учебное пособие по паразитологии

приготовляют отпечатки (кляч-препараты). При микроскопии этих материалов обнаруживают различные стадии развития эймерий.

Иногда прибегают к культивированию ооцист: фекалии помещают в чашку Петри и оставляют в теплом и влажном месте. Чтобы предохранить фекалии от плесени и ускорить процесс споруляции ооцист, фекалии обрабатывают 5 %-ным раствором двухромовокислого калия или смешивают с мелко истолченным древесным углем. Исследование ведут до образования спорозоитов.

Род Isospora (Cystoisospora). Ооцисты содержат 2 спороцисты, в каждой спороцисте по 4 спорозоита (прил. 4, рис. 15).

Описано 13 видов изоспор, паразитирующих у различных животныхичеловека. Наибольшееветеринарноезначениеимеютвозбудители изоспорозов плотоядных: у собак I. canis и I. ohioensis, у

кошек I. felis и I. rivolta.

Жизненные циклы изоспор плотоядных отличаются от таковых у эймерий. Собаки и кошки заражаются при заглатывании спорулированных ооцист, выделяемых больными с фекалиями, или при поедании инвазированных факультативных хозяев. Эту роль выполняют грызуны (мыши, крысы, хомяки), как жертвы хищников. Заражаются они при заглатывании ооцист изоспор: вышедшие из них спорозоиты локализуются в лимфатических узлах и паренхиматозных органах, где формируются цистоподобные стадии, которые сохраняются на долгое время (до 2 лет). Дальнейшее развитие они совершают только в организме окончательного хозяина.

Д и а г н о с т и к а. Фекалии исследуют методом флотации (по Фюллеборну, Дарлингу и др.) с целью обнаружения ооцист изоспор в раздавленной капле (не менее 3 капель). Исследуют под микроскопом с объективами × 10 – × 90 и окуляром – × 10. У больных животных обнаруживают большое количество неспорулированных ооцист. Они выделяются в любое время года, однако значительно чаще их регистрируют летом. Ооцисты изоспор имеют двуконтурную оболочку без микропиле и остаточного тела; спорулируют во внешней среде.

При вскрытии трупов с пораженных участков тонкого, реже толстого кишечника делают глубокие соскобы слизистой. Готовят препараты в форме раздавленной капли и нативного мазка. Обнаруживают эндогенные стадии развития изоспор (меронты, меро-

141

зоиты, гаметы, ооцисты). В окрашенных препаратах у эндогенных форм ядро темно-синего цвета, цитоплазма – сине-розового.

Семейство Sarcocystidae

Представители этого семейства – гетероксенные (многохозяинные) паразиты. Жизненный цикл их проходит с участием дефинитивного и промежуточного хозяев. Бесполое размножение (мерогонию) и половой процесс (гаметогонию) большинство саркоцистид совершают в кишечнике дефинитивного хозяина, спорогонию – или в кишечнике последнего, или вне его, с образованием зрелой ооцисты, содержащей 2 спороцисты (споры), в каждой – по 4 спорозоита. У промежуточного хозяина саркоцистиды размножаютсяпутемпочкованиясобразованиемдвух(эндодиогения) или множества (эндополигения) дочерних клеток.

Ветеринарно-эпидемическое значение, как возбудители болезней, имеют представители трех родов: Toxoplasma, Sarcocystis, Besnoitia.

Род Toxoplasma. Важное значение имеет один вид токсоплазм – Т. gondii. Дефинитивным хозяином являются кошка и другие кошачьи, укоторыхтоксоплазмыпаразитируютвэпителиальныхклетках кишечника. Промежуточным хозяином являются все виды животных, птиц и человек – у них токсоплазмы паразитируют в клетках различных органов и тканей (прил. 4, рис. 17).

Кошки заражаются, поедая ткани и органы промежуточных хозяев (наиболее часто мышевидных грызунов, реже мясо копытных), инвазированных токсоплазмами в форме псевдоцист, содержащих большое количество мерозоитов. Мерозоиты Т. gondii внедряются в эпителиальные клетки кишечника и размножаются сначала бесполым путем (мерогония = эндодиогения), совершая несколько генераций, а затем наступает половой процесс (гаметогония), завершающийся образованием ооцист (зигоцист). Размеры ооцист в среднем 12 × 11 мкм. В дальнейшем ооцисты с испражнениями выбрасываются во внешнюю среду, где в поверхностных слоях почвы дозревают (спорулируют) – в них формируются 2 спороцисты (8 × 6 мкм), в каждой по 4 спорозоита

(8 × 2 мкм).

