учебное пособие по паразитологии

Т. evansi (Т. ninae kohl – yakimovi) – возбудительсу-ауру(сурра)

лошадей, ослов, верблюдов и многих других домашних и диких животных. Паразитирует внеклеточно в крови, лимфатических узлах и внутренних органах. Передается механически кровососущими насекомыми (слепнями и мухами-жигалками); заражение возможно лишь в интервале между актами кровососания слепней не более 6 часов.

Т. equiperdum – возбудитель случной болезни (подседал, дурина) лошадей, ослов и их помесей. Паразитирует в капиллярах слизистой оболочки половых путей, лимфе, в подкожной клетчатке и других частях тела. Заражение происходит во время случки, при искусственном осеменении, через предметы ухода.

Д и а г н о с т и к а. При су-ауру проводят микроскопию периферической крови. Методы исследования: раздавленная (или висячая) капля или тонкий мазок с последующей окраской. В каплях на затемненном поле микроскопа трипаносомы обнаруживаются по их подвижности в плазме среди массы эритроцитов. Капли крови необходимо оберегать от прямых лучей солнца, так как трипаносомы от действия света вскоре прекращают движение и через 15–20 минут погибают. В мазках, окрашенных по Романовскому – Гимза, цитоплазма трипаносом голубая, базальное тельце и жгутик рубиново-красного цвета, кинетопласт – темно-фиолетовый.

Трипаносомы при микроскопии легче обнаруживаются при повышении температуры тела животного. При хроническом течении и скрытых формах инвазии их можно не выявить. В таких случаях у лошадей, собак и верблюдов используют серологические методы исследования: РА, РСК, РИГА и РИФ.

Для диагностики су-ауру у верблюдов применяют формалиновую реакцию (неспецифическая проба). Для ее постановки берут кровь из вены, отстаивают 1–2 суток при комнатной температуре, затем 1 млсывороткипомещаютвпробиркуидобавляют2 капли40 %-ного формалина. Пробу взбалтывают, закрывают ватной пробкой и оставляют при той же температуре на двое суток. Положительной реакция считается, если исследуемая сыворотка приобретает плотную (как желе) консистенцию и при опрокидывании пробирки не стекает, сомнительной– еслисыворотказагустевшая, нопринаклонепробирки медленностекает, отрицательной– еслисывороткаосталасьбезизменений. Небудучиспецифической, «формалиноваяреакция» даетвозможность выявить не менее 90 % больных животных (подозритель-

151

ныхпозаболеваниюискрытыхносителейинвазии). Следуетиметьв виду, чтоэтареакцияможетоставатьсяположительнойот17 днейдо 4 месяцевпослелечения.

В необходимых случаях для индивидуальной и групповой диа- гностикису-ауруприменяютбиологическийметод: свежейкровью больного животного (лошади, верблюда) заражают мелких лабораторных животных и собак.

При случной болезни трипаносом обнаруживают в выделениях и соскобах слизистой мочеполовых органов. У жеребцов соскобы берут с уретры стерильной уретральной ложкой или ложкой Фолькмана с притуплёнными краями, а у кобыл – со слизистой вагины стерильным предметным стеклом. Собранную слизь (соскоб с некоторым количеством крови) без промедления исследуют в «раздавленнойкапле», безокраски, присреднемувеличениимикроскопа, отыскивая живых, подвижных трипаносом. Из соскобов также приготавливают тонкие мазки и исследуют после окрашивания по методу Романовского – Гимза.

Необходимо учитывать, что наибольшее количество трипаносом в мочеполовых путях обнаруживается на ранних стадиях болезни. В дальнейшем они кровью разносятся по всему организму, а попадая в подкожные ткани и кожу, вызывают рост характерных «талерных» бляшек. С их появлением при диагностике болезни исследуют пунктат (кровянисто-слизистое содержимое), который берут из краев бляшек.

Трипаносомы в периферической крови при случной болезни (в отличие от су-ауру) появляются редко и в небольшом количестве, поэтому кровь обычно не микроскопируют.

Из серологических методов для диагностики случной болезни используют РСК, РДСК и др. Они являются основными для выявления скрытых, бессимптомных форм болезни.

