2,9 мкм (прил. 4, рис. 8).

Водном эритроците чаще 2–3 паразита, но может быть и более – до 9. Паразитемия на пике развития достигает 80–95 %.

Т. mutans (Т. orientalis) – паразитирует у крупного рогатого скота. Эритроцитарные стадии чаще округлые или овальные, реже – грушевидной, запятовидной или точковидной формы. Размеры в пределах 0,6–2 мкм.

Водном эритроците 2–4 паразита. Пораженность эритроцитов варьирует от 0,5 до 13 %. Вид слабо патогенен.

Т. sergenti – паразитирует у крупного рогатого скота. Эритроцитарные стадии палочковидные, овальные, грушевидные, крестовидные или точечные. Количество хроматиновых масс в одном паразите варьирует от 1 до 4. Размеры тейлерий от 0,5 до 3,1 мкм.

Водном эритроците до 7 паразитов. Зараженность эритроцитов тейлериями достигает 80–90 %, в среднем 40–50 %.

Т. equi (Nuttallia equi) – паразитирует у однокопытных (лошадь, осел, мул). Эритроцитарные стадии имеют преимущественно кольцевидную, овальную, круглую и грушевидную формы; последние встречаются редко и никогда не располагаются парами. Размножаются тейлерий почкованием с формированием характер-

135

ных стадий, состоящих из 4 особей, соединенных цитоплазматическими мостиками («мальтийский крест»), но количество их незначительно (прил. 4, рис. 11). Размер тейлерий в зависимости от стадииболезнименяется: вначалезаболеванияпаразитыкрупного размера – равныилипревышаютрадиусэритроцита(2,5–3,2 мкм), по мере выздоровления размер их уменьшается (средние – менее половины радиуса эритроцита, мелкие – 1/4 его радиуса).

Водномэритроцитеот1 до4 тейлерий, редкоболее(до10), различной формы. Паразитемия достигает 50–60 %.

Т. hirci (Gonderia hirci) – паразитирует у овец и коз. Эритроцитарные стадии круглые, овальные, продолговатые и точковидные; четырехъядерные стадии имеют форму креста. Размеры круглых форм от 0,6 до 2 мкм, продолговатых – около 1,6 мкм. Вид высоко патогенен, количество зараженных эритроцитов значительно и может достигать 95 %.

Т. ovis (Т. recondita) – паразитирует у овец и коз. Эритроцитарные стадии круглые, овальные, продолговатые и точковидные, размеры их в пределах 0,5–2 мкм. Вид мало патогенен, пораженность эритроцитов не превышает 2 %.

Т. tarandirangiferis – паразитирует у северных оленей. Эритроцитарные стадии палочковидные – прямые или изогнутые (диаметром 0,5 мкм), овальные (1,5–2 мкм) и грушевидные (редко встречающиеся) формы. Вид патогенен, но изучен слабо.

Развитие в организме позвоночных. «Спорозоиты» тейле-

рий после инокуляции клещом через кровь и лимфу проникают в клетки лимфатической системы (лимфоузлы, печень, селезенка и др.). Попав в клетку, паразиты округляются, растут и превращаются в трофозоиты. Из них путем множественного деления (шизогонии, мерогонии) образуются многоядерные стадии, состоящие из большого количества одноядерных форм – мерозоитов, которые поражают новые клетки. Многоядерные стадии развития тейлерий (шизонты, меронты) называются «коховские шары» или «гранатные тела» (прил. 4, рис. 12). После нескольких шизогональных циклов образующиеся мерозоиты проникают в плазму крови, откуда – в эритроциты, где размножаются бинарным делением или почкованием. Интенсивность этого процесса у разных видов тейлериид неодинакова.

Развитие в клещах. Сведения о развитии тейлериид противоречивы. Они как о бесполом, так и половом размножении. На за-

136

ключительном этапе развития образуется большое количество одноядерных стадий (спорозоитов-мерозоитов), которые переселяются в слюнные железы клеща и при инокуляции способны продолжитьразвитиевпозвоночномхозяине. Тейлериидыпередаются от одной фазы развития клещей к другой: заражаются тейлериями личинки или нимфы, а передают паразитов позвоночному хозяину соответственно либо нимфы, либо имаго.

Д и а г н о с т и к а. Для обнаружения тейлериид исследуют мазки крови и пунктат поверхностных лимфоузлов. Мазки крови готовят так же, как при бабезиидозах животных.