142

Кошки могут заражаться токсоплазмозом и при заглатывании спорулированных ооцист, рассеянных во внешней среде. В этом случае развитие паразитов совершается без участия промежуточных хозяев. Поэтому жизненный цикл токсоплазм относится к факультативно-гетероксенному.

Промежуточные хозяева заражаются при заглатывании спорулированных ооцист кошки или эндозоитами и цистозоитами от промежуточного хозяина при поедании мяса, недостаточно термически обработанного, а также при контакте с таким мясом и патологическим материалом через скарифицированную кожу. Токсоплазмы в организме животных и человека через кровь и лимфу заселяют клетки различных органов и тканей. Быстро размножаясь (эндодиогения), они формируют псевдоцисту – групповое скопление мерозоитов (их называют эндозоиты, тахизоиты) в форме полулуний или дольки апельсина (7 ×4 мкм). После гибели клетки мерозоиты высвобождаются и внедряются в новые клетки. Такой быстрый темп размножения наблюдается при остром течении болезни, в этот период возможна трансплацентарная передача токсоплазм.

Через несколько генераций (число их не установлено) интенсивность размножения токсоплазм замедляется и мерозоиты, внедрившиеся в клетки хозяина, окружаются оболочкой (за счет хозяина) – так формируется циста. Внутри цисты тахизоиты трансформируются в новый тип клеток – брадизоиты (цистозоиты, зоиты). Паразиты не покидают цисту, продолжая замедленно размножаться, увеличивают ее размеры до 100 и более мкм. Такие покоящиеся формы токсоплазм (цисты) формируются при хроническом течении болезни. Цисты и псевдоцисты у промежуточных хозяев сохраняются многие годы, пока не попадут в организм дефинитивного хозяина.

Д и а г н о с т и к а. Кошек обследуют копроскопически методом Дарлинга или Фюллеборна. При среднем увеличении микроскопа обнаруживают ооцисты токсоплазм. Они округло-овальной формы, с бесцветной двухслойной оболочкой, размером 9–14 мкм, напоминают ооцисты эймерий. Для идентификации ооцист проводят их спорулирование.

От павших животных исследуют мазки-отпечатки из паренхиматозных органов, лимфатических узлов, головного мозга, глазного яблока, плаценты. Их окрашивают по Романовскому – Гимза и

143

микроскопируют под иммерсией. В дифференциальном отношении токсоплазм необходимо отличать от саркоцист и безноитий.

Внеклеточные(свободные) токсоплазмыпредставляютсяввиде дугообразно изогнутых полулунных образований (4–7 × 2–4 мкм) с несколько суженным одним концом и более широким округлым другим. Ядро шарообразной формы расположено обычно ближе к широкому концу паразита; окрашивается в красный цвет. Протоплазма окрашивается в бледно-голубой цвет, содержит одну или несколько гранул.

Тканевые токсоплазмы имеют округлую и овальную форму, реже – в виде полумесяца. По размерам они меньше свободных форм. Псевдоцисты представлены рыхло сгруппированным скоплением токсоплазм (тахизоитов), не имеющих оболочки; количество паразитов может достигать нескольких десятков. Цисты обычно круглой формы, размером 10–100 мкм, имеют плотную двуконтурную оболочку, содержат сотни токсоплазм (брадизоитов), они лежат так плотно, что в препарате видны только ядра.

Иногда прибегают к постановке биопробы: белых мышей заражаюткультуройспорулированныхооцисттоксоплазмилипатологическим материалом от животных, подозреваемых в заболевании.

СцельюсерологическихисследованийиспользуютРДСК, РИФ

идругие методы.

Род Sarcocystis. Дифинитивные хозяева – кошка, собака и человек, промежуточные – сельскохозяйственные животные, дикие копытные и грызуны (прил. 4, рис. 18).

Виды саркоцист (прежнее название – саркоспоридии), паразитирующие: у крупного рогатого скота – S. hirsuta (S. bovifelis),

S. cruzi (S. bovicanis) S. hominis (S. bovihominis); уовец– S. tenella (S. ovicanis), S. gigantea (S. ovifelis); у свиней – S. miescheriana (S. suicanis), S. suihominis; у лошадей – S. bertrami (S. equicanis).

В скобках указаны ранее принятые названия саркоцист, в которых сочетаются названия дефинитивного и промежуточного хозяев.