Семейство Trichomonadidae

Для трихомонад характерно наличие 4–6 жгутиков, из них 3–5 направлены вперед, 1 – назад. Ундулирующая мембрана ассоциирована со жгутиком, направленным назад. По продольной оси тела проходит аксостиль, имеющий вид плотного стержня. Различные

152

виды трихомонадид паразитируют у многих видов животных, человека, птиц и даже насекомых.

Род Tritrichomonas (Trichomonas). В данном роде наибольшее ветеринарное значение имеет возбудитель трихомоноза крупно-

го рогатого скота Tritrichomonas (Trichomonas) foetus (прил. 4,

рис. 22).

Формателаовальная, грушевиднаяиликруглая, размервпределах 10–25 мкм в длину и 5–10 мкм в ширину. От базального тельца (лежит в переднем конце тела) отходят 4 жгутика, из них 3 направлены вперед, а четвертый окаймляет ундулирующую мембрану и свободно оканчивается на заднем конце тела. Жгутики, как правило, длиннее самого паразита. Через все тело трихомонады проходитопорный(осевой) цилиндр– аксостиль, выдаваясьзаостренным концом сзади. Овальное ядро располагается в передней трети тела, по линии аксостиля. В протоплазме и аксостиле при окраске видны многочисленные хроматиновые гранулы и вакуоли.

Трихомонады паразитируют на слизистой оболочке влагалища, шейки и матки, в околоплодной жидкости и в плоде, у быков – в слизистой препуция, полового члена, в придаточных половых железах, семенниках. Питаются слизью, бактериями, форменными элементами крови, заглатывая их цитостомом.

Д и а г н о с т и к а. Материалом для исследования служат: вагинальные и маточные выделения, абортированный плод, плодовые воды и оболочки, выделения и смывы из препуция, сперма.

Истечения из родовых путей коров и из препуция быков можно собрать на стерильный ватный тампон с последующим отжимом содержимого в пробирку или на предметное стекло. Нередко при таком отборе пробы трихомонады теряют жгутики, принимают округлую форму, скопляются группами и даже инцистируются, вследствие чего затрудняется их диагностика.

Материал лучше брать путем орошения шейки матки и слизистой влагалища сильной струей физиологического раствора (из 10-миллиметрового шприца), под визуальным контролем при расширении влагалища акушерским зеркалом. Смыв собирают в бактериологическую чашку. В смыве содержится наибольшее количество трихомонад, что повышает достоверность результатов микроскопического исследования.

Дляисследованиябыковполучаютсмывысослизистойоболочки препуция и полового члена. Через катетер или резиновую труб-

153

ку в препуций вводят из шприца 5–10 мл физраствора. Зажимают кистью руки выход из препуция. После 3–5-минутного массажа задней части препуция из него выжимают раствор в чашку Петри. Дав несколько минут отстояться, берут пипеткой со дна каплю осадка для микроскопирования («раздавленная капля»).

Плодовые воды собирают пипеткой (или шприцом) в стерильную посуду. У абортированного плода берут выпот из грудной и брюшной полости, из сердечной сорочки, а из желудка – содержимое.

Для обнаружения живых трихомонад из полученного материала изготавливают 4–5 «раздавленных капель» и без промедления просматривают под микроскопом при увеличении 200–600 раз на затемненном поле зрения. Хорошо заметно движение трихомонад, колебания ундулирующей мембраны и жгутиков; мертвые паразиты теряют жгутики и форму. Если исследуют густую слизь, то ее разбавляют физиологическим раствором в 2–3 раза. При исследовании спермы каплю ее на предметном стекле смешивают с каплей, разведенной физиологическим раствором (1:500) уксусной кислоты: сперматозоиды погибают, трихомонады продолжают двигаться.

Тонкие фиксированные мазки окрашивают по Романовскому – Гимза. При микроскопии трихомонады представлены грушевидной и овальной формами, окрашены контрастно: протоплазма в сине-голубой цвет, а ядро в красно-рубиновый. При исследовании лучше пользоваться средним увеличением микроскопа и иммерсией, чтобы не пропустить мелкие формы паразитов.

В дифференциальном отношении необходимо отличать трихомонад от других жгутиковых, нередко обитающих в половых путяхкрупногорогатогоскота: онитакжеподвижны, норасполагают иным числом жгутиков и не имеют мембраны и аксостиля.

При скрытом течении трихомоноза прибегают к посевам исследуемого материала на различные питательные среды. Трихомонады лучше растут в анаэробных условиях. Использование культурального метода диагностики позволяет выявлять быков – трихомонадоносителей даже в том случае, когда тщательная микроскопия смывов, секрета и спермы была отрицательной.