Для получения пунктата из лимфоузла шерсть в области его расположения выстригают, кожу протирают спиртом и смазывают настойкой йода. Оттянув лимфоузел рукой несколько вверх, удерживают его в этом положении большим и указательным пальцами другой руки. В глубь железы вводят стерильную иглу, надетую на шприц (5–10 мл), и постепенно, оттягивая поршень шприца, всасывают в иглу лимфу. Отъединяют шприц от иглы, извлекают ее из железы, а содержащийся в ней пунктат осторожно выдувают шприцом на предметное стекло и той же иглой распределяют равномерным тонким слоем по его поверхности; дают мазку подсохнуть, а затем фиксируют и красят по Романовскому – Гимза. Место прокола смазывают раствором йода.

При микроскопии пунктата обнаруживают стадии множественного деления тейлерий («коховские шары», «гранатные тела») в лимфоцитах, моноцитах и реже внеклеточно. Они круглой или овальной формы, размером в пределах 8–27 мкм. Ядерное вещество гранатных тел окрашено в рубиново-красный цвет, а протоплазма в синевато-голубой.

Для ранней диагностики и установления тейлерионосительства разработаны серологические методы диагностики (РСК, РДСК, РИФ) с антигенами, приготовленными из преэритроцитарных стадий («гранатных тел») или из эритроцитарных стадий тейлерий.

КОКЦИДИИДЫ – ОТРЯД COCCIDIIDA

Этобольшаягруппапростейших– возбудителейболезнейсельскохозяйственных, домашних животных и человека. Одни из них

137

паразитируют в клетках, другие – в тканях хозяина. Данный отряд состоит из трех семейств: Eimeriidae, Sarcocystidae и Cryptosporidiidae. У них сложный жизненный цикл, включающий бесполый (мерогония) и половой (гаметогония) способы размножения. Их развитие проходит как со сменой хозяев, так и без таковой и всегда сопровождается формированием ооцист.

Семейство Eimeriidae

Представители этого семейства – моноксенные (однохозяинные) паразиты. Им свойственна не только строгая специфичность к видам хозяев (животным и птицам), но и локализация в их организме. Эймерииды паразитируют главным образом в эпителиальных клетках тонкого (чаще) и толстого кишечника, лишь некоторые виды – в других органах.

В цикле развития эймерииды претерпевают три стадии: мерогонию (шизогонию) – множественное бесполое размножение, гаметогонию – половое размножение и спорогонию – образование спор. Первые две стадии развития происходят в организме хозяина (эндогенный цикл), а третья – во внешней среде (экзогенный цикл).

Из организма хозяина с фекалиями выделяются ооцисты эймериид. Это прозрачные образования с гладкой одноили двуконтурной оболочкой, различного цвета (светло- и тёмно-коричневые, светло- и тёмно-жёлтые, оранжево-жёлтые, светло-серые, бесцветные и др.), различной формы (овальные, элипсовидные, круглые, яйцевидные, цилиндрические, грушевидные) и различного размера (в пределах 10–50 × 10–45 мкм). У отдельных видов эймериид на одном из полюсов ооцисты имеется шапочка, микропиле и полярная гранула.

Ооцисты, выведенные из организма хозяина, представляют собой расселительную стадию. Во внешней среде при наличии определённых условий (тепла, влаги и кислорода) развитие эймериид продолжается (спорогония): в ооцисте участки цитоплазмы обособляются – образуются споробласты, вокруг них формируется оболочка – они превращаются в спороцисты (споры), в которых развиваются спорозоиты.

138

Жизненный цикл эймериид, как и других представителей отряда Coccidiida, начинается с заражения хозяина, проглотившего ооцисту со спорами и заключёнными внутри них спорозоитами. Последние выходят из ооцисты и внедряются в эпителиальные клетки кишечника. После краткого периода роста и множественного деления (мерогония, шизогония) спорозоит превращается в многоядерную клетку (меронт, шизонт), в которой формируются мерозоиты. Созревшие мерозоиты отпочковываются и внедряются в эпителиальные клетки, давая начало новой генерации шизонтов. Размеры шизонтов и число отпочковавшихся от них мерозонтов различно. В среднем шизонты 20–30 мкм, число мерозоитов в них от нескольких десятков до нескольких сотен. Но встречаются и «гигантские» шизонты, например, у Eimeria bovis они достигают 300–400 мкм, с огромным количеством мерозоитов (до 120 тыс.).