Дефинитивные хозяева заражаются при поедании органов и тканей животных, пораженных саркоцистами, в цистах которых содержитсямногомерозоитов(цистозоитов, метроцитов). Последние внедряются в эпителиальные клетки кишечника и трансформируются в мужские (микро-) и женские (макро-) гаметы. После их копуляции образуется зигота, которая, покрываясь оболочкой, становится ооцистой. В ооцисте образуются две спороцисты, в

144

каждой по 4 спорозоита. Форма ооцист круглая, гантелевидная, сферическая; размер в пределах 11–20 мкм.

Особенность развития саркоцист заключается в том, что в кишечнике дефинитивного хозяина идет только половой процесс (гаметогония), минуя типичную для кокцидиид мерогонию (шизогонию); там же происходит и спорообразование. Паразиты выводятся во внешнюю среду в стадии свободных спороцист и зрелых ооцист.

Промежуточные хозяева заражаются при заглатывании с кормом и водой саркоцист в форме ооцист и спороцист. Из кишечника спорозоиты проникают в клетки эндотелия кровеносных и лимфатических сосудов многих органов, где размножаются множественным делением (мерогония, шизогония), образуя многоядерную клетку – меронт (шизонт). Сформировавшиеся в меронте мерозоиты высвобождаются, внедряются в новые клетки и, размножаясь, формируют меронты 2-й генерации. У некоторых видов саркоцист наблюдается 3-я генерация мерогонии. Мерозоиты последней генерациизаносятсятокомкровивмышечнуюткань, вклеткахкоторой образуются цисты (их еще называют «мишеровы мешочки»). Они локализуются в скелетной мускулатуре, мышцах гортани, пищевода, диафрагмы, сердца. Цисты (саркоцисты) окружены плотной оболочкой. Внутри них заключено множество капсул, заполненных серповидно изогнутыми (7–14 x 2–7 мкм) цистозоитами (метроцитами, мерозоитами). Величина мышечных саркоцист (от микроскопических до 20 мм и более) и форма (мешковидные, вытянутые и др.) зависят от вида и возраста хозяина, от вида паразита и места его локализации. Цисты находятся в организме животного всю жизнь, обеспечивая образование антител и тем самым состояние преимуниции.

Д и а г н о с т и к а. Дефинитивных хозяев исследуют копроскопически методами Дарлинга или Фюллеборна. Рекомендуется исследовать свежевыделенные фекалии, что дает возможность дифференцировать ооцист саркоцист от ооцист токсоплазм, изоспор, эймерий. Ооцисты спороцист выделяются во внешнюю среду спорулированными в отличие от ооцист других кокцидиид.

При ветеринарно-санитарной экспертизе туш убитых животных или при вскрытии трупов находят макроцисты саркоцист в мышцах пищевода, сердца, языка, диафрагмы и в скелетной мускулатуре. Они имеют вид удлиненных, иногда от 1 до 20 мм, об-

145

разований белого или желтоватого цвета, покрыты тонкой оболочкой, от которой отходят внутренние перегородки. Чтобы убедиться, что эти образования являются саркоцистами, их разрушают на предметном стекле препаровальными иглами. Содержимое цисты смешивают с 1–3 каплями 50 %-ного раствора глицерина (или дистиллированной воды). Небольшое количество смеси исследуют под микроскопом при среднем увеличении и слегка затемненном поле: в содержимом обнаруживают цистозоиты (метрациты, мерозоиты) банановидной, бобовидной, эллипсовидной форм. Иногда прибегают к исследованиюмазков, окрашенныхпоРомановскому– Гимза: цитоплазмацистозоитовокрашиваетсявбледно-голубойили светло-сиреневый цвет, ядро – в фиолетово-красный.

Для обнаружения микроцист саркоцист из пробы мышц (что и для исследования макроцист) вырезают кусочки с просяное зерно, четыре среза раздавливают в компрессориуме и исследуют под малым увеличением микроскопа. Микроцисты располагаются между мышечными волокнами, имеют веретенообразную или овальную форму. Микроцисты лучше видны, если пробы мышц предварительно окрасить различными красками, в том числе и по Романовскому – Гимза. Для обнаружения цистозоитов в микроцисте 2–5 г мышц и 2–5 мл физраствора размешивают в ступке до получения гомогенной массы: каплю этой жидкости исследуют под микроскопом при среднем увеличении.

Для прижизненной диагностики саркоцистоза используют аллергические и серологические методы; среди последних РА, РСК и РДСК. Разработан и компрессионный метод исследования биопсированной мышечной ткани.

В дифференциальном отношении саркоцист следует отличать от личинок трихинелл, цистицерков цестод и токсоплазм.