154

Семейство Monocercomonadidae

В данном семействе 5 родов, видовой состав которых встречается и у животных, и у птиц. Но все они, за исключением гистомонад, не патогенны или патогенность их не установлена. Для них свойственно: наличие от 1 до 3 передних жгутиков, у многих отсутствует задний (рулевой) жгутик, отсутствует ундулирующая мембрана, аксостиль не выходит за пределы тела.

Род Histomonas. В нем один вид Н. meleagridis. Вызывает одноименное заболевание – гистомоноз. Болеют куры, индейки, цесарки, фазаны, куропатки, тетерева, перепелы (прил. 4, рис. 23).

Гистомонады полиморфны. В своем развитии проходят две стадии: жгутиковую и амебовидную. Жгутиковая – округлой формы, размером 5–30 мкм, типично наличие одного жгутика, но может быть и четыре, выходящие в виде пучка или врозь; локализуются в просвете слепых отростков кишечника. Амебовидная – от 8 до 17 мкм, не имеет жгутиков; локализуется в слизистой слепых отростков кишечника и печени. Гистомонады размножаются двойным делением.

Птицы инвазируются гистомонадами через загрязненные корм и воду, а также через яйца гельминтов Heterakis gallinarum, паразитирующих в слепых кишках. Яйца гетеракисов сохраняются во внешней средедогода(иболее), игистомонадывних неутрачивают свою вирулентность.

Д и а г н о с т и к а. Необходимо учитывать, что гистомонады в помете сохраняются всего несколько часов (не более 3–6). Втрупахгистомонадытакжебыстролизируются, поэтомусцелью диагностики материал необходимо брать от вынужденно убитых птиц.

Для обнаружения живых гистомонад материал (помет, соскобы с пораженных участков кишечника и его содержимое) исследуют в «раздавленной капле» в затемненном поле микроскопа при увеличении 10 × 40. Гистомонады обладают большой подвижностью за счет жгутиков и псевдоподий. Чтобы видеть амебовидных гистомонад с их характерным псевдоподийным передвижением, раздавленную каплю необходимо микроскопировать немедленно после ее приготовления на нагревательном столике при температуре 40–42 °С.

155

В нативном материале гистомонад необходимо дифференцировать от трихомонад и ооцист эймерий, которые паразитируют в кишечнике птиц. Гистомонады двигаются толчкообразно, по кругу, вращаясь вокруг своей оси, они не имеют ундулирующей мембраны; трихомонады двигаются поступательно плавно, без толчков, ундулирующая мембрана имеется. Ооцисты эймерий имеют овальную или яйцевидную форму, редко округлую; желтоватого цвета или бесцветные; оболочка двуконтурная, протоплазма зернистая, иногда на одном конце ооцисты имеется небольшое отверстие – микропиле.

Диагностическийматериалможноисследоватьвмазках,окрашенныхпоРомановскому– Гимза. Сцельювыявленияжгутиков длительность окрашивания должна быть не менее 2–3 часов. В мазке ядро и жгутики красноватого цвета, а цитоплазма голубая.

РЕСНИЧНЫЕ – ТИП CILIOPHORA (SYN. INFUSORIA)

Тело цилиофор покрыто оболочкой (пелликулой), обладает органоидами движения – ресничками. Подобно жгутикам у Mastigophora, реснички отходят от базальтовых зерен и покрывают тело частично или полностью. В отличие от остальных простейших цилиофоры имеют два ядра: большое – макронуклеус (Ма) и малое – микронуклеус (Ми). Почти всегда у одной особи – один Ма и один Ми; лишь у некоторых видов может быть два и более Ми.

Большинство цилиофор питается путем фаготрофии (через ротовой аппарат), реже – пиноцетоза. Пища переваривается в пищеварительных вакуолях, а непереваренные остатки удаляются через клеточный анус. Размножение осуществляется с участием полового процесса (конъюгации) или агамно – путем бинарного (на две равные части), реже множественного деления.