Бесполоеразмножениеповторяетсянесколькораз, послечегопотенциямерозоитовменяется, даваяначалонешизонтам, агамонтам, то есть наступает момент полового размножения – гаметогонии.

При гаметогонии происходит дифференциация мерозоитов: одни преобразуются в макрогамонты, другие – в микрогамонты; первые продуцируют женские половые клетки (макрогаметы размером 10–90 мкм), вторые – мужские половые клетки (микрогаметы размером 5–8 мкм). Микрогаметы, снабжённые жгутиком, подвижны, проникают в макрогаметы, происходит их слияние с образованием зигот. Зиготы окружаются оболочками и превращаются в ооцисты. В дальнейшем ооцисты выходят из организма животного с фекалиями во внешнюю среду, где продолжается развитие паразитов (спорогония), о чём сказано выше.

ВсемействеEimeriidae четырерода: Eimeria, Isospora, Wenyonella

иTyzzeria. Эймериидвухпоследнихродовпаразитируютуводоплавающих птиц и на территории России не диагностируются.

Род Eimeria. Ооцисты содержат 4 спороцисты, в каждой спороцисте по два спорозоита (прил. 4, рис. 14).

Эймерии паразитируют практически у всех сельскохозяйственных, домашних и диких животных и птиц. Различные виды эймерийпаразитируютвразличныхотделахкишечнойтрубки: одни– в тонком кишечнике, другие – в толстом кишечнике, третьи – и в том, и в другом отделах, четвёртые – и в кишечнике, и вне его. Благодаря узкой гостальной специфичности эймерий в организме

139

одного вида хозяина могут паразитировать несколько специфичных для него видов эймерий.

Ниже мы приводим по видам животных общее число изученныхэймерий(поМ. В. Крылову, 1994), втомчислесуказаниемнекоторых, наиболеераспространённыхвидовнатерриторииРоссии

(прил. 4, рис. 16).

Крупный рогатый скот – 21, Е. bovis, E. zurni, E. cyllindrica. Овцы, козы – 19, Е. parva, E. intericata, E. ninaekohlyakimovi. Свиньи – 11, Е. spinosa, E. perminuta, E. scarba. Кролики – 11, Е. piriformes, E. magna, E. perforans, E. stieda – паразитируют в эпителиальных клетках желчных протоков печени. Верблюды – 5,

Е. cameli. Северныеолени– 5, Е. arctica, E. mayeri, E. tarandina. Лошади – 3, Е. salipedum, E. leuckarti, E. uniungulati. Собаки и кошки – 4, Е. canis, E. felina, E. cati. Куры – 8, Е. tenella, E. maxima, E. brunetti –

все они паразитируют, как правило, в слепых отростках и реже в тонком кишечнике. Гуси – 9, Е. anseris, E. truncata, E. parvula – все они локализуются не только в эпителии кишечника, но и извитых канальцев почек. Утки – 5, Е. anatis. Индейки – 6, Е. meleagridis,

E.meleagrimitis. Цесарки – 3, Е. numidae, E. grenieri. Перепел – 1.

Ди а г н о с т и к а. Фекалии животных и птиц исследуют используя флотационные методы по Фюллеборну и Дарлингу. С поверхности отстоявшейся жидкости металлической петлёй берут каплю или две, наносят на предметное стекло, покрывают покров- нымисмотрятподмикроскопомприувеличении140–280 разиболее. В поле зрения микроскопа обнаруживают неспорулированные ооцисты эймерии: единичные при субклиническом течении болезни, десятки и сотни при заболевании.

Видовую принадлежность эймерий определяют по строению и размерам спорулированных ооцист с помощью специальных таблиц.

Ооцистыэймерийследуетотличатьотяицгельминтов, которые, как правило, крупнее, имеют другую форму и строение оболочки. Кроме того, в яйцах некоторых гельминтов заметны процессы дробления и даже личинки на разных стадиях развития.

При патолого-анатомическом вскрытии для исследования берут кишечное содержимое, соскобы слизистой пораженного участка кишки, казеозное содержимое фокусов некроза печени кролика или почкигуся, приготовляютраздавленныекаплиинативныемазкидля исследования; из мест поражения печени и почек с этой же целью

140