Род Besnoitia. Дефинитивный хозяин – кошка, промежуточные хозяева – крупный рогатый скот, коза, антилопа. В странах СНГ (лишьвКазахстане) зарегистрированодинвидВ. besnoiti (прил. 4,

рис. 19).

Дефинитивный хозяин заражается при поедании органов и тканей животных, инвазированных зрелыми псевдоцистами безноитий. В клетках кишечника предположительно развивается одна агамная (мерогония) генерация, а затем начинается гаметогония. Ооцисты овоидной формы, 14–16 × 12–14 мкм, после созревания в них формируются две спороцисты, в каждой содержится по 4 спорозоита.

146

Промежуточный хозяин инвазируется при заглатывании зрелых ооцист от дефинитивного хозяина. Спорозоиты внедряются в эндотелиальные клетки кровеносных сосудов и размножаются путем мерогонии. Образовавшиеся мерозоиты током крови разносятся по всему организму, где формируются крупные с толстой стенкой (за счет хозяина) псевдоцисты (меронты), в них продолжается процесс мерогонии. Псевдоцисты у крупного рогатого скота сферической формы, достигают 100–500 мкм в диаметре, содержат тысячи полулунных или бананообразных мерозоитов (6–9 мкм). Меронты локализуются в коже, под кожей, в соединительной ткани, в склере конъюнктивы, в фасциях, серозе, мукозе носа, гортани, трахеи и других органах и тканях. Мерозоиты встречаются в плазме крови, моноцитах, лимфоузлах, тестисах, легких и других органах.

Предполагается, что в передаче безноитий участвуют кровососущие двукрылые насекомые – слепни, мухи-жигалки. В то же время неизвестно, являются ли они биологическими или механическими переносчиками.

Д и а г н о с т и к а. Для лабораторного исследования используют кусочек поражённой кожи, изъятый путём биопсии. Из материала готовят мазки, окрашивают по Романовскому – Гимза и исследуют под иммерсионной системой микроскопа. В период лихорадки в мазках перефирической крови ведут поиск эндозоитов: цитоплазмапаразитаокрашиваетсявбледно-голубойцвет, аядро– в тёмно-красный; их обнаруживают как в плазме, так и в лейкоцитах. В биопсированной коже (при раздавливании на предметном стекле) обнаруживают псевдоцисты, мерозоиты и трофозоиты.

В диагностике используются также серологические методы (РСК и РДСК), биопроба (заражение белых мышей и кроликов), методы культивирования.

Семейство Cryptosporidiidae

Криптоспоридии – гомоксенные (однохозяинные) кокцидииды. В данном семействе один род Cryptosporidium. В нём 7 валидных видов, паразитирующих у млекопитающих, птиц и человека. Наибольшее ветеринарное значение имеет С. muris – возбудитель криптоспоридиоза молодняка сельскохозяйственных (крупный и

147

мелкий рогатый скот, лошадь, свиньи) и лабораторных животных, человека.

Криптоспоридии развиваются по схеме цикла развития эймерий, но все стадии развития – мерогония, гаметогония и спорогония – происходят эндогенно.

Ооцисты криптоспоридии овоидной, эллипсоидной или сферической формы. Размеры их варьируют: мелкие – 2,5 × 3 мкм и крупные – 5 × 7 мкм в диаметре. В ооцисте спороцист нет, имеются 4 свободнолежащих спорозоита и остаточное тело

(прил. 4, рис. 20).

Заражение происходит при заглатывании (с кормом, водой) ооцист криптоспоридии восприимчивыми животными. Спорозоиты в кишечнике, не внедряясь в эпителиальные клетки, располагаются экстрацитоплазматически в межворсинчатом пространстве, превращаются в трофозоиты и окружаются паразитофорной вакуолью, сформированной соседними микроворсинками. Трофозоиты многократно делятся (мерогония). Число агамных генераций точно не установлено. В дальнейшем наступает половой процесс размножения (гаметогония). Микро- и макрогаметы копулируют с образованиемзиготы, котораяпокрываетсяоболочкойипревращается в ооцисту.

В процессе формирования ооцист возникают ооцисты двух типов: тонкостенные и толстостенные. Тонкостенные могут служить источником аутоинвазии, поскольку споруляция происходит в кишечнике, и вышедшие из ооцист спорозоиты дают начало новому циклу развития. Это ведёт к хроническому течению болезни и, естественно, к длительному выделению ооцист больным животным. Толстостенные спорулированные ооцисты устойчивы к неблагоприятным факторам и могут несколько месяцев сохраняться во внешней среде.