Цилиофоры – обширная и довольно разнородная группа простейших. В их составе свободноживущие (преимущественно планктоновые), паразитические и комменсальные. Последние, поселяясь на поверхности или внутри животных – хозяев, создают своеобразные биоценозы. Примером могут служить обитатели пищеварительного тракта – в рубце и сетке жвачных, в толстых киш-

156

ках других животных. Среди заболеваний, обусловленных паразитированием цилиофор, ветеринарно-медицинское значение имеет балантидиоз. Это единственное заболевание свиней и человека, вызываемое одним и тем же возбудителем.

Balantidium coli (syn. Balantidium suis). Балантидии обнаружи-

ваются в двух формах развития – в виде трофозоитов (вегетативная форма) и цист (прил. 4, рис. 24).

Трофозоиты. Форма тела овальная или яйцевидная, передний конец уже заднего. Размер варьирует в пределах 25–120 × 30–200 мкм. Поверхность пелликулы покрыта слегка наклонными рядами ресничек, с помощью которых они перемещаются. Макронуклеус почковидной формы, к нему вплотную прилегает микронуклеус. В цитоплазме – две сократительные и многочисленные пищеварительныевакуоли. Размножениепроисходитпоперечнымбинарным делением и конъюгацией.

Цисты. Балантидии, как и многие представители цилиофор, способны инцистироваться: трофозоит теряет реснички, покрывается плотной двуслойной оболочкой и преобразуется в неподвижную (спящую) стадию – цисту сферической или овоидной формы, 40–60 мкм в диаметре. Инцистированные балантидии, выделенные с фекалиями, сохраняют жизнеспособность при благоприятных условиях на протяжении нескольких недель.

В. coli – обычный комменсал, локализуется в толстом кишечнике домашних и диких свиней. Питается частичками содержимого кишечника, бактериями, грибами. Но при различных нарушениях функций желудочно-кишечного тракта балантидии переходят к тканевому паразитизму, поселяясь в толще кишечной стенки. Здесь, усиленно размножаясь, они вызывают разрушение и некроз ткани, образование язв; питаются продуктами воспалительного экссудата, клетками крови.

Д и а г н о с т и к а. Для прижизненной диагностики исследуют свежевзятое содержимое прямой кишки; предпочтительно пробу брать тупой пипеткой с резиновым баллончиком. Для посмертного диагнозаберутсоскобспораженныхучастковслизистойкишечника, егосодержимоеиисследуютвпервыечасыпослесмерти; через 5–6 часов обнаружить балантидии не удается (они лизируются).

Активные вегетативные формы балантидии исследуют в «раздавленнойкапле» инативноммазке, приготовляемыхизкаплисвежего теплого кишечного содержимого или из кусочка слизи. Если

157

они достаточно густы, то их разводят теплым физиологическим раствором. Препараты исследуют под микроскопом на нагревательном столике при 35–37°, так как при более низкой температуре простейшие теряют подвижность. Балантидии представляются в виде сравнительно крупных яйцевидных образований светложелтого цвета. Они находятся в непрерывном быстром движении, уходя за пределы поля зрения. Поэтому для обнаружения их выгоднее пользоваться малым увеличением микроскопа. Более детальное изучение производят при большом увеличении.

Для выявления инцистированных балантидий материал исследуют также в раздавленной капле и нативном мазке, но предварительно добавив в него люголевский раствор. Для приготовления препарата кусочек кишечной слизи размешивают в капле люголевского раствора, накрывают смесь покровным стеклом и через 5–10 минут рассматривают под микроскопом. Цисты имеют вид круглых образований с двуконтурной оболочкой, зернистой протоплазмой и находящимся в ней ядром (макронуклеусом).

Иногда прибегают к окраске нативных препаратов, используя различные краски и методы окрашивания. Это позволяет легко дифференцировать балантидии от других клеточных элементов содержимого пищеварительного тракта, поскольку живые балантидии не воспринимают краску, а другие элементы исследуемой массы, в том числе и мертвые балантидии, окрашиваются.

ПРОКАРИОТЫ – PROKARYOTA

Прокариоты – организмы, у которых отсутствует настоящее ядро с оболочкой, отделяющей его от протоплазмы. Они объединяют различные организмы – бактерии, микоплазмы, хламидии, актиномицеты, спирохеты, лептоспиры, риккетсии и большой ряд других примитивных групп организмов (их около 6 тыс.). В разговорном эквиваленте это микроорганизмы.

Долгое время исследователи ошибочно принимали некоторых эритроцитарных паразитов за простейших и описывали их как самостоятельные виды. Сомнения о систематическом положении таких организмов были развеяны электронной микроскопией, и они были исключены из системы Eukaryota.

158

Болезни, вызываемые различными видами представителей прокариот, по традиции изучаются в курсе протозоологии. Они включены в тип Protophyta. Среди них мы рассмотрим анаплазм, эгиптианелл и спирохет.

Семейство Anaplasmataceae

В данном семействе два рода: Anaplasma (паразиты млекопитающих) и Aegyptianella (паразиты птиц). Морфологические и биологические особенности этих кровепаразитов указывают на родство их с некоторыми представителями риккетсиеподобных организмов (тип Protophyta, отр. Rickettsiales).

Род Anaplasma. Это чрезвычайно мелкие паразиты крови величиной 0,2–1,2 мкм ( в зависимости от стадии развития). Локализуютсявэритроцитахкрупногоимелкогорогатогоскота. Имеютвид круглых коккоподобных образований, расположенных центрально или эксцентрично. В пораженных эритроцитах чаще бывает 1–2, реже 3–4 включения (прил. 4, рис. 9, 10).

Наряду с типичными округлыми формами анаплазмы в период деления могут быть кольцевидными, треугольными, гантеле- и кометоподобными, но эти формы выявляются, как правило, посредством фазово-контрастной и люминесцентной микроскопии.

При электронной микроскопии установлено, что анаплазмы состоят из 1–8 образований (инициальных тел), каждое из которыхсодержитбольшоеколичествосверхчастиц– полигедральных тел, диаметром 15–20 нмк. Инициальные и полигедральные тела (они близки к величине риккетсий) способны преодолевать бактериальные фильтры.

Возбудителями заболеваний являются 3 вида анаплазм.

A. marginale и A. centrale паразитируют у крупного рогатого скота (и некоторых видов жвачных из семейств полорогих, оленевых и верблюдовых). В эритроцитах окрашенных мазков крови анаплазмы обнаруживаются в виде фиолетово-синеватых или рубиновых включений размером 0,2–1,2 мкм. Паразиты располагаются у края эритроцита или в центре его; считают, что A. marginale имеет более 80 % краевых форм, a A. centrale – около

159

90 % центральных. Эритроциты содержат 1–2, реже 3–4 и более анаплазм.

A. ovis – паразитирует у овец, коз, архаров, сайгаков. Морфологически близка A. marginale, располагается по периферии эритроцита, эксцентрично или центрально. В эритроците 1–2, реже 3–4 паразита.

Анаплазмы переносятся многими видами кровососущих насекомых (слепни, мухи-жигалки, комары) и клещами из надсемейства Ixodoidea (22 вида). Насекомые являются механическими переносчиками и, притом в короткое время после питания (например, слепнями через 5–20 минут) на больном животном. Клещи переносят анаплазм трансовариально, трансфазно и при прерывистом питании.

Развитие анаплазм у животных и в клещах недостаточно изучено. Заражающей стадией являются инициальные тела, которые прорывают мембрану эритроцита и, оказавшись в циркулирующей крови, проникают в новые эритроциты; в эритроците инициальные тела репродуцируются простым делением в колонию из 8–10 подобных тел, окруженную паразитиформной вакуолью.

В кишечнике клещей анаплазмы, заглоченные с эритроцитами, распадаются на субмикроскопические образования (инициальные и полигедральные тела), которые в дальнейшем проникают в слюнные железы; пока не установлено, происходит ли увеличение количества анаплазм в клеще.

Диагностика. Дляобнаруженияанаплазмисследуютмазки крови, окрашенныепоРомановскому– Гимза. Приостромтечении болезнипаразитемиядостигает40–50 %, прихроническом1–10 %. Обращается внимание на качественные изменения состава крови – ониподобнытаковымприпироплазмидозах. Вдифференциальном отношении необходимо различать анаплазмоидные формы некоторых видов пироплазмид, базофильную зернистость эритроцитов и тельца Жолли; последние могут дифференцироваться и при специальных методах окрашивания. Разработаны и серологические методы диагностики – РА, РСК, РИФ.

Род Aegyptianella. В данном роде один вид – A. pullorum. По своей структурной организации эгиптианеллы близки к анаплазмам. Это эндоглобулярные паразиты птиц: кур, индеек, гусей, уток и некоторых диких птиц (прил. 4, рис. 26).

160