Д и а г н о с т и к а. Из фекалий делают нативный тонкий мазок, высушивают, фиксируют и окрашивают карбол-фуксином по Цилю – Нильсену: ооцисты окрашиваются в красный цвет, внутри них 4 спорозоита, сопутствующая микрофлора окрашивается в зелёный цвет. При окраске мазков по Романовскому ооцисты обретают синий цвет различной интенсивности, внутри спорозоиты с красноватыми гранулами внутри.

Используются и флотационные методы Дарлинга и Фюллеборна. Из плёнки поверхностного натяжения готовят мазок, фиксиру-

148

ют и красят. В данном случае вероятность обнаружения криптоспоридий повышается, так как в исследуемом материале увеличивается концентрация ооцист.

При микроскопии ооцист криптоспоридий необходимо помнить, что у этой группы кокцидиид ооцисты очень мелкие (3–5 мкм), поэтому микроскопию нужно вести под большим увеличением.

ЖГУТИКОВЫЕ (SYN. MASTIGOPHORA)

Отличительной особенностью простейших, объединенных под названием «жгутиконосцы», является наличие органоидов движения в виде жгутиков. Количество жгутиков различно: чаще – один, реже– дваилинесколько, ауотдельныхотрядов– множество. Жгутики выходят из базального тельца (блефаропласта) цитоплазмы паразита. Тело овальное, шаровидное или веретенообразное, покрыто тонкой оболочкой – пелликулой. Большинство жгутиковых имеют одно ядро, но встречаются двуядерные формы. Некоторые представители имеют ундулирующую мембрану (вырост цитоплазмы), которая, как и жгутики, обеспечивает движение простейшего. Размножение – бесполое (бинарное), путем продольного деления на две части; у некоторых видов сем. Trypanosomatidae отмечено множественное деление или почкование. Питание осуществляется путем пиноцетоза.

При изучении ультратонкого строения в цитоплазме жгутиковых установлены различные органеллы: кинетопласт, аппарат Гольджи, метахондрии, коста, аксостиль, рибосомы, пиноцетозные пузырьки, базальное тельце и другие включения.

Всистеме одноклеточных организмов прежних лет жгутиковые рассматривались в ранге таксонов как класс под названием Mastigophora (Flagellata) – жгутиконосцы, а заболевания, вызываемые ими, как мастигофорозы (лат. mastix – жгутик). И по настоящее время систематика жгутиковых в работах разных исследователей не однозначна, особенно в рангах крупных таксонов зоологической классификации (тип, класс, отряд).

Всистематике М. В. Крылова, А. А. Добровольского жгутиковые разделены на 4 самостоятельных типа. В каждом из них

149

есть свободноживущие и паразитические виды. Наибольшее медико-ветеринарное значение имеют представители двух типов: Kinetoplastida и Polymastigota (основное их различие в специальных органеллах: первые имеют кинетопласт, вторые – аксостиль). Ниже мы рассмотрим лишь отдельные виды жгутиковых, являющиеся возбудителями специфических заболеваний животных. Полная таксономическая характеристика этих жгутиковых представлена нами в соответствующих типах классификационной схемы одноклеточных организмов.

Семейство Trypanosomatidae

Характерная особенность трипаносоматид – их полиморфность: в организме хозяев один и тот же вид на разных стадиях своего жизненного цикла имеет различные морфологические формы. Размеры этих форм могут колебаться в широких пределах – от 2 до 60 мкм. Большая изменчивость трипаносоматид (различают 8 морфологических типов) существенно тормозит разработку систематики этой группы простейших организмов

(прил. 4, рис. 21).

Трипаносоматиды паразитируют у многих видов животных

ибеспозвоночных. Жизненные циклы их протекают с участием одного или двух хозяев. Заражение дефинитивных хозяев происходит различными путями: в результате контакта больных животных со здоровыми, инокулятивно (через переносчиков) и алиментарно (при поедании инвазированных переносчиков).

Род Trypanosoma. Трипаносомы (trypan – бурав, soma – тело) имеют веретенообразную, буравовидную форму тела, передний конецкоторогозаострен, азаднийпритуплён. Длинаих15–30 мкм, ширина – 1,5–3 мкм. Длинный жгутик, начинаясь в задней части тела, продолжается вперед, окаймляет ундулирующую мембрану

иоканчивается свободно за пределами тела. Ядро шаровидной или овальной формы находится в центре или передней части тела. Кинетопласт в форме диска располагается в задней части тела на некотором расстоянии от базального тельца. Размножение – бесполое, бинарное. Морфологически разные виды трипаносом идентичны, но различимы биологически.

150